【摘要】：目的探討M型鉀離子通道開放劑瑞替加濱(Retigabine,RTG)對大鼠腦梗死缺血再灌注損傷的腦保護(hù)作用。方法采用雄性SD大鼠為研究對象,選取90只,年齡8周齡,體重240~260g。通過線栓法暫時造成大鼠右側(cè)頸總動脈/大腦中動脈閉塞(MCAO)誘發(fā)梗死灶。SD大鼠共分為6組:假手術(shù)(Sham)組、模型對照(MCAO)組、RTG0h治療組、RTG1h治療組、RTG3h治療組和RTG6h治療組。Sham組將大鼠麻醉后,只將其右側(cè)大腦中動脈分離,不插入線栓,經(jīng)尾靜脈給與等量的生理鹽水。MCAO組將大鼠麻醉后,將線栓插入右側(cè)大腦中動脈,堵塞血管,60min后拔出線栓,恢復(fù)血流,制備大鼠右側(cè)大腦中動脈阻塞模型。RTG治療組大鼠在成功制備MCAO模型后,分別在再灌注后0h、1h、3h及6h經(jīng)尾靜脈注射M型鉀離子通道開放劑瑞替加濱(10mg/kg)。在局部缺血和再灌注的第一個小時期間,通過加熱墊將大鼠核心體溫維持在37℃。在給藥處理24小時后對各組大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評分,TTC染色檢測腦梗死面積,免疫組化染色檢測缺血半影區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量、凋亡細(xì)胞的數(shù)量以及腦梗死皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)元的密度,western blot檢測缺血半影區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量。結(jié)果1神經(jīng)功能缺損評分及腦梗死面積:假手術(shù)組大鼠腦組織未發(fā)現(xiàn)腦梗死病灶,神經(jīng)功能正常。MCAO組及RTG治療組大鼠右側(cè)大腦中動脈供血區(qū)域可見不同程度的腦梗死病灶,同時各組大鼠左側(cè)肢體出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)功能缺損癥狀。與MCAO組比較,RTG治療組腦梗死面積與Longa評分明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與RTG6h治療組比較,RTG0h治療組、RTG1h治療組及RTG3h治療組大鼠腦梗死面積及神經(jīng)功能缺損評分降低更為明顯,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2 HE染色:Sham組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元無水腫,形態(tài)正常,細(xì)胞排列緊密。MCAO組及RTG治療組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元出現(xiàn)明顯的水腫與壞死,但是在RTG治療組中,各組大鼠神經(jīng)細(xì)胞的損傷明顯減輕。3免疫組化染色:Sham組大鼠缺血半影區(qū)GFAP陽性細(xì)胞和caspase-3陽性細(xì)胞少見,皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)元排列致密。在MCAO組及RTG治療組中,缺血半影區(qū)GFAP陽性細(xì)胞和caspase-3陽性細(xì)胞數(shù)量明顯增加,梗死皮質(zhì)區(qū)Neun陽性細(xì)胞數(shù)量明顯減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與MCAO組比較,RTG治療組大鼠缺血半影區(qū)GFAP陽性細(xì)胞和caspase-3陽性細(xì)胞數(shù)量明顯減少,梗死皮質(zhì)區(qū)Neun陽性細(xì)胞數(shù)量明顯增多,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與RTG6h治療組比較,RTG0h治療組、RTG1h治療組及RTG3h治療組缺血半影區(qū)GFAP陽性細(xì)胞和caspase-3陽性細(xì)胞數(shù)量明顯減少,梗死皮質(zhì)區(qū)Neun陽性細(xì)胞數(shù)量明顯增多,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4 Western blot:Sham組大鼠缺血半影區(qū)無CD11b蛋白表達(dá),在MCAO組及RTG治療組中,缺血半影區(qū)CD11b蛋白的表達(dá)明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與MCAO組比較,RTG治療組大鼠缺血半影區(qū)CD11b蛋白表達(dá)明顯減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與RTG6h治療組比較,RTG0h治療組及RTG3h治療組大鼠缺血半影區(qū)CD11b蛋白的表達(dá)明顯減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1 M型鉀離子通道開放劑能夠減少大鼠腦梗死面積及神經(jīng)功能缺損評分,減輕缺血半影區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞及小膠質(zhì)細(xì)胞的增殖與活化,同時減少缺血半影區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡。2在缺血再灌注后6h給藥,M型鉀離子通道開放劑對大鼠腦缺血再灌注損傷的腦保護(hù)會減弱。
【圖文】：

無壞死。在模型對照組及RTG治療組中，神經(jīng)細(xì)胞不同程度發(fā)生壞死，細(xì)胞水腫，，細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞核深染、破碎。但是RTG各治療組海馬CA1 區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的水腫及壞死較MCAO組減輕（見圖1）。

各治療組大鼠梗死周圍區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)增殖明顯減少，且形態(tài)變化小，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與RTG6h給藥組相比，RTG0h給藥組、RTG1h給藥組及RTG3h給藥組星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），（見圖2，表2）。結(jié)果提示M型鉀離子通道開放劑能夠抑制腦梗死缺血再灌注損傷大鼠梗死周圍區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖與活化，并且，當(dāng)在再灌注后6h給藥，這種治療作用會減弱。
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R743.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2622822