本文關(guān)鍵詞：魚藤酮皮膚吸收后對(duì)大鼠腦部神經(jīng)遞質(zhì)的影響及巴戟天保護(hù)作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本研究的目的是采用透皮給藥法建立帕金森(Parkinson’s disease,PD)病模型,并與腹腔注射給藥法建模后的大鼠進(jìn)行比較。以行為學(xué)、免疫組織化學(xué)、生物化學(xué)指標(biāo)作,研究魚藤酮透皮給藥后藥物濃度對(duì)大鼠腦部神經(jīng)遞質(zhì)的影響;以及中藥巴戟天對(duì)魚藤酮損傷的大鼠神經(jīng)保護(hù)作用。本研究的行為學(xué)指標(biāo)采用體重檢測(cè)、姿態(tài)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)、前肢力量實(shí)驗(yàn)、第一步啟動(dòng)時(shí)長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)、自主站立實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行研究。免疫組織化學(xué)指標(biāo)是對(duì)腦部紋狀體酪氨酸羥化酶(Tyrosine Hydroxylase,TH)與炓質(zhì)致密部(Substantia Nigra compacta,SNc)α-突觸蛋白的表達(dá)進(jìn)行研究。生物化學(xué)指標(biāo)采用腦部微透析對(duì)大鼠的腦部神經(jīng)遞質(zhì)進(jìn)行采樣,并使用高效液相色譜儀-電化學(xué)檢測(cè)器(HPLC-ECD)對(duì)二羥苯乙酸(Dihydroxy phenyl acetic acid,DOPAC)、多巴胺(Dopamine,DA)、高香草醛(Herpes virus ateles,HVA)三種神經(jīng)遞質(zhì)進(jìn)行含量測(cè)定,比較透皮給藥與腹腔注射給藥后神經(jīng)遞質(zhì)變化的異同;比較巴戟天給藥后神經(jīng)遞質(zhì)的變化,研究其對(duì)腦神經(jīng)的保護(hù)作用。主要結(jié)果如下:1、行為學(xué)指標(biāo)結(jié)果:魚藤酮2.5 mg/d組(低劑量組)、魚藤酮5.0 mg/d組(中劑量組)、魚藤酮10.0 mg/d組(高劑量組)大鼠在魚藤酮透皮給藥30 d后,與對(duì)照組分別進(jìn)行組間兩兩比較:體重檢測(cè)結(jié)果顯示,低、中、高三個(gè)劑量組的體重分別為357.13±21.33 g、358.73±12.20 g、339.77±27.92 g,與空白對(duì)照組體重(367.7±20.56g)相比,均無明顯變化(P0.05);但均顯著高于注射對(duì)照組(9.15±0.05 g,P0.01)。姿態(tài)穩(wěn)定性結(jié)果顯示:低、中、高三個(gè)劑量組的跨步距離分別為8.73±0.05cm、8.47±0.12 cm、7.13±0.05 cm,均較空白對(duì)照組(6.6±0.08 cm)顯著降低(P0.01),且高劑量組顯著低于注射對(duì)照組(37.50±0.50 cm,P0.01)。前肢力量結(jié)果顯示:低、中、高三個(gè)劑量組的板與地面夾角分別為34.67±1.25°、31.00±2.16°、31.33±1.25°,較空白對(duì)照組(41.00±0.82°)顯著降低(P0.01);且中、高劑量組顯著低于注射對(duì)照組(37.50±0.50°,P0.01)。第一步啟動(dòng)時(shí)長(zhǎng)結(jié)果顯示:低、中、高劑量組的時(shí)長(zhǎng)分別為10.83±2.27 s、12.90±2.22 s、14.40±0.82s,與空白劑量組(6.60±0.57 s)相比顯著延長(zhǎng)(P0.01);與注射對(duì)照組(9.90±0.01s)相比無明顯差異(P0.05)。自主站立次數(shù)結(jié)果顯示:低、中、高劑量組分別為19.67±3.77次、21.67±4.03次、21.67±3.40次,與空白對(duì)照組(24.3±2.87次)和注射對(duì)照組(15.0±2.00次)相比,均無明顯差異(P0.05)。結(jié)果顯示,魚藤酮給藥30 d后,皮膚給藥組隨著魚藤酮?jiǎng)┝康脑龃?大鼠的姿態(tài)穩(wěn)定性、前肢力量逐漸減弱,第一步啟動(dòng)時(shí)長(zhǎng)逐漸升高。2、免疫組織化學(xué)指標(biāo)結(jié)果:30 d給藥后,低、中、高劑量組TH免疫組化組織切片平均光密度結(jié)果分別為0.133±0.001、0.151±0.005、0.126±0.005,與空白對(duì)照組(0.185±0.004)相比,光密度均顯著降低(P0.01);與腹腔對(duì)照組(0.131±0.004)相比,高、中劑量組的平均光密度值顯著降低(P0.01)。魚藤酮10.0 mg/d透皮20 d組(0.147±0.003)、30 d組(0.120±0.005)與0 d組(0.184±0.004)相比,平均光密度均顯著降低(P0.01),10 d組(0.172±0.005)差異較弱(P0.05)。