【摘要】：目的:多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)是目前最常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性腫瘤,可發(fā)生于任何年齡,約占所有顱內(nèi)腫瘤的15%,具有惡性程度高、侵襲性強(qiáng)的特性。同時(shí),GBM具有高度異質(zhì)性,預(yù)后極差,臨床上針對(duì)特定分子靶標(biāo)或亞型進(jìn)行精準(zhǔn)診療尤為重要。轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-βTGF-β)信號(hào)途徑通過其腫瘤抑制或促進(jìn)機(jī)制在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起重要作用。近年來,有研究提出TGF-β通過microRNA(miRNA)調(diào)節(jié)影響信號(hào)傳導(dǎo)過程。miRNA與TGF-β信號(hào)通路之間存在自動(dòng)調(diào)節(jié)的反饋環(huán)路,通過相互調(diào)節(jié)作用關(guān)系影響著腫瘤細(xì)胞的生物進(jìn)程。我們利用轉(zhuǎn)化生長因子-β受體(transforming growth factor-βreceptor,TGF-βR)小分子抑制劑對(duì)新鮮切除的臨床組織樣本進(jìn)行藥物處理,利用高通量測序的方法比較了加藥處理組和對(duì)照組間miRNA表達(dá)譜的差異。在測序結(jié)果中我們意外地發(fā)現(xiàn)了部分新型miRNA,并在處理和對(duì)照組之間存在顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。本研究旨在對(duì)所發(fā)現(xiàn)的顯著差異的新型miRNA進(jìn)行篩選鑒定,闡明一新型miRNA在TGFβ信號(hào)傳導(dǎo)通路調(diào)控間的關(guān)系以及在膠質(zhì)瘤中的作用。研究方法:利用高通量測序結(jié)合stem-loop qRT-PCR(莖環(huán)法引物設(shè)計(jì))和生物信息學(xué)方法對(duì)新型miRNA進(jìn)行驗(yàn)證和分析�；谌四X膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞系U87、原代細(xì)胞和膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的PDX小鼠模型,通過靶基因生物信息學(xué)分析預(yù)測和雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)、qRT-PCR及Western blot篩選驗(yàn)證靶基因,經(jīng)模擬物(mimics)或慢病毒轉(zhuǎn)染進(jìn)行體外功能機(jī)制研究和體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。研究結(jié)果:1.在測序結(jié)果分析中我們發(fā)現(xiàn)在相應(yīng)的處理組和對(duì)照組間有27個(gè)新型miRNA表達(dá)存在顯著差異,通過stem-loop qRT-PCR驗(yàn)證篩選出novel_miR 56作為新型miRNA具有顯著差異且受TGF-β通路調(diào)控。2.通過靶基因預(yù)測并分析novel_miR 56可能參與的生物學(xué)進(jìn)程,綜合分析我們篩選出了PRAS40作為novel_miR 56的可能靶mRNA。通過下游靶基因相關(guān)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,我們發(fā)現(xiàn)在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中,novel_miR 56可通過與野生型PRAS40 mRNA的3`UTR特異性結(jié)合,調(diào)控PRAS40的mRNA和蛋白水平變化,從而證實(shí)了PRAS40是novel_miR 56的天然靶基因。3.體外增殖實(shí)驗(yàn)顯示novel_miR 56過表達(dá)促進(jìn)腫瘤的生長,并通過mTOR信號(hào)通路作用于細(xì)胞自噬并影響增殖。4.體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,novel_miR 56過表達(dá)組較對(duì)照組的腫瘤大小及增長速度明顯增加,生存時(shí)間短。免疫組化結(jié)果顯示novel_miR 56過表達(dá)組具有更高的惡性程度,novel_miR 56促進(jìn)了腫瘤的發(fā)展。結(jié)論:我們的研究結(jié)果驗(yàn)證了在膠質(zhì)瘤中,novel_miR 56作為oncomiR起作用,我們確定了TGFβ-novel_miR 56途徑的下游靶標(biāo)是PRAS40 mRNA,其翻譯蛋白是mTOR激酶的負(fù)調(diào)節(jié)因子,通過mTOR信號(hào)通路進(jìn)而影響細(xì)胞自噬。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均表明novel_miR 56在減弱細(xì)胞自噬水平后促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞增殖。同時(shí),我們的研究也提供了一種新的機(jī)制來解釋TGFβ信號(hào)傳導(dǎo)在膠質(zhì)瘤中的促癌作用。
【圖文】：

