【摘要】：腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤,臨床中主要以手術(shù)治療為主,放療和化療為輔的治療方法,這些方法雖然能夠起到一定的作用,但是治療不久后易復(fù)發(fā),有毒副作用,患者的生活質(zhì)量下降,所以探索有效的且毒副作用小的藥物成為了治療腦膠質(zhì)瘤的重點(diǎn)。楊梅黃酮(Myricetin)是一種天然的黃酮類化合物,主要存在于日常果蔬、茶、紅酒等中。有研究已經(jīng)表明,Myricetin具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤等作用,并且在體內(nèi)外能夠?qū)ζつw癌、結(jié)腸癌等發(fā)揮其抗腫瘤作用。但是,Myricetin在人腦膠質(zhì)瘤中的作用及其機(jī)制尚不清楚,因此本課題組研究Myricetin對(duì)人腦膠質(zhì)瘤的抗腫瘤作用及機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)首先通過體外實(shí)驗(yàn)用CCK-8實(shí)驗(yàn)、transwell實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)和HUVEC成管實(shí)驗(yàn)分別檢測Myricetin對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞活性、侵襲、遷移和HUVEC成管能力的影響;其次用western blot實(shí)驗(yàn)檢測Myricetin對(duì)MMP-2、MMP-9、MMP-14、MMP-26、HIF-1α和VEGF蛋白的影響,最后使用人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87MG,皮下接種于雄性裸鼠的背部,構(gòu)建模型研究Myricetin在體內(nèi)對(duì)人腦膠質(zhì)瘤生長的影響。一、Myricetin對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞活性的影響用CCK-8法檢測不同濃度的Myricetin對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87MG作用24h后對(duì)其活性的影響。結(jié)果顯示,隨著Myricetin濃度的升高,細(xì)胞活性的抑制作用增強(qiáng),當(dāng)濃度增大到80μM時(shí),與對(duì)照組相比,Myricetin對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞活性的抑制作用具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)果說明Myricetin能夠抑制人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的活性并呈濃度依賴。二、Myricetin對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移、侵襲和血管生成的影響1、用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測不同濃度的Myricetin對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞作用24h后對(duì)其遷移能力的影響。結(jié)果顯示,隨著Myricetin濃度的升高,人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移能力減弱,與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2、用Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測不同濃度的Myricetin對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞作用24h后對(duì)其侵襲能力的影響。結(jié)果顯示,隨著Myricetin濃度的升高,穿過基質(zhì)膠進(jìn)入下室的細(xì)胞數(shù)量逐漸減少,與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3、通過HUVEC在Matrigel上成管實(shí)驗(yàn)檢測Myricetin對(duì)HUVEC成管能力的影響。結(jié)果顯示,隨著Myricetin濃度的升高,Myricetin能夠抑制HUVEC成管,與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4、用western blot方法檢測MMP-2、MMP-9、MMP-14、MMP-26、HIF-1α、VEGF蛋白的表達(dá)量。結(jié)果顯示,隨著Myricetin濃度的升高,MMP-2、MMP-9、MMP-14、MMP-26、HIF-1α、VEGF蛋白在人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的表達(dá)量降低,與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。三、Myricetin對(duì)人腦膠質(zhì)瘤生長的影響將裸鼠分為5組:溶劑對(duì)照組、替莫唑胺陽性對(duì)照組、20mg/kg Myricetin組、40mg/kg Myricetin組、20mg/kg Myricetin與替莫唑胺聯(lián)合用藥組。接種后第10天荷瘤形成,采取腹腔注射連續(xù)給藥的方式,給藥10天,劑量為200μl/只,每天監(jiān)測裸鼠的體重和腫瘤的體積。結(jié)果顯示,給藥結(jié)束后與對(duì)照組對(duì)比,實(shí)驗(yàn)組的腫瘤重量和體積有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);聯(lián)合給藥組相對(duì)于單獨(dú)應(yīng)用20mg/kg Myricetin組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);通過免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測血管內(nèi)皮標(biāo)記物CD31在各組中的表達(dá),溶劑對(duì)照組組織內(nèi)CD31表達(dá)較多,其它四組CD31的陽性表達(dá)均有不同程度的減少,結(jié)果表明與溶劑對(duì)照組相比,其它四組腫瘤組織內(nèi)MVD有所下降,以上結(jié)果表明Myricetin能夠抑制腫瘤血管的生成,與對(duì)照組對(duì)比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。通過以上結(jié)果,我們可以得出以下結(jié)論,Myricetin在體外抑制人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移、侵襲和HUVEC的成管;Myricetin在體內(nèi)抑制人腦膠質(zhì)瘤的生長。
【圖文】：

3.1.1 CCK-8 實(shí)驗(yàn)檢測不同濃度的 Myricetin 對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞活的抑制作用利用 CCK-8 實(shí)驗(yàn)檢測用不同濃度梯度(0μM、10μM、20μM、40μM、80μ160μM、320μM)的 Myricetin 對(duì)人腦膠質(zhì)瘤 U87MG 細(xì)胞處理 24h 后的作用，后用 CCK-8 試劑盒檢測各組的細(xì)胞活性。如圖 3.1 所示，結(jié)果表明經(jīng) Myric處理24h后的U87MG細(xì)胞，細(xì)胞活性隨著藥物濃度的升高而被抑制地更加明顯當(dāng)濃度為 80μM 時(shí)，與對(duì)照組(0μM)相比，其抑制作用具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.0以上結(jié)果表明，，隨著 Myricetin 濃度的升高，對(duì)細(xì)胞活性的抑制作用呈濃度依性。為了探究 Myricetin 對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 U87MG 的遷移和侵襲能力，我們用與對(duì)照組相比，對(duì)細(xì)胞活性抑制作用沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的細(xì)胞濃度做接下來的驗(yàn)研究。

第 3 章 結(jié)果ricetin 抑制人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移和侵襲yricetin 對(duì)人腦膠質(zhì)瘤 U87MG 細(xì)胞遷移的作用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測不同濃度梯度(0μM、10μM、20μM、40μM)的質(zhì)瘤 U87MG 細(xì)胞處理 24h 后的作用。如圖 3.2 所示，U87Mn 作用 24h 后，隨著濃度的升高，遷移速率減慢，與對(duì)照組(0μ意義（P<0.05）。以上結(jié)果表明，隨著 Myricetin 濃度的升高7MG 細(xì)胞的遷移能力。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R739.41

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本文編號(hào)：2653401