【摘要】：【目的】神經(jīng)調(diào)節(jié)素受體降解蛋白-1(neuregulin receptor degradation protein-1,Nrdp1)是一種E3泛素連接酶,主要負責調(diào)節(jié)各種細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的降解、細胞生長、凋亡和氧化應(yīng)激等病理過程。在以往研究中,我們證明了Nrdp1與缺血性心肌細胞凋亡有關(guān),但關(guān)于Nrdp1在缺血性腦損傷中的作用及機制目前尚不清楚。本研究旨在探討:缺血性神經(jīng)元中Nrdp1的表達變化及其在缺血性神經(jīng)元損傷中的作用�！痉椒ā课覀兺ㄟ^向大鼠原代大腦皮層神經(jīng)元和嗜鉻細胞瘤(pheochromocytoma,PC12)細胞轉(zhuǎn)染過表達和敲除Nrdp1的重組腺病毒調(diào)控細胞內(nèi)Nrdp1基因的表達,同時采用體外氧-葡萄糖剝奪(oxygen-glucose deprivation,OGD)和大腦中動脈閉塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型模擬缺血缺氧。【結(jié)果】通過以上實驗方法,我們發(fā)現(xiàn):(1)在大鼠MCAO 3小時或神經(jīng)元OGD 3小時后,Nrdp1在缺血性腦組織中表達上調(diào)。(2)過表達Nrdp1可促進OGD誘導神經(jīng)元凋亡,而敲低Nrdp1可減少神經(jīng)元凋亡,表明Nrdp1在缺血性神經(jīng)元損傷中具有重要作用。(3)在OGD處理的神經(jīng)元中,Nrdp1上調(diào)伴隨蛋白泛素化水平增加和泛素特異性蛋白酶8(ubiquitin-specific protease 8,USP8)的表達降低,且Nrdp1通過抑制USP8和缺氧誘導因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的相互作用,從而削弱了USP8對HIF-1α的去泛素化作用,最終導致HIF-1α的降解增多�！窘Y(jié)論】綜上所述,腦缺血后神經(jīng)元中的Nrdp1表達上調(diào),促進USP8泛素化降解,間接破壞了HIF-1α的穩(wěn)定性,最終加重神經(jīng)元缺氧性損傷;提示Nrdp1可作為缺血性腦卒中一種新的潛在治療靶點。
【圖文】：

性損傷密切相關(guān)。為確定 Nrdp1 是否在缺血性腦損傷中扮演著重要角色，先通過構(gòu)建大鼠 MCAO 模型，在大腦中動脈閉塞 3 小時后，分別檢測了 NA 和蛋白質(zhì)在大腦皮層中（即從大鼠 3 小時 MCAO 模型中分離出缺血側(cè)腦組織側(cè)腦組織）的表達情況。采用實時 RT-PCR 分析缺血/非缺血側(cè)大腦半球的 NA 表達，我們發(fā)現(xiàn)相比于非缺血側(cè)大腦皮層，3 小時 MCAO 處理可明顯誘導 NA 表達上調(diào)（1 倍）（圖 1A，P ＜ 0.05）；與 mRNA 變化一致的是，通過蛋印跡法發(fā)現(xiàn)缺血腦組織中的 Nrdp1 蛋白質(zhì)水平也明顯增加（圖 1B）；以上說明缺血可誘導大腦皮層中 Nrdp1 表達上調(diào)。這些結(jié)果證實在急性缺血性期，缺血腦組織中的 Nrdp1 蛋白表達水平可顯著上調(diào)，為進一步證明 Nrd元缺血性損傷中的作用及機制，本研究還采用體外缺血模型 OGD 進行下一

Nrdp1 蛋白水平明顯增加，而 OGD 處理 1 小時則無明顯變化（圖2B）。為進一步驗證上述發(fā)現(xiàn)，在相同的處理條件下，我們檢測了 Nrdp1 mRNA 和蛋白質(zhì)在 PC12 細胞中的表達情況。實時 RT-PCR 分析表明 PC12 細胞在 OGD 處理 3 小時和 6 小時后，，Nrdp1 mRNA 表達水平明顯增加，而 1 小時 OGD 處理組則無明顯變化（圖2C）；此外，PC12 細胞在 OGD 處理 6 小時后，Nrdp1 蛋白水平明顯增加，而 OGD 處理 1 小時或 3 小時的情況下則無明顯變化（圖 2D）。這些數(shù)據(jù)充分證明 OGD 可誘導大腦皮層神經(jīng)元及 PC12 細胞中的 Nrdp1 表達上調(diào)，并具有明顯的時間依賴性。
【學位授予單位】：廣州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R743.3

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本文編號：2702890