【摘要】：目的:研究人腦膠質(zhì)瘤細胞株中Twist2的表達水平;探討Twist2影響膠質(zhì)瘤侵襲及遷移的可能機制是否為上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)。方法:1、通過q-PCR檢測人腦膠質(zhì)瘤細胞株U87、T98G、H4、U118和SHG44中Twist2 mRNA表達水平。2、過表達Twist2基因質(zhì)粒慢病毒感染人腦膠質(zhì)瘤細胞株U87和T98G。每組細胞株分為三組:第一組:空白組(Blank);第二組:過表達陰性對照組(NC-ox);第三組:過表達Twist2基因組(Twist2-ox)。3、CCK-8法、Transwell小室侵襲、Wound healing實驗分別檢測細胞增殖、侵襲和遷移能力。4、裸鼠成瘤體內(nèi)實驗檢測各組細胞侵襲和遷移能力。5、Western blot檢測EMT相關(guān)蛋白:E-鈣粘連蛋白(E-cadherin)、N-鈣粘連蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和纖維連接蛋白(Fibronectin)的表達水平。結(jié)果:1、人腦膠質(zhì)瘤細胞株U87、T98G、H4、U118和SHG44中均存在Twist2 mRNA的表達,其中U87和T98G的表達量相對較低。2、CCK-8法顯示,過表達Twist2組細胞增殖能力無明顯變化,差異無統(tǒng)計學(xué)意義;Transwell小室侵襲、Wound healing實驗顯示Twist2組侵襲及遷移能力增強,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。3、體內(nèi)裸鼠成瘤實驗,過表達Twist2基因組中瘤體體積更大、生長速度更快,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。4、Western blot實驗:過表達Twist2組E-鈣粘連蛋白(E-cadherin)表達量顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義;而N-鈣粘連蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和纖維連接蛋白(Fibronectin)表達量顯著上升,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:Twist2促進人腦膠質(zhì)瘤細胞株U87和T98G的侵襲和遷移能力的可能機制是EMT。
【圖文】：

觀察 Twist2 基因在各組人腦膠質(zhì)瘤細胞株 U87、T98G、H4、U118、STwist2 mRNA 的表達情況 RQ 值（各組細胞的目的基因與內(nèi)參 GAPDH 的相對表達量.0 進行方差分析。-PCR 檢測各組人腦膠質(zhì)瘤細胞株 Twist2 mRNA 的表達情腦膠質(zhì)瘤細胞株 U87、T98G、H4、U118 和 SHG44 中 Twist2 在 U87 和 T98G 兩株細胞株中 Twist2 mRNA 表達量較其它細 U87（1±0），T98G（1.006±0.1351），H4（1.643±0.536819±0.875029），SHG44（5512.655±664.9427）。

觀察 Twist2 基因?qū)θ四X膠質(zhì)瘤細胞株 U87 和 T98G 侵襲和遷移能力個/ml（T98G），倒置熒光顯微鏡觀察所感染細胞的熒光強下圖所示：兩株人腦膠質(zhì)瘤細胞株在慢病毒感染 24h 時熒光微弱，72h 時熒光亮度增強且熒光點密度較大，但人 在慢病毒感染 96h 時熒光亮度及熒光點密度比慢病毒感染 膠質(zhì)瘤細胞株 T98G，在慢病毒感染 96h 時的熒光亮度及h 時相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義；綜合考慮，人腦膠質(zhì)瘤細 MOI 值均等于 15 時，為最佳感染值。U87 (圖 3-1A)，，T98G（A
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R739.4

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本文編號：2612697