結(jié)果顯示透皮給藥組大鼠的TH表達(dá)量均明顯低于正常大鼠。此外,病理組織切片結(jié)果顯示,各處理組SNc中均出現(xiàn)α-突觸蛋白聚合體。3、生物化學(xué)指標(biāo)結(jié)果大鼠透皮單次給藥:大鼠皮膚單次給藥(劑量為10 mg/d/只),其24 h內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)在240 min時(shí)變化明顯,兩種神經(jīng)遞質(zhì)DOPAC和HVA均降低,分別從0.88±0.09μg/m L降至0.33±0.13μg/m L,0.65±0.21μg/m L降至0.52±0.13μg/ml;而DA不降反升,從0.40±0.11μg/m L升至0.46±0.24μg/ml。(DOPAC+HVA)/DA的比值從給藥前3.78±2.35下降至1.84±1.56,并于240 min后趨于平穩(wěn)。大鼠透皮多次給藥:魚藤酮透皮給藥30 d后,低、中、高劑量組細(xì)胞外液中DA濃度分別為:0.57±0.02μg/m L、0.49±0.06μg/m L、0.72±0.01μg/m L,與空白對(duì)照組(0.49±0.14μg/m L)和注射對(duì)照組(0.47±0.07μg/m L)相比無明顯差異。DOPAC濃度分別為:0.77±0.11μg/m L、0.68±0.10μg/m L、1.58±0.15μg/m L,其中僅有高劑量組較空白對(duì)照組(0.58±0.11)升高(P0.05),且也明顯高于注射對(duì)照組(0.33±0.39,P0.01)。HVA濃度分別為:1.50±0.14μg/m L、0.98±0.17μg/m L、1.39±0.15μg/m L,與空白對(duì)照組(0.45±0.05μg/m L)和注射對(duì)照組(0.30±0.07μg/m L)相比,低、高劑量組明顯較高(P0.01),而中劑量組則差異性較弱(P0.05)。多巴胺代謝系數(shù)(DOPAC+HVA)/DA顯示,僅有高劑量組(4.33±0.43)與空白對(duì)照組(2.28±0.74),注射對(duì)照組(1.43±0.16)存在顯著差異(P0.05),而其余劑量組與空白對(duì)照組和注射對(duì)照組想比均無明顯差異。魚藤酮10 mg/d透皮給藥10 d組的DA細(xì)胞外液濃度(2.40±0.67μg/mL)要顯著高于0 d組(0.49±0.14μg/m L),而20 d(0.33±0.02μg/m L)、30 d組(0.72±0.01μg/m L)則與0 d組無明顯差異。另外,DOPAC和HVA方面僅有30d組(DOPAC:1.56±0.17μg/m L,HVA:1.39±0.16μg/m L)與0 d組(0.58±0.11μg/m L,0.45±0.05μg/m L)相比存在明顯差異(P0.01),其余組與0 d差異不明顯。10 d組多巴胺代謝系數(shù)(DOPAC+HVA)/DA(0.43±0.22)要明顯低于0 d組(2.28±0.74,P0.01);僅有30 d(7.50±0.25)組比0 d組較高(P0.05),呈現(xiàn)明顯的DA代謝紊亂。4、巴戟天對(duì)魚藤酮神經(jīng)損害的保護(hù)作用研究結(jié)果與空白對(duì)照組分別進(jìn)行組間兩兩比較,10.0 g/d組的DA(0.94±0.02μg/m L)明顯高于空白對(duì)照組(0.49±0.14,P0.01),而其余組與空白對(duì)照組差異不明顯。與0.0 g/d相比,三個(gè)劑量組的DA均明顯較高(P0.01)。而DOPAC和HVA方面,2.0 g/d組(DOPAC:0.13±0.08μg/m L,HVA:0.23±0.01μg/m L)、10.0 g/d組(DOPAC:0.23±0.04μg/m L,HVA:0.28±0.016μg/m L)與空白對(duì)照組(DOPAC:0.58±0.11μg/m L,HVA:0.45±0.05μg/m L)和0.0 g/d組(DOPAC:1.58±0.15μg/m L,HVA:1.39±0.15μg/m L)相比,均存在明顯差異(P0.01),而6.0 g/d組(DOPAC:0.40±0.01μg/m L,HVA:0.38±0.04μg/m L)較空白對(duì)照組顯著性較弱(P0.05),較0.0 g/d組較強(qiáng)(P0.01)。10.0 g/d組和2.0 g/d組(DOPAC+HVA)/DA分別為:0.55±0.14、1.06±0.17,顯著低于0.0 g/d組(2.68±0.67)和空白對(duì)照組(2.28±0.74),而6.0 g/d組(2.11±0.36)與0.0 g/d組相比差異性較弱(P0.05),與空白對(duì)照組相比差異性較強(qiáng)(P0.01)。本研究顯示,魚藤酮10 mg/d透皮給藥30 d可對(duì)大鼠的神經(jīng)遞質(zhì)造成明顯的類PD損傷,且較魚藤酮腹腔注射(3 mg/d/kg)給藥法的損傷效果更穩(wěn)定,死亡率更低。另外,給予了10.0 g/d巴戟天的大鼠,其DA代謝水平更接近于正常大鼠。
【關(guān)鍵詞】：魚藤酮 帕金森 腦部微透析 神經(jīng)遞質(zhì)
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R742.5
【目錄】：

