發(fā)布時間：2020-05-07 18:52

【摘要】：腦膠質瘤是中樞神經系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤,臨床中主要以手術治療為主,放療和化療為輔的治療方法,這些方法雖然能夠起到一定的作用,但是治療不久后易復發(fā),有毒副作用,患者的生活質量下降,所以探索有效的且毒副作用小的藥物成為了治療腦膠質瘤的重點。楊梅黃酮(Myricetin)是一種天然的黃酮類化合物,主要存在于日常果蔬、茶、紅酒等中。有研究已經表明,Myricetin具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤等作用,并且在體內外能夠對皮膚癌、結腸癌等發(fā)揮其抗腫瘤作用。但是,Myricetin在人腦膠質瘤中的作用及其機制尚不清楚,因此本課題組研究Myricetin對人腦膠質瘤的抗腫瘤作用及機制。本實驗首先通過體外實驗用CCK-8實驗、transwell實驗、劃痕實驗和HUVEC成管實驗分別檢測Myricetin對人腦膠質瘤細胞活性、侵襲、遷移和HUVEC成管能力的影響;其次用western blot實驗檢測Myricetin對MMP-2、MMP-9、MMP-14、MMP-26、HIF-1α和VEGF蛋白的影響,最后使用人腦膠質瘤細胞U87MG,皮下接種于雄性裸鼠的背部,構建模型研究Myricetin在體內對人腦膠質瘤生長的影響。一、Myricetin對人腦膠質瘤細胞活性的影響用CCK-8法檢測不同濃度的Myricetin對人腦膠質瘤細胞U87MG作用24h后對其活性的影響。結果顯示,隨著Myricetin濃度的升高,細胞活性的抑制作用增強,當濃度增大到80μM時,與對照組相比,Myricetin對人腦膠質瘤細胞活性的抑制作用具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結果說明Myricetin能夠抑制人腦膠質瘤細胞的活性并呈濃度依賴。二、Myricetin對人腦膠質瘤細胞遷移、侵襲和血管生成的影響1、用劃痕實驗檢測不同濃度的Myricetin對人腦膠質瘤細胞作用24h后對其遷移能力的影響。結果顯示,隨著Myricetin濃度的升高,人腦膠質瘤細胞的遷移能力減弱,與對照組相比有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2、用Transwell小室實驗檢測不同濃度的Myricetin對人腦膠質瘤細胞作用24h后對其侵襲能力的影響。結果顯示,隨著Myricetin濃度的升高,穿過基質膠進入下室的細胞數(shù)量逐漸減少,與對照組相比有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3、通過HUVEC在Matrigel上成管實驗檢測Myricetin對HUVEC成管能力的影響。結果顯示,隨著Myricetin濃度的升高,Myricetin能夠抑制HUVEC成管,與對照組相比有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4、用western blot方法檢測MMP-2、MMP-9、MMP-14、MMP-26、HIF-1α、VEGF蛋白的表達量。結果顯示,隨著Myricetin濃度的升高,MMP-2、MMP-9、MMP-14、MMP-26、HIF-1α、VEGF蛋白在人腦膠質瘤細胞的表達量降低,與對照組相比有統(tǒng)計學意義(P0.05)。三、Myricetin對人腦膠質瘤生長的影響將裸鼠分為5組:溶劑對照組、替莫唑胺陽性對照組、20mg/kg Myricetin組、40mg/kg Myricetin組、20mg/kg Myricetin與替莫唑胺聯(lián)合用藥組。接種后第10天荷瘤形成,采取腹腔注射連續(xù)給藥的方式,給藥10天,劑量為200μl/只,每天監(jiān)測裸鼠的體重和腫瘤的體積。結果顯示,給藥結束后與對照組對比,實驗組的腫瘤重量和體積有統(tǒng)計學意義(P0.05);聯(lián)合給藥組相對于單獨應用20mg/kg Myricetin組有統(tǒng)計學意義(P0.05);通過免疫組化實驗檢測血管內皮標記物CD31在各組中的表達,溶劑對照組組織內CD31表達較多,其它四組CD31的陽性表達均有不同程度的減少,結果表明與溶劑對照組相比,其它四組腫瘤組織內MVD有所下降,以上結果表明Myricetin能夠抑制腫瘤血管的生成,與對照組對比有統(tǒng)計學意義(P0.05)。通過以上結果,我們可以得出以下結論,Myricetin在體外抑制人腦膠質瘤細胞的遷移、侵襲和HUVEC的成管;Myricetin在體內抑制人腦膠質瘤的生長。
【圖文】：

3.1.1 CCK-8 實驗檢測不同濃度的 Myricetin 對人腦膠質瘤細胞活的抑制作用利用 CCK-8 實驗檢測用不同濃度梯度(0μM、10μM、20μM、40μM、80μ160μM、320μM)的 Myricetin 對人腦膠質瘤 U87MG 細胞處理 24h 后的作用，后用 CCK-8 試劑盒檢測各組的細胞活性。如圖 3.1 所示，結果表明經 Myric處理24h后的U87MG細胞，細胞活性隨著藥物濃度的升高而被抑制地更加明顯當濃度為 80μM 時，與對照組(0μM)相比，其抑制作用具有統(tǒng)計學意義（P<0.0以上結果表明，，隨著 Myricetin 濃度的升高，對細胞活性的抑制作用呈濃度依性。為了探究 Myricetin 對人腦膠質瘤細胞 U87MG 的遷移和侵襲能力，我們用與對照組相比，對細胞活性抑制作用沒有統(tǒng)計學意義的細胞濃度做接下來的驗研究。

第 3 章 結果ricetin 抑制人腦膠質瘤細胞的遷移和侵襲yricetin 對人腦膠質瘤 U87MG 細胞遷移的作用劃痕實驗檢測不同濃度梯度(0μM、10μM、20μM、40μM)的質瘤 U87MG 細胞處理 24h 后的作用。如圖 3.2 所示，U87Mn 作用 24h 后，隨著濃度的升高，遷移速率減慢，與對照組(0μ意義（P<0.05）。以上結果表明，隨著 Myricetin 濃度的升高7MG 細胞的遷移能力。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R739.41

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本文編號：2653401