【摘要】：目的:研究人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中Twist2的表達(dá)水平;探討Twist2影響膠質(zhì)瘤侵襲及遷移的可能機(jī)制是否為上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)。方法:1、通過q-PCR檢測(cè)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87、T98G、H4、U118和SHG44中Twist2 mRNA表達(dá)水平。2、過表達(dá)Twist2基因質(zhì)粒慢病毒感染人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87和T98G。每組細(xì)胞株分為三組:第一組:空白組(Blank);第二組:過表達(dá)陰性對(duì)照組(NC-ox);第三組:過表達(dá)Twist2基因組(Twist2-ox)。3、CCK-8法、Transwell小室侵襲、Wound healing實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)細(xì)胞增殖、侵襲和遷移能力。4、裸鼠成瘤體內(nèi)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞侵襲和遷移能力。5、Western blot檢測(cè)EMT相關(guān)蛋白:E-鈣粘連蛋白(E-cadherin)、N-鈣粘連蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和纖維連接蛋白(Fibronectin)的表達(dá)水平。結(jié)果:1、人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87、T98G、H4、U118和SHG44中均存在Twist2 mRNA的表達(dá),其中U87和T98G的表達(dá)量相對(duì)較低。2、CCK-8法顯示,過表達(dá)Twist2組細(xì)胞增殖能力無(wú)明顯變化,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;Transwell小室侵襲、Wound healing實(shí)驗(yàn)顯示Twist2組侵襲及遷移能力增強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、體內(nèi)裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn),過表達(dá)Twist2基因組中瘤體體積更大、生長(zhǎng)速度更快,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4、Western blot實(shí)驗(yàn):過表達(dá)Twist2組E-鈣粘連蛋白(E-cadherin)表達(dá)量顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而N-鈣粘連蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和纖維連接蛋白(Fibronectin)表達(dá)量顯著上升,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:Twist2促進(jìn)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87和T98G的侵襲和遷移能力的可能機(jī)制是EMT。
【圖文】：

觀察 Twist2 基因在各組人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株 U87、T98G、H4、U118、STwist2 mRNA 的表達(dá)情況 RQ 值（各組細(xì)胞的目的基因與內(nèi)參 GAPDH 的相對(duì)表達(dá)量.0 進(jìn)行方差分析。-PCR 檢測(cè)各組人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株 Twist2 mRNA 的表達(dá)情腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株 U87、T98G、H4、U118 和 SHG44 中 Twist2 在 U87 和 T98G 兩株細(xì)胞株中 Twist2 mRNA 表達(dá)量較其它細(xì) U87（1±0），T98G（1.006±0.1351），H4（1.643±0.536819±0.875029），SHG44（5512.655±664.9427）。

觀察 Twist2 基因?qū)θ四X膠質(zhì)瘤細(xì)胞株 U87 和 T98G 侵襲和遷移能力個(gè)/ml（T98G），倒置熒光顯微鏡觀察所感染細(xì)胞的熒光強(qiáng)下圖所示：兩株人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株在慢病毒感染 24h 時(shí)熒光微弱，72h 時(shí)熒光亮度增強(qiáng)且熒光點(diǎn)密度較大，但人 在慢病毒感染 96h 時(shí)熒光亮度及熒光點(diǎn)密度比慢病毒感染 膠質(zhì)瘤細(xì)胞株 T98G，在慢病毒感染 96h 時(shí)的熒光亮度及h 時(shí)相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；綜合考慮，人腦膠質(zhì)瘤細(xì) MOI 值均等于 15 時(shí)，為最佳感染值。U87 (圖 3-1A)，，T98G（A
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R739.4

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本文編號(hào)：2612697