發(fā)布時間：2020-05-13 05:54

【摘要】：腫瘤干細胞是指腫瘤組織中一群能夠進行自我更新、具有多向分化潛能并且具有強致瘤性的腫瘤細胞。膠質瘤是起源于腦或脊柱中的膠質細胞的一型腫瘤,該病患者在腦腫瘤患者總數(shù)中占到三成,更在惡性腦腫瘤患者中占到80%,是腦腫瘤領域的研究熱點和難點。膠質瘤的類型包括但不限于:星形細胞瘤、室管膜瘤、少突神經膠質瘤和混合性膠質瘤。隨病程進展該病患者可出現(xiàn)顱內壓增高的癥狀并進而引起一系列癥狀。發(fā)病后期往往進展為惡性程度較高的多形性膠質母細胞瘤并呈浸潤性生長,難以通過手術切除進行治療,放化療的效果也不能令人滿意,臨床上術后復發(fā)非常常見,患者的中位生存期在15個月左右。膠質瘤干細胞(glioma stem cell,GSC)具有對放化療不敏感、多分化潛能和自我更新能力等特性,被認為是膠質瘤發(fā)生、發(fā)展及抵抗各種治療乃至復發(fā)的主要原因。所以,對于膠質瘤干細胞GSC的研究將有助于我們更加有效地對抗這種惡性疾病。筆者所在實驗室長期專注于腫瘤干細胞對腫瘤發(fā)生、發(fā)展的調控及治療轉化相關研究,在該領域內積累了一定的經驗。為了鑒定GSC中特異性高表達蛋白質,我們通過質譜篩選比較了GSC與其分化后相應的非干性腫瘤細胞(non-stem tumor cell,NSTC)的蛋白表達差異,發(fā)現(xiàn)了一系列在GSC與NSTC中表達有較大差異的蛋白質。結合對美國NCI的腦腫瘤數(shù)據(jù)庫Rembrandt中膠質母細胞瘤的臨床數(shù)據(jù)分析,我們發(fā)現(xiàn)WDR12基因在腦膠質瘤患者腫瘤組織中高表達,而在正常腦組織中低表達。同時,隨著患者膠質瘤惡性程度的增加,膠質瘤患者腫瘤組織中WDR12蛋白的表達量也隨之上升。進一步,在對數(shù)據(jù)庫的臨床預后相關性分析中我們還發(fā)現(xiàn)高表達WDR12的膠質瘤患者預后明顯較差。以上這些結果共同顯示W(wǎng)DR12蛋白可能在膠質瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。WDR12是WD重復蛋白WDR12/YTM1家族的成員,它與Pes1和Bop1共同組成一個名為PeBoW的穩(wěn)定復合物,參與核糖體亞基的成熟,是核糖體生物發(fā)生和細胞增殖所必需的關鍵蛋白。然而,目前尚未有文獻報道WDR12在腦膠質瘤干細胞中的表達和功能。我們在GSC中針對WDR12基因進行了一系列的研究,探索WDR12在GSC中發(fā)揮的功能及其作用機制。在研究中我們發(fā)現(xiàn):(1)WDR12在GSC中的表達顯著高于非干性腫瘤細胞;(2)腦膠質瘤的惡性程度越高,腫瘤組織中WDR12的表達水平相應升高;(3)在GSC中敲低WDR12的表達顯著抑制GSC的增殖能力和自我更新能力;(4)在GSC中敲低WDR12的表達顯著抑制原位移植瘤在荷瘤小鼠體內的生長,并延長荷瘤小鼠生存周期。這些結果提示我們,WDR12基因在GSC的增殖和自我更新過程中以及在腦膠質瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中可能都發(fā)揮了重要的作用。在今后的實驗中,我們將進一步研究WDR12在GSC中發(fā)揮作用的具體機制,希望能為臨床上膠質瘤的靶向治療提供線索。
【圖文】：

第二章 實驗結果2.1 WDR12 在 GSC 中高表達2.1.1 GSC 與 NSTC 中差異表達蛋白的篩選在作者所在課題組之前的研究工作中，，通過比較 GSC 與 NSTC 質譜結果的分析，我們初步篩選了在二者表達譜中差異較大的蛋白。具體操作是將來源于不同病人的 4 株 GSC 細胞（編號分別為 456、4121、387 和 3691），在含有 10%胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基進行培養(yǎng)以誘導 GSC 分化為 NSTC。然后收集 4 株細胞系的相應編號的 GSC 和 NSTC 樣品，細胞裂解后進行質譜鑒定（采用 LC-MS/MS，即液相色譜-二級質譜連用的方法）。通過以上操作我們篩選到了一些在 GSC 中高表達而在 NSTC 中低表達的蛋白（圖 2.1，左側所示為質譜篩選操作步驟，圖右側為以熱圖形式展現(xiàn)的質譜篩選結果）：

軍事科學院碩士學位論文2.1.2 數(shù)據(jù)庫分析結果REMBRANDT 是一個癌癥臨床基因組學的數(shù)據(jù)庫，我們對該數(shù)據(jù)庫的數(shù)據(jù)進行分析。分析結果表明，腦膠質瘤患者 WDR12 基因的表達水平顯著高于正常人，并且，患者腫瘤的惡性程度與該蛋白的表達量呈正相關。同時，在膠質瘤患者中，組織中高表達 WDR12 的患者與低表達該蛋白的患者相比，明顯預后差（圖 2.2）。
【學位授予單位】：軍事科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R739.41

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本文編號：2661505