本文關(guān)鍵詞：用siRNA脂質(zhì)體行Survivin和VEGF雙把點基因下調(diào)可增強U251細胞凋亡，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 探討以survivin和VEGF為雙靶點的siRNA轉(zhuǎn)染對神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細胞的體外效應(yīng)。方法分別合成針對survivin和VEGF的siRNA。培養(yǎng)膠質(zhì)瘤U251細胞,用脂質(zhì)體包裹survivin-siRNA和/或VEGF-siRNA并轉(zhuǎn)染至U251細胞。實驗共分5組：S組：轉(zhuǎn)染survivin-siRNA,V組：轉(zhuǎn)染VEGF-siRNA,SV組轉(zhuǎn)染：survivin-siRNA+VEGF-siRNA,NC組：陰性對照(Negative Control,NC)轉(zhuǎn)染無關(guān)序列-siRNA,BC組：空白對照(Blank Control,BC)轉(zhuǎn)染空白脂質(zhì)體。用熒光實時定量PCR和Western Blot分別檢測轉(zhuǎn)染后survivin及VEGF在mRNA及蛋白水平的表達。用CCK-8及流式細胞術(shù)分別檢測U251細胞增殖和凋亡。結(jié)果1.通過熒光實時定量PCR和Western Blot檢測結(jié)果顯示：在轉(zhuǎn)染siRNA48h后,S組和SV組的survivin mRNA和蛋白的表達均顯著下調(diào),與NC組、BC組比較有顯著性差異(P0.01),但兩組之間無明顯差別;S組,V組和SV組的VEGF mRNA和蛋白的表達均下調(diào),但V組和SV組與S組相比在mRNA水平上有差異(P0.05)。2.CCK-8檢測：與NC組、BC組相比,S組、V組、SV組在轉(zhuǎn)染24h、48h、72h后細胞增殖能力均顯著降低(P0.01),S組、SV組與V組相比具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),且在轉(zhuǎn)染后72h,雙靶點組(SV組)與單靶點組(S組、V組)相比具有顯著性差異(P0.01)。3.流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示：與NC組、BC組相比,在轉(zhuǎn)染48h后,S組、V組、SV組細胞凋亡增加(P0.01),且SV組與S組、V組相比變化明顯(P0.01)。結(jié)論1.用脂質(zhì)體包裹的siRNA轉(zhuǎn)染可下調(diào)U251細胞survivin及VEGFmRNA及其蛋白表達,使U251細胞增殖抑制,凋亡增加。2survivin及VEGF的雙靶點基因下調(diào)可增強其效應(yīng)。3.通過siRNA下調(diào)survivin基因,可下調(diào)VEGF mRNA及蛋白的表達,反之則否,考慮survivin可能為VEGF的上游靶點。
【關(guān)鍵詞】：U251細胞 siRNA survivin VEGF
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 縮略詞表6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-13
• 1. 實驗材料13-15
• 1.1 實驗細胞13
• 1.2 實驗主要材料及儀器13
• 1.3 實驗主要試劑及配制方法13-15
• 2 實驗方法15-22
• 2.1 siRNA序列設(shè)計及合成15-16
• 2.2 細胞復(fù)蘇及培養(yǎng)16
• 2.3 實驗分組16
• 2.4 siRNA轉(zhuǎn)染16-18
• 2.5 熒光實時定量PCR檢測sur和VEGF mRNA表達18-20
• 2.6 Western Blot檢測sur和VEGF蛋白表達20-21
• 2.7 CCK-8實驗檢測細胞增殖變化21
• 2.8 流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡變化21-22
• 2.9 統(tǒng)計學(xué)分析22
• 3. 實驗結(jié)果22-28
• 3.1 Cy3-scrambled-siRNA轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染效率22
• 3.2 熒光實時定量PCR檢測sur和VEGF mRNA的表達結(jié)果22-23
• 3.3 Western Blot檢測sur和VEGF蛋白表達結(jié)果23-25
• 3.4 CCK-8檢測細胞增殖能力結(jié)果25-26
• 3.5 流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡結(jié)果26-28
• 4. 討論28-31
• 5. 結(jié)論31
• 6. 參考文獻31-33
• 綜述：Survivin和VEGF在腦膠質(zhì)瘤中的研究進展33-46
• 參考文獻41-46
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況46-47
• 致謝47

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本文編號：267472