【摘要】：背景:胸腺瘤是最常見的前縱隔腫瘤,常合并重癥肌無力(myasthenia gravis,MG)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征等多種自身免疫疾病。MG是乙酰膽堿受體抗體介導(dǎo)的,細胞免疫依賴及補體參與的神經(jīng)-肌肉接頭處傳遞障礙的自身免疫性疾病,約35-70%胸腺瘤患者伴有MG并且15%的MG患者伴有胸腺瘤。樹突狀細胞(Dendritic Cells,DCs)是目前所知的功能最強的抗原提呈細胞,DCs的數(shù)量與許多腫瘤的發(fā)生發(fā)展中的免疫機制密切相關(guān)。在重癥肌無力患者與單純胸腺瘤或者正常人群對比中,同樣發(fā)現(xiàn)了DCs的減少,而且在重癥肌無力患者進行胸腺切除手術(shù)以后,術(shù)后的DCs數(shù)量也較術(shù)前增加。因此DCs可能在重癥肌無力的發(fā)生以及胸腺免疫功能中起到重要的調(diào)控作用。自噬是一種存在于真核生物中具有高度保守性的由Atg12基因參與的生理活動,研究發(fā)現(xiàn)自噬相關(guān)基因在胸腺瘤合并重癥肌無力的腫瘤組織及外周血中較單純胸腺瘤表達增高。因此認為胸腺瘤中DCs的自噬可能與重癥肌無力的發(fā)生相關(guān)。目的:一、探究單純胸腺瘤與胸腺瘤合并MG組織中DC的自噬表達水平。二、通過體外誘導(dǎo)分化不同成熟狀態(tài)的DCs,并和胸腺瘤細胞系共培養(yǎng),探究不同成熟狀態(tài)DCs的自噬表達和胸腺瘤細胞系對于樹突狀細胞的自噬表達影響。方法:一、選取天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院心胸外科2015.9.1—2016.12.30手術(shù)切除的單純胸腺瘤(T組,20例)與胸腺瘤合并MG(T/MG組,30例)組織標本50例,免疫組織化學(xué)法檢測其中Atg12、Beclin1、p62、LC3B蛋白表達情況,免疫磁珠分選(Magnetic-activated cell sorting,MACS)分離單純胸腺瘤與胸腺瘤合并MG組織中的CD11c~+DCs,流式細胞儀檢測細胞純度,Real-time PCR和Western-blot檢測DCs中Atg12、Beclin1、p62、LC3B的mRNA及蛋白表達水平。二、Ficoll分離液分離10例人臍血單個核細胞,MACS分離CD34~+細胞,在含5%FBS、1%青鏈霉素、GM-CSF、IL-4的RMPI1640的培養(yǎng)條件下刺激誘導(dǎo)分化DCs,培養(yǎng)第6日收集一半未成熟樹突狀細胞(iDCs),同時在另一半加入TNF-α培養(yǎng)24h后收集成熟樹突狀細胞(mDCs),通過MACS檢測DCs純度,取一半iDCs和mDCs與胸腺瘤細胞系Thy0517共培養(yǎng),分別將DCs接種于Transwell上室,Thy0517接種于下室,共培養(yǎng)3天后收集所有細胞,Western-blot和Real-time PCR檢測所有DCs中Atg12、Beclin1的mRNA以及蛋白表達水平。結(jié)果:一、在50例單純胸腺瘤與胸腺瘤合并MG組織標本中,T組和T/MG組在性別、年齡、BMI指數(shù)、病理分型等方面差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);免疫組織化學(xué)結(jié)果表示:Atg12、Beclin1、LC3B在胸腺瘤合并MG(T/MG組)中的陽性表達率分別為73.3%(21/30)、70%(21/30)、63.3%(19/30),高于在單純胸腺瘤(T組)中的陽性表達率分別為30%(6/20)、40%(8/20)、25%(5/20),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);p62在單純胸腺瘤(T組)和胸腺瘤合并MG(T/MG組)分別65%(13/20)和40%(12/30),差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);經(jīng)MACS分離CD11c~+DCs純度達99%,Real-time PCR結(jié)果表示比較于T組,T/MG組織分離的DCs中Atg12、Beclin1、LC3B的mRNA表達升高,p62表達降低(P0.05);Western-blot結(jié)果提示T/MG組織分離的DCs較T組Atg12、LC3B、Beclin1蛋白表達升高,p62蛋白表達降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。二、誘導(dǎo)分化后的iDCs、mDCs經(jīng)MACS分離CD11c~+DCs后純度接近99%,經(jīng)Thy0517共培養(yǎng)后,Western-blot結(jié)果表示mDCs比較于iDCs、T-mDCs比較于T-iDCs的自噬相關(guān)蛋白Atg12、Beclin1的相對表達含量均明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);同時,在單純誘導(dǎo)分化和Thy0517共培養(yǎng)后的iDCs和mDCs中,T-iDCs比較于iDCs、T-mDCs比較于mDCs的的自噬相關(guān)蛋白Atg12、Beclin1的相對表達含量均明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);Real-time PCR結(jié)果同樣表示mDCs和T-mDCs分別較iDCs和T-iDCs的Atg12、Beclin1mRNA表達升高,且T-iDCs和T-mDCs分別較iDCs和mDCs的Atg12、Beclin1mRNA表達同樣升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1、胸腺瘤合并MG較單純胸腺瘤在組織中的自噬水平明顯升高,且通過高純度分離DCs后,在DCs中的自噬表達結(jié)果與組織中相一致,說明胸腺瘤自噬尤其是組織中DCs的自噬增加與胸腺瘤合并重癥肌無力的發(fā)生有一定關(guān)系。2、通過體外誘導(dǎo)分化的mDCs較iDCs的自噬表達增加,且與胸腺瘤細胞系共培養(yǎng)后,T-mDCs的自噬表達依舊高于T-iDCs,表明刺激樹突狀細胞成熟可能是樹突狀細胞自噬水平升高的主要因素。3、mDCs和iDCs在通過與胸腺瘤細胞系共培養(yǎng)后自噬表達均升高,因此胸腺瘤細胞共培養(yǎng)可以引起樹突狀細胞自噬增加,并可能是重癥肌無力發(fā)生的相關(guān)機制之一。
【圖文】：

表 1-2：自噬相關(guān)蛋白在單純胸腺瘤與胸腺瘤合并 MG 組織中染色情：P＜0.05 認為有統(tǒng)計學(xué)差異。表達情況 T 組 T/MG 組 Apg12（Atg12）陽性（+） 6 22陰性（-） 14 8Beclin1陽性（+） 8 21陰性（-） 12 9p62陽性（+） 13 12陰性（-） 7 18LC3陽性（+） 5 19陰性（-） 15 11

Beclin1在T/MG組和T組胸腺瘤組織中表達情況
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R736.3;R746.1

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 孟媛;宋敏;許斌;;Beclin1、Bcl-2在子宮內(nèi)膜癌中的研究及臨床意義[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2013年24期

2 李躍;王渠源;張頌婕;邵艷萍;石琪;;自噬基因ARHI與Beclin1在宮頸癌中的表達及意義[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2013年23期

3 孟云霄;謝琰臣;朱小泉;李海峰;史慧靜;喬杉杉;張佳s，

本文編號：2638609