• 摘要3-6
• abstract6-12
• 1 前言12-16
• 2 材料與方法16-25
• 2.1 材料16-17
• 2.1.1 魚藤酮、巴戟天與大鼠16
• 2.1.2 腦部微透析設(shè)備與試劑16-17
• 2.1.3 免疫組化設(shè)備與試劑17
• 2.2 魚藤酮與巴戟天給藥方法17-18
• 2.2.1 魚藤酮腹腔注射劑的制備與給藥方法17-18
• 2.2.2 魚藤酮乳油的制備與皮膚給藥方法18
• 2.2.3 巴戟天水提液的制備與給藥方法18
• 2.3 大鼠行為學(xué)研究18-20
• 2.3.1 體重研究18
• 2.3.2 姿態(tài)穩(wěn)定性研究18-19
• 2.3.3 前肢力量研究19
• 2.3.4 第一步啟動(dòng)時(shí)長(zhǎng)研究19
• 2.3.5 自主站立研究19-20
• 2.4 免疫組化研究20-21
• 2.4.1 動(dòng)物灌注固定取材--大腦免疫組化檢測(cè)20
• 2.4.2 組織石蠟包埋與切片20
• 2.4.3 免疫組織化學(xué)染色程序20-21
• 2.4.4 影像學(xué)分析21
• 2.5 生物化學(xué)研究21-24
• 2.5.1 腦部微透析探針導(dǎo)管的埋置21-22
• 2.5.2 探針預(yù)處理與保存方法22-23
• 2.5.3 使用微透析設(shè)備對(duì)大鼠腦中的多巴胺及其代謝物進(jìn)行收集23-24
• 2.5.4 探針回收率研究24
• 2.5.5 使用HPLC-ECD法測(cè)定透析液中多巴胺及其代謝產(chǎn)物的含量24
• 2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析24-25
• 3 結(jié)果與分析25-45
• 3.1 魚藤酮透皮給藥對(duì)大鼠死亡率的影響25
• 3.2 行為學(xué)結(jié)果與分析25-31
• 3.2.1 體重監(jiān)測(cè)結(jié)果25-26
• 3.2.2 姿態(tài)穩(wěn)定性研究結(jié)果26-27
• 3.2.3 前肢力量研究結(jié)果27-28
• 3.2.4 靜止啟動(dòng)第一步耗時(shí)研究結(jié)果28-30
• 3.2.5 自主站立研究結(jié)果30-31
• 3.3 免疫組織化學(xué)結(jié)果與分析31-36
• 3.3.1 透皮給藥與腹腔注射給藥TH免疫組化光密度的結(jié)果31-33
• 3.3.2 透皮給藥天數(shù)TH免疫組化光密度的結(jié)果33-34
• 3.3.3 α-syn免疫組化結(jié)果34-36
• 3.4 生物化學(xué)結(jié)果與分析36-43
• 3.4.1 腦部微透析探針回收率結(jié)果36-37
• 3.4.2 透皮給藥（24 h）對(duì)大鼠腦部紋狀體神經(jīng)遞質(zhì)的變化37-39
• 3.4.3 透皮給藥與腹腔注射給藥大鼠腦部紋狀體細(xì)胞外液中神經(jīng)遞質(zhì)的變化39-41
• 3.4.4 透皮給藥天數(shù)與大鼠腦部紋狀體細(xì)胞外液中神經(jīng)遞質(zhì)的變化41-43
• 3.5 巴戟對(duì)魚藤酮腦神經(jīng)損傷的保護(hù)作用研究43-45
• 4 討論45-51
• 4.1 透皮給藥與腹腔注射給藥的大鼠PD模型45-49
• 4.1.1 行為學(xué)指標(biāo)46-47
• 4.1.2 免疫組織化學(xué)指標(biāo)47
• 4.1.3 生物化學(xué)指標(biāo)47-49
• 4.2 巴戟天對(duì)大鼠PD模型的神經(jīng)保護(hù)作用49-51
• 5 結(jié)論51-52
• 致謝52-53
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 附錄A HPLC-ECD色譜圖57-74
• 附錄B 儀器74-75

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張鵬;陳地靈;林勵(lì);林輝;鄧韜;吳俊生;;巴戟天水提液對(duì)自然衰老小鼠腦組織中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2014年06期

2 譚文瀾;;中醫(yī)藥治療帕金森病研究進(jìn)展[J];實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志;2012年08期

3 王默然;;帕金森病的中醫(yī)藥治療概況[J];中醫(yī)雜志;2012年12期

4 熊s，

本文編號(hào)：268292