【摘要】：目的探討注射用丹參多酚酸(Salvianolate,SLI)介導(dǎo)PIDD通路改善大鼠缺血性腦損傷的機(jī)制方法選擇40只健康雄性SD大鼠,隨機(jī)均分為4組:假手術(shù)組、模型組、SLI組、抑制劑組,每組10只,其中抑制劑組所用藥物為P53誘導(dǎo)的死亡結(jié)構(gòu)域蛋白(P53-induced protein with a death domain,PIDD)的特異性抑制劑BubR1(Bub-ralated1)。假手術(shù)組大鼠,僅分離出右側(cè)頸總動脈、頸外動脈、頸內(nèi)動脈,不做手術(shù)處理,其余三組均采用改良線栓法制備大鼠右側(cè)大腦中動脈閉塞模型(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)。待模型建立成功后,SLI組進(jìn)行丹參多酚酸治療,抑制劑組注入丹參多酚酸和抑制劑,假手術(shù)組及模型組注入等量生理鹽水,采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法和Western blot法檢測各組大鼠缺血再灌注后不同時間點(diǎn)(1 d、3 d、7 d)腦組織勻漿中PIDD mRNA及蛋白表達(dá)變化以及缺血再灌注后7d caspase-2、t-BID、cytochrome-c、caspase-3蛋白表達(dá)。于缺血再灌注后1 d、3 d、7 d對大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評分,采用改良神經(jīng)功能缺損評分法(modified Neurological Severity Score,mNSS)。取缺血再灌注后7d腦組織行HE染色觀察腦組織病理學(xué)變化,以及采用TUNEL法檢測神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果1、各組缺血再灌注1d時mNSS評分比較無明顯差異(P0.05);與模型組相比,SLI組在缺血再灌注后3 d、7 d時神經(jīng)功能缺損評分明顯降低(P0.01),與抑制劑組相比,SLI組缺血再灌注后3 d、7 d神經(jīng)功能缺損評分高于抑制劑組(P0.01);2、與假手術(shù)組相比,模型組1d、3d、7d PIDD mRNA及蛋白表達(dá)量明顯增高(P0.01)。SLI組缺血再灌注后1d、3d、7d PIDD mRNA及蛋白表達(dá)量明顯低于模型組(P0.01),其中缺血再灌注后1d PIDD mRNA明顯低于模型組;抑制劑組缺血再灌注后1d、3d、7d PIDD mRNA及蛋白表達(dá)量高于SLI組(P0.01),其中缺血再灌注后1d PIDD mRNA明顯低于丹參組及模型組。3、與假手術(shù)組相比,模型組缺血再灌注后1d、3d、7d caspase-2、t-BID、cytochrome-c、caspase-3蛋白表達(dá)明顯增高(P0.01);SLI組缺血再灌注后3d、7d caspase-2、t-BID、cytochrome-c、caspase-3蛋白表達(dá)明顯低于模型組(P0.01),抑制劑組缺血再灌注后1d、3d、7d caspase-2、t-BID、cytochrome-c、caspase-3蛋白表達(dá)高于抑制劑組(P0.01)。4、缺血再灌注后7d假手術(shù)組神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)無明顯病理學(xué)變化,神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)未見明顯水腫、壞死,形態(tài)基本正常,細(xì)胞結(jié)構(gòu)較為緊密,排列也較為整齊,未見TUNEL陽性細(xì)胞,其余三組均出現(xiàn)了不同程度的神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況,模型組腦缺血周圍組織壞死較多,神經(jīng)細(xì)胞大小不一,排列紊亂,可見變形萎縮,神經(jīng)元密度相對較低;抑制劑組神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況最輕,凋亡指數(shù)明顯低于模型組和SLI組(P0.05),SLI組細(xì)胞凋亡情況介于抑制劑組和模型組之間,TUNEL陽性細(xì)胞明顯低于模型組(P0.05)。結(jié)論1、大鼠腦缺血性再灌注后腦組織PIDD表達(dá)明顯增高;2、注射用丹參多酚酸改善大鼠腦缺血再灌注損傷可能與抑制PIDD/caspase-2/t-BID/cytochrome c/caspase-3信號通路有關(guān)。
【圖文】：

模型組、丹參組與抑制劑組三組兩兩比較有顯著性（P＜0.01），，但抑制劑組與假手術(shù)組 1d、7d 兩兩比較差異無顯著性(P>0.05) ；丹參組 1d、3d、7d PIDD mRN表達(dá)均明顯低于模型組（P＜0.01）；抑制劑組 1d、3d、7d PIDD mRNA 表達(dá)顯著低于丹參組及模型組（P＜0.01），見表 2、圖 1、圖 2。表 2 各組不同時間點(diǎn)腦組織缺血區(qū)腦組織 PIDD mRNA 表達(dá)水平比較（x ±S,n=10組別 1d 3d 7d假手術(shù)組 1.00±0.15 1.00±0.15 1.00±0.15模型組 4.10±0.39** 3.16±0.30** 1.86±0.22**丹參組 2.59±0.19**##2.61±0.30**##1.60±0.16**##抑制劑組 1.24±0.19** 1.23±0.26** 1.37±0.28**與假手術(shù)組比較,**P＜0.01;與抑制劑組相比,##P＜0.01

圖 2 PIDD 依次在 1、3、7d 時溶解曲線Figure 2 PIDD alpha dissilution curve in 1,3,7d2.3 各組不同時間點(diǎn)缺血區(qū)腦組織 PIDD、 caspase-2、t-BID、cytochrome-caspase-3 的蛋白表達(dá)量采用 Western blot 法檢測缺血區(qū)腦組織 PIDD、 caspase-2、t-Bcytochrome-c 、caspase-3 的蛋白表達(dá)量，結(jié)果如下：模型組、丹參組和抑組 PIDD 1d、3d、7d 蛋白表達(dá)均高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=663.231.584、182.711，P＜0.01），丹參組 PIDD 1d、3d、7d 蛋白表達(dá)顯著低于組但高于抑制劑組（F = 67.700、141.168、871.009，P＜0.01），三組兩兩
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R743

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8 劉鵬

本文編號：2609098