【摘要】：目的:探討PGC-1α是否通過調(diào)控線粒體融合蛋白MFN1/MFN2的表達(dá),參與大鼠的癲癇發(fā)作。方法:健康成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為以下四組:正常組(n=5)、癲癇組(6h、24h、72h、1W四個(gè)時(shí)間點(diǎn),n=5×4)、PGC-1α抑制劑(Compound C)組(n=5)及DMSO溶劑對(duì)照組(n=5)。建立氯化鋰-匹羅卡品癲癇大鼠模型,行為學(xué)觀察各組大鼠首次癲癇發(fā)作的潛伏期以及1小時(shí)內(nèi)癲癇發(fā)作次數(shù);免疫熒光及Western Blot檢測(cè)PGC-1α和MFN1/2在各組大鼠海馬中的表達(dá)情況。結(jié)果:1.行為學(xué)結(jié)果顯示:癲癇組的大鼠首次癲癇發(fā)作潛伏期為19.35±1.51 min,DMSO溶劑對(duì)照組為19.22±1.00 min,Compound C組為14.91±1.01min;癲癇組的1小時(shí)內(nèi)大鼠癲癇發(fā)作次數(shù)為6.2±0.84次,DMSO溶劑對(duì)照組為6.0±0.71次,Compound C組為8.0±1.22次。大鼠首次癲癇發(fā)作潛伏期和1小時(shí)內(nèi)癲癇發(fā)作次數(shù)在癲癇組與溶劑對(duì)照組之間比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與上述兩組比較,Compound C組大鼠首次癲癇發(fā)作潛伏期明顯縮短,1小時(shí)內(nèi)癲癇發(fā)作次數(shù)增多,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.Western Blot檢測(cè)PGC-1α發(fā)現(xiàn):正常對(duì)照組大鼠海馬中PGC-1α有基礎(chǔ)水平表達(dá);癲癇組PGC-1α的表達(dá)在癲癇發(fā)作后6h較正常對(duì)照組出現(xiàn)明顯的下調(diào),24h表達(dá)出現(xiàn)一個(gè)高峰(P0.05);Compound C組,癲癇發(fā)作后第24h,PGC-1α的表達(dá)較癲癇組(24h)顯著降低(P0.05);3.Western Blot檢測(cè)MFN2發(fā)現(xiàn):正常對(duì)照組大鼠的海馬中MFN2有基礎(chǔ)水平的表達(dá);癲癇模型大鼠中,MFN2在造模成功后6h表達(dá)較正常對(duì)照組出現(xiàn)明顯下調(diào),24h表達(dá)出現(xiàn)增高,與正常對(duì)照組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);在應(yīng)用AMPK抑制劑Compound C干預(yù)后,癲癇造模后第24h,Compound C組大鼠中MFN2的表達(dá)較癲癇組(24h)顯著下調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);4.Western Blot檢測(cè)MFN1結(jié)果示:正常對(duì)照組大鼠的海馬中MFN1有基礎(chǔ)水平的表達(dá);癲癇組大鼠MFN1在癲癇發(fā)作后6h和24h均出現(xiàn)表達(dá)增高,但在6h出現(xiàn)表達(dá)高峰。與正常對(duì)照組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);在應(yīng)用AMPK抑制劑Compound C干預(yù)后,癲癇造模后第24h,Compound C組大鼠中MFN1的表達(dá)與癲癇組表達(dá)相當(dāng)(24h),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)5.免疫熒光檢測(cè)MFN1/2的定位結(jié)果示:MFN1/2主要表達(dá)于神經(jīng)元的胞膜及胞質(zhì)中。免疫熒光檢測(cè)PGC-1α發(fā)現(xiàn)其表達(dá)于神經(jīng)元的胞膜及胞質(zhì)中,且定位在興奮性突觸后。結(jié)論:抑制AMPK信號(hào)通路可縮短大鼠首次癲癇發(fā)作潛伏期和加重大鼠癲癇發(fā)作程度,其機(jī)制可能與降低核轉(zhuǎn)錄共激活因子PGC-1α以及融合蛋白MFN1/2的表達(dá)有關(guān)。
【圖文】：

照組為 6.0±0.71 次，Compound C 組為 8.0±1.22 次。癲癇組及溶劑對(duì)照組在首次發(fā)作潛伏期和 1 小時(shí)內(nèi)的發(fā)作次數(shù)相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；而 CompounC 組與上述兩組比較，大鼠首次癲癇發(fā)作潛伏期明顯縮短，1 小時(shí)內(nèi)癲癇發(fā)作次數(shù)增多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。腹腔注射 AMPK 抑制劑 Compound C 可明顯縮短癲癇大鼠的首次癲癇發(fā)作潛伏期、增加癲癇發(fā)作次數(shù)。（見表 1、圖 1）表 1 大鼠癲癇發(fā)作的潛伏期及發(fā)作次數(shù)的統(tǒng)計(jì)表（ x ±s）Tab.1 Statistical table of latency and frequency of epileptic seizures in rats（ ±s）Goups Latency of seizures （min） Number of seizures （times/h）EP 19.35±1.51 6.2±0.84DMSO 19.22±1.00#6.0±0.71#Compound C 14.91±1.01*8.0±1.22*Note:*P＜0.05 vs EP group;#P＞0.05vs EP group

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 李東對(duì)照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；MFN2 在 Compound C 組和溶劑對(duì)照組中的表達(dá)與內(nèi)參（β-Tublin）的 OD 值比分別為：0.07±0.002、0.1±0.001，，結(jié)果表明癲癇發(fā)作 24h 后 Compound C 組 MFN2 的表達(dá)較癲癇組下調(diào)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；溶劑對(duì)照組與癲癇組（24h）之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。(見圖 4）
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R742.1

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本文編號(hào)：2618714