【摘要】：研究背景:膠質(zhì)瘤(glioma)作為一種致死率較高的神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤,是最常見的腦腫瘤,多見于成年人。如今膠質(zhì)瘤的治療方式多應(yīng)用手術(shù)聯(lián)合放療、化療,但是膠質(zhì)瘤患者生存期也僅延長至約14個(gè)月。膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有獨(dú)特侵襲性,而神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞則正常存在于神經(jīng)系統(tǒng),因此對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞與膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為差異的研究對(duì)膠質(zhì)瘤的治療具有重大意義。目的:1.了解人星形膠質(zhì)細(xì)胞系1800-P,及標(biāo)準(zhǔn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87MG、U251MG在不同濃度胱氨酸刺激下的生長情況;2.了解常氧/低氧條件下神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞與膠質(zhì)瘤細(xì)胞中2-氨基乙硫醇雙加氧酶(ADO)與半胱氨酸雙加氧酶(CDO)基因的表達(dá)情況;3.探究神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞與膠質(zhì)瘤細(xì)胞去甲基化作用對(duì)CDO基因表達(dá)的影響。方法:1.用含不同濃度胱氨酸的EBSS培養(yǎng)基,分別培養(yǎng)人星形膠質(zhì)細(xì)胞系1800-P,標(biāo)準(zhǔn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87MG、U251MG,利用水溶性四唑鹽(WST)檢測出各細(xì)胞在不同條件下的七天生長曲線,探索不同胱氨酸濃度對(duì)于各種細(xì)胞生長情況的影響,根據(jù)增殖情況找出最適下一步實(shí)驗(yàn)的胱氨酸濃度。2.分別在常氧和低氧環(huán)境中,三組胱氨酸濃度培養(yǎng)基的條件下,培養(yǎng)U87MG、U251MG和1800-P后,進(jìn)行RNA提取并反轉(zhuǎn)錄至DNA。采用實(shí)時(shí)定量PCR(rt-PCR)技術(shù),利用相應(yīng)引物檢測此條件下各細(xì)胞中ADO和CDO基因表達(dá)情況。3.根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)以及方法2中的結(jié)果,對(duì)U87MG、U251MG和1800-P進(jìn)行去甲基化處理,分別檢測三種細(xì)胞去甲基化組和對(duì)照組的CDO基因表達(dá)情況;4.所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)都使用Graghpad prism7作圖,數(shù)值使用Minitab17.0軟件進(jìn)行t-test、One-way ANOVA等統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,P0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.成功得出U87MG、U251MG、1800-P細(xì)胞在不同胱氨酸濃度培養(yǎng)下的生長曲線,證明不同胱氨酸濃度條件下神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞與膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖情況無明顯差異,并根據(jù)各自增殖情況得到三組胱氨酸濃度,分別為0μM組、10μM組和200μM組,進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn);2.分別在常氧和低氧環(huán)境中,三組胱氨酸濃度培養(yǎng)基的條件下,培養(yǎng)U87MG、U251MG和1800-P,利用rt-PCR技術(shù),檢測標(biāo)準(zhǔn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87MG、U251MG在低氧條件下ADO基因表達(dá)高于1800-P(P0.05),1800-P細(xì)胞中CDO基因表達(dá)則高于U87MG、U251MG(P0.05),說明在膠質(zhì)瘤細(xì)胞ADO基因的表達(dá)顯著,主要靠ADO途徑合成亞�；撬�,而在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中亞�；撬岬暮铣芍饕揽緾DO途徑;3.根據(jù)2中的數(shù)據(jù),計(jì)算U87MG、U251MG和1800-P細(xì)胞中ADO與CDO基因表達(dá)的比值,結(jié)果顯示不同氧濃度及胱氨酸濃度條件下U87MG、U251MG的ADO表達(dá)顯著高于CDO(ADO/CDO100),說明氧濃度、胱氨酸濃度對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞與膠質(zhì)瘤細(xì)胞ADO、CDO基因的表達(dá)無明顯影響;4.利用rt-PCR技術(shù),檢測三種細(xì)胞去甲基化組和對(duì)照組的CDO基因表達(dá)情況,標(biāo)準(zhǔn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87MG、U251MG的去甲基化組CDO表達(dá)顯著高于對(duì)照組,而正常膠質(zhì)細(xì)胞1800-P細(xì)胞的去甲基化組與對(duì)照組CDO表達(dá)無明顯差異。結(jié)論:亞�；撬峥梢源x膠質(zhì)細(xì)胞的生物活性,胱氨酸是亞�；撬岷铣傻闹饕�,而作為亞牛磺酸合成的主要途徑的ADO及CDO,不同細(xì)胞中其主導(dǎo)地位不同。本研究通過不同條件下膠質(zhì)細(xì)胞和膠質(zhì)瘤細(xì)胞,ADO、KDO基因表達(dá)的研究,證實(shí)一定濃度內(nèi)的胱氨酸可促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖,常氧及低氧時(shí)膠質(zhì)瘤細(xì)胞ADO基因高表達(dá),然而氧濃度對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞或膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和基因表達(dá)沒有影響。并且,神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中CDO基因的表達(dá)顯著高于膠質(zhì)瘤細(xì)胞,而去甲基化后膠質(zhì)瘤細(xì)胞CDO基因表達(dá)被激活。
【圖文】：

圖 1 不同濃度胱氨酸條件下細(xì)胞生長曲線。A：胱氨酸濃度為 10殖明顯；B：胱氨酸濃度為 10μM、20μM 時(shí) U251MG 細(xì)胞增殖明顯生長曲線下降，提示細(xì)胞凋亡；C：胱氨酸濃度為 10μM、20μM 以當(dāng)胱氨酸濃度為 10μM 時(shí)三種細(xì)胞的增殖明顯。圖 2 常氧（A）和低氧（B）環(huán)境中，三組胱氨酸濃度培養(yǎng)基的條件下細(xì)胞的 ADO 基因表達(dá)情況。

圖 1 不同濃度胱氨酸條件下細(xì)胞生長曲線。A：胱氨酸濃度為 10μM、20μM 時(shí) U87MG 細(xì)胞增殖明顯；B：胱氨酸濃度為 10μM、20μM 時(shí) U251MG 細(xì)胞增殖明顯，，濃度為 20μM 第 4 天之后生長曲線下降，提示細(xì)胞凋亡；C：胱氨酸濃度為 10μM、20μM 時(shí) 1800-P 細(xì)胞增殖明顯。所以當(dāng)胱氨酸濃度為 10μM 時(shí)三種細(xì)胞的增殖明顯。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R739.41

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本文編號(hào)：2672115