【摘要】：目的:研究SERCA2(ATP2a2)基因及蛋白在難治性癲癇細胞模型中的表達,天麻素干預對難治性癲癇神經元SERCA2(ATP2a2)表達的影響,進一步探討天麻素抗癲癇的機制。方法:新生乳鼠,75%酒精消毒后迅速斷頭取腦,分離出雙側海馬,以神經元專用無血清培養(yǎng)基(neurobasal plus media)和B 27補充劑等體外培養(yǎng)海馬神經元;第5天用抗NeuN免疫熒光法鑒定神經元并計算純度;第7天,將培養(yǎng)的神經元隨機分組為正常對照組(C)、模型組(M)、模型+1μM天麻素組(G1)、模型+10μM天麻素組(G2)、模型+100μM天麻素組(G3),模型+1 mM天麻素組(G4),倒置相差顯微鏡觀察各組神經元的形態(tài)學變化。實時熒光定量PCR(RT-PCR)檢測ATP2a2(SERCA2)mRNA的表達,Western blot技術檢測ATP2a2蛋白及c-PARP蛋白的表達變化。結果:(1)難治性癲癇細胞模型出現神經元融合、死亡。(2)在模型組,凋亡指標c-PARP蛋白的表達明顯上調(P0.01),天麻素可以降低凋亡指標c-PARP的表達(P0.05)。(3)相比于對照組,模型組ATP2a2(SERCA2)mRNA出現表達量降低(P0.05);100μM天麻素能顯著上調ATP2a2(SERCA2)mRNA的表達(P0.05)。(4)ATP2a2蛋白主要在內質網表達,平均灰度值:正常對照組(1.0039±0.0027),模型組(0.4371359±0.1522186),模型+100μM天麻素組(0.9770±0.0323),正常對照組和模型組之間差異有統計學意義(P0.05),模型組和模型+100μM天麻素組之間差異有統計學意義(P0.05)。結論:1.難治性癲癇模型存在SERCA2(ATP2a2)基因及蛋白表達下調及神經網絡變化。2.難治性癲癇細胞模型中存在神經元的損傷、凋亡。3.天麻素可以上調難治性癲癇細胞模型SERCA2(ATP2a2)基因及蛋白的表達。4.天麻素可以緩解難治性癲癇細胞模型的凋亡。5.天麻素可通過上調SERCA2(ATP2a2)表達來緩解難治性癲癇細胞模型的凋亡。
【圖文】：

第 2 章 結果第 2 章 結果2.1 倒置相差顯微鏡下體外培養(yǎng)海馬神經元的形態(tài)學觀察剛分離種植的海馬神經元為圓形，透亮，無突起，呈單細胞懸浮狀態(tài)（Figure1（a））；4-6 h 后，絕大部分海馬神經元可以良好貼壁，少數神經元可有 1-2 個小突起長出。種植 6-10 h后 Plating media 全部換液為 Culture media。培養(yǎng)第 3 天，貼壁的海馬神經元伸長出粗細不均的數個突起，胞體透亮，呈梭形、三角形等，相鄰的神經元之間可有稀疏網絡連接（Figure 1（b））。培養(yǎng)至第 5 天的海馬神經元，生長狀態(tài)良好，立體感和折光性明顯，胞體增大，突起延長交織成網（Figure 1（c））。培養(yǎng)第 7 天的海馬神經元，胞體增大飽滿，有明顯的光暈；神經元突起變多，軸突細長，神經元之間突起相互交織，形成稠密復雜但分布均勻的神經網絡（Figure 1（d））。

第 2 章 結果NeuN 蛋白存在于哺乳動物中樞神經系統中的大多數神經元的細胞核和質中，存在 46kDa 和 48 kDa 兩個亞型[40]；除少數類型神經元（如小腦、視網膜感光細胞和 γ-運動神經元等）外，絕大多數神經元是強 NeuN 陽該蛋白質的結構仍然未知，蛋白質的功能也仍然不完全清楚，但 Anti-Neu個可靠的標記分裂后神經元的抗體，在識別組織培養(yǎng)和切片的神經元、測域的神經和膠質細胞比、研究神經元分化和評估神經元狀態(tài)等方面，已經用了 20 年[41]。免疫熒光結果顯示，明場視野下，細胞狀態(tài)良好（Figure 2（共聚焦顯微鏡下，海馬神經元胞體及胞質可采集到明顯熒光信號（Figure 性對照組未見熒光。通過計算海馬神經元純度，，培養(yǎng)至第 5 天的海馬神超過 92%，說明本實驗中方法所培養(yǎng)的海馬神經元純度足夠高，可以用治性癲癇細胞模型及后續(xù)實驗。2.2 海馬神經元的鑒定及純度計算結果
【學位授予單位】：長江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R742.1

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 李飛;成祥林;;天麻素對癲疒間大鼠海馬氧化應激水平的影響[J];實用藥物與臨床;2015年06期

2 李飛;孫亞凌;成祥林;蔡光欣;蔡新宇;徐曉明;朱占勝;;天麻素調節(jié)癲疒間大鼠海馬炎癥信號通路的抗癲疒間機制研究[J];實用藥物與臨床;2015年05期

本文編號：2617994