【摘要】：目的:針對一種衍生于載脂蛋白E(apoE)受體結(jié)合區(qū)域的模擬肽,即新一代aopE擬肽COG1410,研究其應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后早期腦損傷(early brain injury,EBI)期間,對大腦自噬及凋亡的影響及潛在的機(jī)制。方法:選用頸內(nèi)動(dòng)脈穿刺法建立小鼠SAH模型,首先利用蛋白免疫印跡方法測定傷側(cè)大腦半球自噬標(biāo)志物L(fēng)C3II/LC3I、Atg-5和Beclin-1、凋亡產(chǎn)物Cleaved-Caspase-3(c-Caspase-3)及磷酸化的信號蛋白糖原合酶激酶3β(The phosphorylation of glycogen synthase kinase-3 beta,p-GSK-3β)等在SAH后6小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí)的水平變化;然后針對自噬水平最活躍的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行COG1410給藥試驗(yàn),采取Garcia評分評價(jià)假手術(shù)組(Sham)、蛛網(wǎng)膜下腔出血組(SAH)、給生理鹽水組(SAH+Saline)和給COG1410組(SAH+COG1410)中小鼠的神經(jīng)功能變化,根據(jù)SAH分級系統(tǒng)評價(jià)以上四個(gè)分組中小鼠腦組織標(biāo)本的蛛網(wǎng)膜下腔出血程度,利用蛋白免疫印跡方法測定傷側(cè)大腦半球中LC3II/LC3I、Atg-5和Beclin-1、c-Caspase-3及p-GSK-3β等的表達(dá)量,并使用免疫熒光染色法觀察傷側(cè)大腦前額葉基底皮層區(qū)域中神經(jīng)元表達(dá)c-Caspase-3的情況。最后,我們通過側(cè)腦室穿刺給予糖原合酶激酶3β的抑制劑LY294002(LY)和激動(dòng)劑Okadaic acid(OA),分別實(shí)現(xiàn)對p-GSK-3β水平的提升和下調(diào),并在SAH+Saline組,SAH+COG1410組,SAH+COG1410+DMSO組,SAH+COG1410+LY組和SAH+COG1410+OA組中,利用免疫熒光染色法記錄其如何影響COG1410給藥后模型傷側(cè)大腦半球及神經(jīng)元的自噬,并利用蛋白免疫印跡方法測定傷側(cè)大腦自噬標(biāo)志物L(fēng)C3B-II和Beclin-1表達(dá)量,以及傷側(cè)大腦前額葉基底皮層區(qū)域LC3B-II或Beclin-1表達(dá)陽性的神經(jīng)元數(shù)量。結(jié)果:(1)在SAH后EBI期間,與假手術(shù)組相比,傷側(cè)大腦半球整體的自噬水平在SAH后6h開始增加(P0.05),并在24h達(dá)到高峰(P0.01),隨后逐漸下降,信號分子p-GSK-3β的水平也有類似的變化趨勢;通過小鼠尾靜脈注射給予COG1410后,SAH后24小時(shí)的大腦自噬被進(jìn)一步增強(qiáng)(P0.05)。(2)在SAH后的EBI中,傷側(cè)大腦半球整體凋亡水平變化并不完全和自噬及p-GSK-3β水平變化同步,其在EBI后期仍保持相對高值,但有減弱的趨勢;給予COG1410后,傷側(cè)大腦半球及其前額葉基底皮層神經(jīng)元的凋亡水平均被下調(diào)(P0.05)。(3)與假手術(shù)組(16.50±1.05)相比較,模型組的Garcia評分(11.17±1.83)明顯降低(P0.01),COG1410的干預(yù)能顯著改善模型組的Garcia評分(15.17±0.75),且二者相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),但COG1410的干預(yù)對于SAH的分級影響并不大。(4)此外,糖原合酶激酶3β的磷酸化進(jìn)一步提升了COG1410上調(diào)的自噬;與此相反,糖原合酶激酶3β的去磷酸化則下調(diào)了該過程。結(jié)論:SAH后EBI中小鼠傷側(cè)大腦半球的自噬和凋亡均增強(qiáng),并均在傷后24h達(dá)到峰值;傷側(cè)大腦半球的凋亡在EBI后期仍維持了較高的水平;載脂蛋白E擬肽COG1410應(yīng)用SAH模型小鼠后,其神經(jīng)元中GSK-3β磷酸化水平增加,自噬被增強(qiáng),而凋亡被減弱;COG1410或能夠通過磷酸化GSK-3β,作用于神經(jīng)元的自噬和凋亡,從而改善SAH后EBI期間的神經(jīng)功能缺損。COG1410上調(diào)的自噬或許可以應(yīng)用于SAH后EBI的治療研究。
【圖文】：

圖 1 小鼠腦組織標(biāo)本肉眼觀注：A：假手術(shù)組；B：SAH 模型組2 EBI 期間小鼠大腦自噬水平變化的檢測圖 2 反映了自噬標(biāo)志物水平在 EBI 中 4 個(gè)時(shí)間點(diǎn)的變化情況，，小鼠大

圖 2 EBI 期間小鼠大腦自噬水平變化的檢測結(jié)果（n=5）注：1：Beclin-1 檢測組；2：Atg-5 檢測組；3：LC3‖/LC3

本文編號：2652215