【摘要】：背景與目的:腓骨肌萎縮癥(Charcot-Marie-Tooth,CMT)是一組以進行性肢體遠端肌無力、萎縮,感覺缺失為表現的臨床和遺傳異質性疾病。X連鎖Charcot-Marie-Tooth 1型(CMTX1)是由縫隙連接β-1蛋白(Gap junction protein beta-1,GJB1)也稱為縫隙連接蛋白32(connexin 32,Cx32)基因突變引起的遺傳性運動感覺神經病,是第二常見的CMT類型。盡管國內外對其進行了大量研究,但中國CMTX1人群的臨床及遺傳學特征尚未見報道,其發(fā)病機制目前也未闡明,本研究的目的在于分析總結8個CMTX1家系中GJB1基因突變患者的臨床與遺傳學特點,并進一步探討GJB1基因突變的發(fā)病機制。方法:收集8個CMTX1家系,先證者發(fā)病年齡在11~30歲,表現肢體遠端無力、肌萎縮、腱反射減低以及感覺減退。其中,先證者1表現為發(fā)作性失語,頭顱磁共振出現可逆性的腦白質改變;先證者5表現為眼震、共濟失調;先證者7無中樞神經受累的臨床表現,頭顱MRI有腦白質改變;先證者8頭顱MRI表現為可逆性胼胝體異常信號。8例先證者行神經電生理檢查后,進一步使用Charcot-Marie-Tooth病評分量表版本2(CMTNS2)進行評估。同時選擇200例健康對照組患者,并應用Sanger測序分析GJB1基因突變序列。構建pc3.1-GFP-N1-m Cx32突變質粒,重組質粒轉染至He La細胞,熒光染色檢測突變Cx32重組蛋白在He La細胞的表達。結果:CMTX1患者主要表現為雙下肢遠端肌肉無力伴輕度感覺障礙,符合CMTX1的診斷標準。所有先證者周圍神經電生理檢查均提示運動和感覺傳導速度減慢,同時復合肌肉動作電位波幅降低,進一步證實符合CMT分型的“中間型”,同時發(fā)現合并有中樞神經系統(tǒng)病變患者的MNCV、CMAP波幅較僅有周圍神經系統(tǒng)受累的患者更低。對7名先證者(先證者1~7)的腓腸神經病理檢查均提示混合性神經病變。GJB1基因測序在8個家系中發(fā)現7個錯義突變(c.59TC、c.379AT、c.425GA、c.533AG、c.580AG、c.590CT)、1個插入突變(c.403_404ins T)和1個同義突變(c.30CT),其中2個突變位于Cx32蛋白胞漿氨基尾端、1個突變位于胞內環(huán)、2個突變位于第3跨膜區(qū)、2個突變位于第4跨膜區(qū)內。分析CMTX1的臨床表型和GJB1突變位置,發(fā)現Cx32突變蛋白分布與CNS癥狀無關聯(lián)。重組Cx32蛋白在He La細胞的表達,野生型Cx32蛋白在He La細胞膜表面,呈點狀和小團狀分布,在胞漿和核周少量表達;C30T、T59C、G425A突變呈點狀和小團塊狀分布在胞膜和胞漿,Cx32蛋白表達量減少;403_404ins T、A533G、A580G突變呈片狀分布,無團塊樣物質,細胞表達減少;突變型A379T主要以團塊狀蓄積在胞漿內,胞核被擠于細胞的一端;A533G突變僅有少量表達于核周;C590T表達與野生型類似,在胞膜上和胞漿內均有點狀分布,但較野生型少。結論:CMTX1患者臨床表現以下肢遠端的肌無力為主,可伴有中樞神經系統(tǒng)受累,但其臨床表型與跨膜結構的突變點位置無相關性。神經電生理檢查提示髓鞘和軸索同時受累,呈中間型改變。病理特點為薄髓鞘、洋蔥球、再生簇,部分可伴有炎細胞浸潤。CMTX1的致病機制可能由GJB1基因突變導致的Cx32蛋白完全或部分滯留在細胞內,難以到達胞膜并形成縫隙連接蛋白斑或形成縫隙連接斑不具有縫隙連接功能引起,GJB1基因突變是否影響縫隙連接板及其功能改變有待于進一步研究。
【圖文】：

正中N-CMAP2.5 5.2 NP 1.8 0.3 4.9 1.14 3.5正中N-MCV36.0 34.5 28.0 33.9 27.3 53.2 33.4 36.4正中N-SNAP12.1 3.6 NP 1.4 2.3 4.7 2.5 0.75正中N-SCV 41.0 40.6 NP 36.4 32.1 44.4 27.2 33.7脛N-CMAP NP 0.2 4.8 0.0 0.1 2.0 0.18 2.6脛N-MCV NP 32.4 32.8 23.0 29.2 32.4 33.5 29.2注：SNAP=感覺神經動作電位，SCV=感覺神經傳導速度，CMAP=復合肌肉動作電位，，MCV=運動神經傳導速度，NP=未檢查，NE=未引出3. 病理表現先證者 1,2,4,5 和 7 的組織學研究顯示脫髓鞘，軸突變性和再生【圖 2】。發(fā)現先證者 2 和 4 在神經內膜中具有炎性細胞浸潤圖 2 先證者 7 神經肌肉病理學表現

胞內環(huán)、第3跨膜區(qū)、第3胞外段、包外環(huán)第 4和第4跨膜區(qū)內。Cx32突變蛋白分布與受累神經關聯(lián)見（表4）。圖3:8個家系的家系圖和GJB1基因突變圖3:A、B、C、D、E、F、G、H分別代表家系1、2、3、4、5、6、7、8表4 Cx32突變蛋白與受累神經突變位點 氨基酸 突變蛋白位置 累及神經C30T L10 L 氨基尾端PNST59C I 20 T 氨基尾端CNS+PNS
【學位授予單位】：蚌埠醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R746.4

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本文編號：2634420