【摘要】：研究背景:近年來,針對神經(jīng)元細(xì)胞表面或突觸蛋白的自身抗體的存在及其與自身免疫性腦炎的關(guān)系已得到證實(shí)。其中,抗N-甲基-D-天冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)腦炎是針對 NMDAR 的 GluN1(NR1)亞基細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的與自身抗體存在相關(guān)的疾病。2007年該病首次在表現(xiàn)為彌漫性腦病、癲癇和精神癥狀的伴有卵巢畸胎瘤的年輕女性中發(fā)現(xiàn)�？筃MDAR腦炎的臨床表現(xiàn)包括精神癥狀和記憶障礙,伴有不同程度的運(yùn)動障礙、癲癇和自主神經(jīng)功能障礙,這些癥狀有可能發(fā)展為昏迷,在極少數(shù)情況下會導(dǎo)致死亡。甲狀腺激素對發(fā)育和生理過程有重要影響,對很多系統(tǒng)有影響,其中中樞神經(jīng)系統(tǒng)是最重要的靶點(diǎn)。發(fā)育過程中人類甲狀腺激素供應(yīng)的改變可導(dǎo)致不可逆轉(zhuǎn)的智力遲鈍和神經(jīng)功能缺陷。在成年人中,甲狀腺激素影響情緒和行為,甲狀腺疾病可導(dǎo)致精神癥狀。既往研究表明系統(tǒng)性免疫疾病如自身免疫性甲狀腺疾病,與免疫介導(dǎo)的神經(jīng)功能障礙性疾病如多發(fā)性硬化、視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病等常有交織或共病�？筃MDAR腦炎有時(shí)與血清學(xué)標(biāo)記陽性、非器官特異性自身免疫性指標(biāo)如抗核抗體共存。最近的研究發(fā)現(xiàn),游離三碘甲腺原氨酸(free tri-iodothyronine,fT3)可以在一些危重疾病中,也可在一些自身免疫性疾病中如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病中作為一種預(yù)后不良的指標(biāo)。甲狀腺激素也密切參與在免疫系統(tǒng)中,如細(xì)胞免疫。但甲狀腺功能與免疫相關(guān)指標(biāo)仍未在抗NMDAR抗體腦炎中討論�？筃MDAR腦炎是否有甲狀腺功能的改變?這些改變與哪些臨床特征有關(guān)?抗NMDAR腦炎的甲狀腺功能的改變是否有表觀遺傳學(xué)如lncRNA及mRNA的變化?轉(zhuǎn)錄組水平中又主要影響哪些功能通路?炎癥和免疫的表觀遺傳調(diào)控是一個(gè)新興領(lǐng)域。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是長度超過200個(gè)核苷酸的非蛋白編碼RNA,通過多種機(jī)制在許多生物學(xué)過程中發(fā)揮著重要的作用,其中包括調(diào)節(jié)先天和適應(yīng)性免疫反應(yīng)以及免疫細(xì)胞發(fā)育方面。免疫系統(tǒng)提供了一個(gè)高度有序的生物學(xué)環(huán)境,在這個(gè)環(huán)境中,細(xì)胞表型和功能被精細(xì)地描繪出來,細(xì)胞成分很容易獲得和操縱,并且可以通過體外和體內(nèi)模型在分子和細(xì)胞水平上實(shí)現(xiàn)干擾。lncRNA在免疫系統(tǒng)和自身免疫性疾病中的作用在知識和未來前景方面存在重大空白,有望作為一種潛在的生物標(biāo)志物�？筃MDAR腦炎患者可出現(xiàn)一系列廣泛的癥狀和體征,這些癥狀和體征可能千變百化,難以診斷。目前抗NMDAR腦炎的檢測,包括顱腦磁共振成像(MRI)和腦脊液(CSF)研究,可以是非特異性的改變,也可以是正常的。血清和腦脊液中的抗體都是特異性的,腦脊液中往往更敏感,但結(jié)果往往延遲�？紤]到早期診斷和治療抗NMDAR腦炎與改善預(yù)后相關(guān)這一點(diǎn)至關(guān)重要。因此,有必要使用其他客觀測試來快速診斷和確定以及潛在的監(jiān)測治療過程,并深入研究抗NMDAR腦炎的表觀遺傳學(xué)機(jī)制。