發(fā)布時(shí)間：2020-06-04 03:02

【摘要】：目的:缺血性腦卒中是全世界最主要的致殘性疾病和第二大致死性疾病,嚴(yán)重威脅著人類健康及生活質(zhì)量。短暫性腦缺血發(fā)作(transient ischemic attack,TIA)與缺血性腦卒中在溶栓時(shí)間窗內(nèi)難以鑒別。然而,其治療方法極為有限。發(fā)病后極早期靜脈溶栓或血管內(nèi)取栓是目前國(guó)際循證指南推薦的有效治療手段,但其治療時(shí)間窗窄,僅極少數(shù)病人獲益。提高患者靜脈溶栓或血管內(nèi)取栓比例的關(guān)鍵是在時(shí)間窗內(nèi)鑒別短暫性腦缺血發(fā)作(transient ischemic attack,TIA)與缺血性腦卒中。雖然不斷發(fā)展的影像診斷技術(shù),能在有限的治療時(shí)間窗內(nèi)證實(shí)TIA的診斷,但因其技術(shù)復(fù)雜和費(fèi)用高昂而使得這些技術(shù)難以普及。血液標(biāo)志物檢測(cè)具有非創(chuàng)傷性、快速及價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn),并已有大量血液標(biāo)志物被研究應(yīng)用于疾病的診斷或預(yù)后判斷等,然而針對(duì)TIA診斷的血液外泌體源性miRNA標(biāo)志物迄今未見(jiàn)報(bào)道。為此,我們將探討血漿外泌體源性rno-miR-122-5p和rno-miR-300-3p在大鼠短暫性腦缺血發(fā)作中的潛在診斷價(jià)值。方法:通過(guò)阻塞大腦中動(dòng)脈,建立5 min、10 min、2 h時(shí)的大鼠腦缺血模型,并設(shè)置假手術(shù)組進(jìn)行對(duì)照。使用HE染色法和TUNEL染色法,對(duì)腦組織缺血受損程度進(jìn)行評(píng)估。通過(guò)試劑盒提取大鼠血漿和腦脊液的外泌體以及外泌體源性RNA,運(yùn)用透射電子顯微鏡、Nanosight檢測(cè)、免疫印跡試驗(yàn)對(duì)提取出來(lái)的外泌體進(jìn)行檢測(cè)。利用深度測(cè)序技術(shù)尋找在大鼠腦脊液和血漿中表達(dá)趨勢(shì)一致的外泌體源性miRNA,并運(yùn)用qRT-PCR方法加以驗(yàn)證。采用單因素方差分析Games-Howell檢驗(yàn)方法對(duì)不同分組中的血漿外泌體源性miRNA表達(dá)量進(jìn)行比較,并通過(guò)ROC曲線評(píng)價(jià)這些mi RNA作為診斷大鼠短暫性腦缺血發(fā)作標(biāo)志物的價(jià)值。結(jié)果:采用試劑盒成功從大鼠血漿和腦脊液中提取出外泌體,腦脊液外泌體顆粒大小峰值為123.7 nm,血漿外泌體顆粒大小峰值為148.1 nm;免疫印跡試驗(yàn)可以檢測(cè)出外泌體特異性標(biāo)記蛋白HSP70和CD63,均符合經(jīng)典外泌體的標(biāo)準(zhǔn)。通過(guò)深度測(cè)序和qRT-PCR技術(shù)篩選出rno-miR-122-5p、rno-miR-300-3p作為大鼠短暫性腦缺血發(fā)作的生物標(biāo)志物。與假手術(shù)組和腦缺血5 min組的大鼠相比,腦缺血10 min的大鼠其血漿外泌體源性rno-miR-122-5p的表達(dá)顯著下調(diào)。而與假手術(shù)組、腦缺血10 min組和腦缺血2 h組的大鼠相比,腦缺血5 min的大鼠其血漿外泌體源性rno-miR-300-3p的表達(dá)顯著上調(diào)。并且這兩個(gè)外泌體源性miRNA在血漿和腦脊液中是存在相關(guān)性的(rno-miR-122-5p:R=0.632,P0.005;rno-miR-300-3p:R=0.719,P0.001)。ROC曲線分析結(jié)果顯示:與假手術(shù)組相比,rno-miR-122-5p和rno-miR-300-3p分別在腦缺血10 min、5 min的大鼠展現(xiàn)出了極高的診斷價(jià)值,其ROC曲線下面積分別為0.960和0.970。結(jié)論:本研究成功分離出大鼠血漿、腦脊液中的外泌體;通過(guò)大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞模型(缺血5分鐘、10分鐘)成功模擬短暫性腦缺血發(fā)作;血漿外泌體源性miRNA-122-5p和miR-300-3p有可能成為診斷大鼠短暫性腦缺血發(fā)作的一種潛在生物標(biāo)志物。
【圖文】：

Fig. 1: (A) Representative histopathologic findings in the frontoparietal cortex are shown by TUNELstaining. (B) TUNEL-positive cell ratios of different ischaemia groups (*P<0.001 VS sham; #P<0.001 VS 5min ischaemia group; &P<0.001 VS 10 min ischaemia group)

Fig. 1: (A) Representative histopathologic findings in the frontoparietal cortex are shown by TUNELstaining. (B) TUNEL-positive cell ratios of different ischaemia groups (*P<0.001 VS sham; #P<0.001 VS 5min ischaemia group; &P<0.001 VS 10 min ischaemia group)
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R743.31

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2695792