發(fā)布時間：2020-04-10 18:07

【摘要】：目的:研究表明原發(fā)性失眠(primary insomnia,PI)具有遺傳特征,五羥色胺(5-hydroxy tryptamine,5-HT)參與了睡眠調(diào)節(jié)功能,而5-HT轉(zhuǎn)運體(5-H T transporter,5-HTT)對5-HT的功能發(fā)揮起關(guān)鍵作用,本文從基因組水平出發(fā)探討5-HTT基因多態(tài)性上的6個位點(rs2020936、rs3794808、rs140700、rs6352、5-HTTLPR、STin2 VNTR)與PI的相關(guān)性,旨在為獲得原發(fā)性失眠相關(guān)的人群基因信息數(shù)據(jù),為將來構(gòu)建與PI相關(guān)的基因信息數(shù)據(jù)庫打下基礎(chǔ),同時將5-HT T基因多態(tài)性檢測作為PI診斷和治療的重要臨床指標(biāo)。方法:本文研究共采集了112例PI患者和健康對照的外周血液標(biāo)本,并提取收集的所有樣本的全基因組DNA,利用HapMap、NCBI等網(wǎng)站和數(shù)據(jù)庫選擇5-HTT基因功能性SNP,選擇了6個(rs2020936、rs3794808、rs140700、rs6352、5-HTTLPR、STin2 VNTR)多態(tài)性位點進行研究;采取飛行質(zhì)譜的方法進行引物設(shè)合成、PCR擴增、基因分型及測序驗證;利用SPSS20.0軟件對基因分型的結(jié)果進行統(tǒng)計分析,并用在線SHEsis軟件對數(shù)據(jù)進行連鎖不平衡分析和單倍型分析。結(jié)果:1.臨床樣本特征分析兩組樣本在年齡(Χ~2=1.448,P=0.154)、體重(Χ~2=0.673,P=0.504)、受教育年限(Χ~2=-0.355,P=0.724)等臨床基線資料之間相比較無明顯差異,無統(tǒng)計意義(P0.05);而兩組樣本在量表評分方面相比有差異,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2.SNP位點Hardy-Weinberg(HWE)平衡檢測HWE平衡檢測示,兩組在觀察值和預(yù)期值方面均不存在差異,不具有顯著性(P0.05),即兩組都符合HWE法則。3.單個SNP位點與原發(fā)性失眠的關(guān)聯(lián)分析5-HTT基因上的rs2020936位點在PI組和對照組中的差異,無統(tǒng)計意義(P=0.830,OR=0.912,95%CI=0.394-2.113);rs3794808位點在PI組和對照組中的差異,無統(tǒng)計意義(P=0.443,OR=0.566,95%CI=0.130-2.462);rs140700位點在PI組和對照組中的差異,無統(tǒng)計意義(P=0.469,OR=0.703,95%CI=0.270-1.831);rs6352位點在PI組和對照組中的差異,無統(tǒng)計意義(P=0.554,OR=2.043,95%CI=0.179-23.292);5-HTTLPR位點在PI組和對照組中的差異,無統(tǒng)計意義(P=0.659,OR=0.878,95%CI=00.494-1.563);STin2VNTR位點在PI組和對照組中的差異無統(tǒng)計意義(P=0.715,OR=1.236,95%CI=0.395-3.867)。4.基因連鎖不平衡分析5-HTT基因上的6個位點(rs2020936、rs3794808、rs140700、rs6352、5-HTTLPR、STin2 VNTR)之間存在連鎖不平衡,其中rs140700與rs6352(D'=1.000)、rs2020936與rs6352(D'=1.000)之間存在完全連鎖不平衡;rs2020936與rs3794808(D'=0.942)、rs3794808與rs6352(D'=0.980)、rs6352與5-HTTLPR(D'=0.997)、rs6352與STin2 VNTR(D'=0.999)之間存在強連鎖不平衡;rs140700與rs2020936(D'=0.687)之間存在中度連鎖不平衡。5.基因單體型分析對5-HTT基因上這6個位點構(gòu)建出二十種單體型,其中C G C T L 12這種單體型在PI組和對照組中的差異有統(tǒng)計意義(P=0.041)。6.部分基因型與臨床心理特征分析C組與T組(rs140700);C組與T組(rs3794808);S組與L組(5-HTTLPR);10組與12組(STin2 VNTR)在抑郁、焦慮量表總評分方面的差異無統(tǒng)計意義(P0.05)。結(jié)論:1.5-HTT基因多態(tài)性位點與原發(fā)性失眠在基因型和等位基因頻率方面未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性,還需在擴大樣本量繼續(xù)探究其與該疾病的相關(guān)性。2.本文研究發(fā)現(xiàn)5-HTT基因單倍型的構(gòu)建中C G C T L 12這種單體型在PI組和對照組中的差異有統(tǒng)計意義(P=0.041),這種單體型可增加群體失眠的風(fēng)險。3.基因連鎖不平衡分析發(fā)現(xiàn)rs2020936與rs3794808、rs3794808與rs6352、rs6352與5-HTTLPR、rs6352與STin2 VNTR之間存在強連鎖不平衡,上述基因位點有可能可增加原發(fā)性失眠的發(fā)生風(fēng)險,推測基因與原發(fā)性失眠有可能相關(guān),后續(xù)有待于擴充樣本量后做進一步證實。4.尚未發(fā)現(xiàn)4個位點(rs140700、rs3794808、5-HTTLPR、STin2 VNTR)與PI患者焦慮和抑郁相關(guān)性,提示我們所選擇的SNP位點可能與原發(fā)性失眠患者焦慮和抑郁無相關(guān)性。
【圖文】：

五羥色胺轉(zhuǎn)運體基因(5-HTT)與原發(fā)性失眠睡眠表型關(guān)系的研究第三章 結(jié)果與分析1.DNA 質(zhì)量檢測1.1 凝膠電泳檢測對本實驗所提取出來的樣本的全血基因組 DNA，用 1%瓊脂糖凝膠電泳進行純度及濃度的檢測，，并分析其是否合格，檢測結(jié)果如下圖 3-1-1。

圖 3-5-2 原發(fā)性失眠患者 5-HTT 基因連鎖不平衡分析6.基因單倍型分析染色體在代代遺傳中傾向于整體遺傳，但在遺傳中同源片段發(fā)生重組，遺傳代后母源染色體原有的組合被打亂，而沒有被打亂的片段被重組的片段隔開于染色體上這些沒有被打亂的等位位點相關(guān)聯(lián)的區(qū)域被稱作單倍型（haploty-e)[11]。對這 6 個位點單體型分析，結(jié)果見表 3-6-1。6 個SNP 基因位點共構(gòu)建出十種單體型：C AC G L10、C AC T L10、C AC T L12、C AC T S 10、C AC S 12、C A T G L 10、C A T T L 10、C A T T L 12、C A T T S 10、C A T T S 12 G C T L 12、C G C T S 12、T A C T L 12、T A C T S 12、T G C T L 12、T G C 10、C G C T S 10、C G T T L 10、T G C T L 10、T G C T S 12，其中 C A C G 0、C A C T S 10、C A T G L 10、T A C T S 12、T G C T L 12、C G C T S 10、C G
【學(xué)位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R741

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本文編號：2622549