因此,在第一部分我們研究了甲狀腺功能與免疫相關(guān)指標(biāo)在抗NMDAR抗體腦炎中與臨床特點(diǎn)的關(guān)系,并從第二部分轉(zhuǎn)錄組水平探尋影響抗NMDAR腦炎的包括甲狀腺功能在內(nèi)的可能的功能通路。研究目的:首先,評估抗NMDAR腦炎患者甲狀腺功能障礙和抗甲狀腺抗體出現(xiàn)的頻率,并研究甲狀腺功能障礙/自身免疫與抗NMDAR腦炎臨床特征之間的關(guān)系。然后,為了了解表觀遺傳機(jī)制在抗NMDAR腦炎包括出現(xiàn)低T3綜合征的發(fā)病機(jī)制中的潛在作用,我們開展了抗NMDAR腦炎患者lncRNA和信使RNA(messenger RNA,mRNA)的差異表達(dá)研究。比較抗NMDAR腦炎患者和健康對照組中差異的lncRNA和mRNA的表達(dá)情況。研究方法:1.選取山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院從2014年1月至2018年1月確診為抗NMDAR抗體腦炎的患者43例,并隨機(jī)篩選于我院健康查體中心檢查甲狀腺功能的225人作為健康對照組,測量并收集其甲狀腺激素及甲狀腺抗體水平。收集患者的臨床特征及輔助檢查結(jié)果,采用改良Rankin評分(modified Rankin scale,mRS)對神經(jīng)功能進(jìn)行評估,比較NMDAR腦炎中甲狀腺功能及相關(guān)免疫指標(biāo)與健康對照組的差異。其次,進(jìn)一步將抗NMDAR抗體腦炎患者分為低T3綜合征組與無低T3綜合征組,比較其臨床特征、指標(biāo),疾病嚴(yán)重程度與預(yù)后等。隨后通過相關(guān)分析進(jìn)一步分析抗NMDAR腦炎與低T3綜合征相關(guān)的因素。最后,通過成對比較患者治療前后的fT3等水平及疾病嚴(yán)重程度評分,研究疾病改善程度與fT3水平的關(guān)系。2.首先,將符合納入標(biāo)準(zhǔn)的確診為抗NMDAR腦炎的患者納入我們的純觀察性研究,并收集年齡與性別相匹配的健康對照組,將患者與健康對照組的血漿標(biāo)本收集到-80°冰箱中保存。從血漿中提取總RNA,通過對5例患者和5例健康對照組進(jìn)行RNA測序研究,篩選出差異表達(dá)的lncRNA及mRNA,采用基因本體論(Gene Ontology,GO)功能注釋分析法、京都基因與基因組百科(Kyoto Encyclopedia of Genes and genome,KEGG)通路分析法進(jìn)行差異表達(dá)分析,并構(gòu)建lncRNA-mRNA共表達(dá)網(wǎng)絡(luò),采用qRT-PCR進(jìn)一步驗(yàn)證11例患者和11例健康對照組中某些lncRNA和mRNA的表達(dá)水平。研究結(jié)果:1.抗NMDAR腦炎患者與健康對照組比較,血清fT3和促甲狀腺激素(thyroid-stimulating hormone,TSH)水平相對較低(p 均0.001)。在各種甲狀腺功能障礙中,抗NMDAR腦炎的低T3綜合征也更常發(fā)生(25.6 vs 0.4%,p0.001)。然而,就甲狀腺抗體和其他類型的甲狀腺功能障礙的陽性率而言,在患者和健康對照組之間未檢測到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。進(jìn)一步以fT3水平比較抗NMDAR腦炎患者亞組發(fā)現(xiàn),伴隨低T3綜合征的患者往往住院時(shí)間較長(p=0.006),異常腦磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)發(fā)現(xiàn)率較高(p=0.033),意識下降頻率較高(p=0.029),入院時(shí)和出院時(shí)mRS評分也更高(p =0.002,p = 0.022),但出院后3個(gè)月的mRS評分無明顯差異。通過相關(guān)分析表明,低fT3水平與顱腦MRI異常、意識下降和入院時(shí)的mRS評分有關(guān)(p=0.002,p0.001,p0.001)。隨著mRS評分的改善,fT3似乎逐漸恢復(fù)到正常水平(r=-0.649,p=0.002)。2.