25通量測序 miRNA 差異表達(dá)分析結(jié)果（綠色圓點(diǎn)代表顯著圓點(diǎn)為顯著上調(diào)基因，灰色圓點(diǎn)為差異無顯著性基因）證，我們選取差異顯著下調(diào)的 7 個(gè)新型 miRNA（noovel_miR68、novel_miR93、novel_miR97、novel_miR116、noqRT-PCR 技術(shù)進(jìn)行驗(yàn)證，并比較所選 novel_miRs 在各個(gè)細(xì)我們發(fā)現(xiàn)最終有 5 個(gè)新型 miRNA（novel_miR26、noovel_miR97、novel_miR119）被檢測到，其中 novel_miR56、n較高（見圖 2-2）。

圖 2-2 不同細(xì)胞系（株）中各 miRNA 的相對(duì)表達(dá)豐 miRNA 的測序結(jié)果，，我們采用與測序樣本相同的處09761 對(duì)細(xì)胞進(jìn)行藥物處理，通過對(duì) U87、N9、LN22loop qRT-PCR 驗(yàn)證結(jié)果的分析發(fā)現(xiàn)只有 novel_miR56中的變化趨勢與測序結(jié)果一致，而 novel_miR26、不同細(xì)胞間驗(yàn)證結(jié)果差異較大（見圖 2-3）。
【學(xué)位授予單位】：河北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R739.4

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 胡建宏;王茂林;潘亞文;;高遷移率族蛋白B1在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用及其機(jī)制研究[J];國際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志;2019年02期

2 楊海霞;李曉鳴;;外泌體與膠質(zhì)瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J];臨床與病理雜志;2017年11期

3 秦麗娟;賈永森;趙喜慶;張?zhí)?張偉;孫娜;;鴉膽子油乳注射液對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲性的影響及其可能機(jī)制[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2016年03期

4 齊玲;徐俊杰;紀(jì)朋艷;呂士杰;韓磊;王瑋瑤;;西蘭花多肽抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長的機(jī)制研究[J];中國藥學(xué)雜志;2014年12期

5 萬政強(qiáng);陳晨;伏林山;孫關(guān);;吡格列酮對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長的抑制研究[J];東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年01期

6 李嗍,王楓,繆珊,駱文靜;過量鋅對(duì)鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞體外生長的影響[J];解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2001年04期

7 楊偉廉,王堯,韋永新,阮長耿,杜子威;抗膠質(zhì)瘤細(xì)胞單克隆抗體SZ-38及其識(shí)別抗原的生化特征[J];生物化學(xué)雜志;1988年06期

8 斯可哉;;在體外和體內(nèi)用利血平調(diào)節(jié)C_6膠質(zhì)瘤細(xì)胞亞系對(duì)ACNU的抗藥性[J];國外醫(yī)學(xué)(腫瘤學(xué)分冊);1988年02期

9 楊偉廉;抗膠質(zhì)瘤細(xì)胞單克隆抗體SZ—38及其識(shí)別抗原的生化特征[J];蘇州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1989年01期

10 李方園;高翼之;王世浚;;四種人癌基因在腦瘤中的擴(kuò)增和重排(摘要)[J];鐵道醫(yī)學(xué);1989年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 楊鵬宇;李強(qiáng);張建生;;雷帕霉素聯(lián)合尼莫司汀抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的研究[A];2011中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

2 俞文華;車志豪;張祖勇;許培源;陸鏞民;傅林;朱強(qiáng);陳鋒;杜權(quán);;骨橋蛋白在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)及其信號(hào)傳導(dǎo)途徑[A];2005年浙江省神經(jīng)外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

3 潘冬生;;多基因修飾膠質(zhì)瘤細(xì)胞疫苗的抗腫瘤免疫反應(yīng)[A];中國醫(yī)師協(xié)會(huì)神經(jīng)外科醫(yī)師分會(huì)第六屆全國代表大會(huì)論文匯編[C];2011年

4 張玉寶;孫金龍;孟祥靖;魏麟;劉廣存;崔友強(qiáng);;膠質(zhì)瘤細(xì)胞中VEGF、MMP-2、MMP-9的表達(dá)及臨床觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

5 趙世光;;膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期動(dòng)力學(xué)研究[A];中國醫(yī)師協(xié)會(huì)神經(jīng)外科醫(yī)師分會(huì)成立大會(huì)資料匯編[C];2004年