檢測到抗NMDAR腦炎患者中共83個(gè)lncRNA與健康對照組相比存在顯著差異表達(dá),其中上調(diào)的lncRNA有63個(gè),下調(diào)的lncRNA有20個(gè);共有2345個(gè)mRNA顯著差異表達(dá),其中上調(diào)的mRNA有1509個(gè),下調(diào)的mRNA有836個(gè)。GO分析和KEGG通路分析顯示,抗NMDAR腦炎的急性病程中,多種生物功能受到影響并變化,大多數(shù)差異表達(dá)基因涉及病毒致癌、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、吞噬體、趨化因子信號通路、阿爾茨海默病和B細(xì)胞受體信號通路。并有一部分涉及甲狀腺激素生成、甲狀腺癌、甲狀腺激素信號通路、自身免疫性甲狀腺疾病等。進(jìn)一步通過對11例患者和11例健康對照進(jìn)行qRT-PCR驗(yàn)證,確認(rèn)6個(gè)lncRNA和4個(gè)mRNA的水平,其結(jié)果也與RNA測序結(jié)果一致。最后,在一些有意義的KEGG分析中,比如趨化因子信號通路、長時(shí)增強(qiáng)、B細(xì)胞受體信號通路和MAPK信號通路中構(gòu)建lncRNA-mRNA的共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)。研究結(jié)論:1.抗NMDAR腦炎患者常伴有甲狀腺功能異常,尤其是低T3綜合征。出現(xiàn)低T3綜合征時(shí),患者往往臨床嚴(yán)重程度較高,意識下降率較高,住院時(shí)間較長,MRI檢查結(jié)果異常率較高。然而,fT3水平似乎不影響抗NMDAR腦炎的預(yù)后。2.進(jìn)一步的轉(zhuǎn)錄組水平研究提示lncRNA參與抗NMDAR腦炎包括甲狀腺激素生成、甲狀腺抗體、甲狀腺激素信號通路等致病過程,并涉及其他多個(gè)分子通路。具有可發(fā)現(xiàn)相關(guān)的疾病診斷、預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物及可能的治療靶點(diǎn),幫助診斷、治療和預(yù)后的重要意義。
【圖文】：

圖１．抗ＮＭＤＡＲ腦炎患者與對照組ｍＲＮＡ和ＩｎｃＲＮＡ差異表達(dá)概況�；鹕綀D逡逑ａ、ｂ分別顯示為ｍＲＮＡ邋（ａ）和ＩｎｃＲＮＡ邋（ｂ）。豎線表示ＦＤＲ，以土２．０為逡逑截止點(diǎn)，水平線表示ｑ值，以０．０５為截止點(diǎn)。紅點(diǎn)表示上調(diào)的ｍＲＮＡ或ＩｎｃＲＮＡ，逡逑藍(lán)點(diǎn)表示下調(diào)的ｍＲＮＡ或ＩｎｃＲＮＡ。逡逑ｉ邋邐邋ｌｌ逡逑

邐山東大學(xué)碩士學(xué)位論文邐逡逑２０邐２０逡逑１５邐１５逡逑１邐Ｓ逡逑（Ｄ邐ＴＯ逡逑■邐？邋Ｄｏｗｎ邋ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ邋＞邐■邋Ｄｏｗｎ邋ｒｅ＾ｕｂｒｔｉｏｎ逡逑■Ｓ邋１０邐Ｎｏｔ邋Ｓｔｇｎｉｔｉｃａｎｔ邋２邋ｌ0邐Ｎｏｔ邋Ｓｉｇｎｄｔｃａｎｔ逡逑0邐？邋Ｕｐ邋ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ邋0邐－邋Ｕｐ邋ｒｅｇＵａｔｔｏｎ逡逑５邐￡：＇．邐？逡逑§；逡逑ｉ邐柳！邐■＊．邋？＝－邋？＇？邐ｉ逡逑－１０邐＞５邐－２邐２邋Ｓ邐１０邐－１０邐－５邐－２邋Ｓ邋５邐１０逡逑Ｌｏｇ２邋（Ｆｏｌｄ－ｃｈａｎｇｅ）邐ａ邐Ｌｏｇ２邋（Ｆｏｌｄ－ｃｈａｎｇｅ）邐ｂ逡逑圖１．抗ＮＭＤＡＲ腦炎患者與對照組ｍＲＮＡ和ＩｎｃＲＮＡ差異表達(dá)概況�；鹕綀D逡逑ａ、ｂ分別顯示為ｍＲＮＡ邋（ａ）和ＩｎｃＲＮＡ邋（ｂ）。豎線表示ＦＤＲ，以土２．０為逡逑截止點(diǎn)，水平線表示ｑ值，，以０．０５為截止點(diǎn)。紅點(diǎn)表示上調(diào)的ｍＲＮＡ或ＩｎｃＲＮＡ，逡逑藍(lán)點(diǎn)表示下調(diào)的ｍＲＮＡ或ＩｎｃＲＮＡ。逡逑
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R742

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本文編號：2620718