6 張瑞;胡佩珊;臧清策;岳小飛;周幟;徐曉宇;韓為;張瑞萍;再帕爾·阿不力孜;;基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞代謝組學(xué)分析[A];中國化學(xué)會(huì)第十一屆全國生物醫(yī)藥色譜及相關(guān)技術(shù)學(xué)術(shù)交流會(huì)（大會(huì)特邀報(bào)告及墻報(bào)）論文摘要集[C];2016年

7 宋楊英;劉英姿;單保恩;;IL-18基因轉(zhuǎn)染對(duì)大鼠9L膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長特性的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)管理專業(yè)委員會(huì)第六屆全國臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

8 楊孔賓;趙世光;劉炳學(xué);陳曉豐;戴欽舜;;K~+通道阻斷劑四乙胺對(duì)大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和凋亡影響[A];中國醫(yī)師協(xié)會(huì)神經(jīng)外科醫(yī)師分會(huì)第四屆全國代表大會(huì)論文匯編[C];2009年

9 李格;黃益玲;;MiR-19a靶向LRIG1對(duì)腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的影響[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)第十二屆全國會(huì)員代表大會(huì)暨2018年全國學(xué)術(shù)會(huì)議摘要集[C];2018年

10 李子超;姜東伯;楊舒雅;王靜;孫元杰;趙國慶;楊琨;;B細(xì)胞受體相關(guān)蛋白31對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞行為的影響[A];第十一屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)摘要匯編[C];2016年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前2條

1 特約記者 李岳冰;中國膠質(zhì)瘤放療專家共識(shí)發(fā)布[N];健康報(bào);2018年

2 張獻(xiàn)懷　張文;瘤區(qū)埋雷 持續(xù)殺傷[N];健康報(bào);2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 孫超;消癌解毒方中有效成分抗腫瘤的作用機(jī)制研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2019年

2 封林森;miR-330-5p靶向ITGA5抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的惡性表型及其機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2019年

3 苗發(fā)安;DKC1在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響及機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2019年

4 張開鑫;MiR-940通過MTHFD2基因影響膠質(zhì)瘤細(xì)胞的代謝、增殖和侵襲能力及其機(jī)制的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2019年

5 常成岳;TRIM37在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及對(duì)膠質(zhì)細(xì)胞生物學(xué)影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2019年

6 肖瑾;多模態(tài)MRI在人腦膠質(zhì)瘤病理分級(jí)、基因型及其預(yù)后評(píng)估中的應(yīng)用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2018年

7 尤昕;Nexilin表達(dá)下調(diào)對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及機(jī)制研究[D];延邊大學(xué);2015年

8 鄧鑫;HAX-1蛋白通過Akt1通路對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和調(diào)亡的影響及機(jī)制研究[D];鄭州大學(xué);2018年

9 唐純海;miR-130a調(diào)控靶基因HMGB2抑制膠質(zhì)瘤增殖和EMT的分子機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

10 孫瑾;MiR-152-3p靶向調(diào)控DNMT1-NF2通路與膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡、侵襲機(jī)制的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 宋亞男;炎癥對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中線粒體生物學(xué)性能的影響[D];鄭州大學(xué);2019年

2 譚呼;膠質(zhì)瘤患者血清MAGE-D4蛋白和抗體的檢測及臨床意義分析[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

3 鄔慧賢;miR-200a靶向抑制MAGED4及其對(duì)膠質(zhì)瘤遷移侵襲的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

4 王修成;人腦膠質(zhì)瘤組織中IDH-1和MGMT的表達(dá)及相關(guān)性研究[D];鄭州大學(xué);2019年

5 劉暢;膠質(zhì)瘤中啟動(dòng)子甲基化和轉(zhuǎn)錄因子Sp1對(duì)MAGE-D4的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

6 吳明娜;ATF5在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及預(yù)后意義[D];遵義醫(yī)科大學(xué);2019年

7 古禹;Per2基因過表達(dá)對(duì)U87膠質(zhì)瘤干細(xì)胞放療敏感性影響的研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2019年

8 郭忠yN;膠質(zhì)瘤分子標(biāo)志物IDH1、MGMT和Ki-67與預(yù)后關(guān)系的研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2019年

9 馬寧飛;導(dǎo)航輔助波譜與病理結(jié)合指導(dǎo)功能區(qū)膠質(zhì)瘤切除及術(shù)后放化療[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2019年

10 仇誠;MicroRNA-155在膠質(zhì)瘤中的作用及其機(jī)制[D];南京醫(yī)科大學(xué);2019年

本文編號(hào)：2676409