【摘要】：一、研究目的以腦卒中為代表的心腦血管疾病已成為威脅我國(guó)居民健康的首要疾病,其中頸動(dòng)脈狹窄不穩(wěn)定斑塊的脫落是導(dǎo)致腦卒中的重要病因。斑塊內(nèi)部壞死核心與纖維帽動(dòng)態(tài)平衡是影響動(dòng)脈粥樣斑塊穩(wěn)定性的決定性因素。胞葬作用是吞噬細(xì)胞清除程序性死亡細(xì)胞的生理過(guò)程。在動(dòng)脈粥樣斑塊中,巨噬細(xì)胞胞葬作用的清除能力可直接影響斑塊內(nèi)壞死核心的大小,胞葬作用水平下降將導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣斑塊穩(wěn)定性降低。殼多糖酶3樣蛋白1(CHI3L1)是一種與缺血性腦卒中高度相關(guān)的分子標(biāo)記物,本課題組的前期研究發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)CHI3L1在頸動(dòng)脈狹窄患者血清中升高,且可能與斑塊不穩(wěn)定性相關(guān),目前關(guān)于CHI3L1對(duì)動(dòng)脈粥樣斑塊穩(wěn)定性的影響及其可能的作用機(jī)制尚無(wú)報(bào)道。了解CHI3L1對(duì)動(dòng)脈粥樣斑塊穩(wěn)定性的影響,將有助于腦卒中高危患者的早期診斷及早期治療。因此本課題主要進(jìn)行的研究為明確CHI3L1對(duì)動(dòng)脈粥樣斑塊的影響并探究其具體的作用機(jī)制。二、研究方法本課題擬在體內(nèi)臨床樣本、體外細(xì)胞及動(dòng)物模型水平明確CHI3L1中對(duì)患者動(dòng)脈粥樣斑塊的影響。首先明確頸動(dòng)脈狹窄患者的斑塊樣本CHI3L1內(nèi)的表達(dá)和分布,同時(shí)分離培養(yǎng)人及小鼠的原代巨噬細(xì)胞,研究CHI3L1在體外對(duì)巨噬細(xì)胞胞葬作用的影響。隨后利用CHI3L1及其中和抗體干預(yù)已構(gòu)建的頸動(dòng)脈不穩(wěn)定斑塊小鼠模型,明確CHI3L1在體內(nèi)對(duì)巨噬細(xì)胞胞葬作用及斑塊穩(wěn)定性的影響。并利用蛋白質(zhì)組學(xué)和生物信息學(xué)技術(shù)篩選CHI3L1下游的靶基因,并探究其調(diào)控的具體分子機(jī)制。三、研究結(jié)果我們通過(guò)臨床樣本的組織切片分析及RNA檢測(cè),明確CHI3L1在不穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中表達(dá)水平較高,且主要分布在斑塊壞死核心附近。提取小鼠骨髓巨噬細(xì)胞及人外周血巨噬細(xì)胞后,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)及激光共聚焦顯微鏡證明CHI3L1可抑制巨噬細(xì)胞的胞葬作用。在構(gòu)建的頸動(dòng)脈不穩(wěn)定斑塊小鼠模型中,注射CHI3L1的小鼠與對(duì)照組相比,胞葬作用減弱且斑塊較不穩(wěn)定,而予中和抗體注射的小鼠較對(duì)照組,胞葬作用較強(qiáng)且斑塊較穩(wěn)定。通過(guò)分析臨床樣本及蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),篩選出CHI3L1影響胞葬作用的靶基因MFGE8,并通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了驗(yàn)證。通過(guò)回補(bǔ)MFGE8后觀察巨噬細(xì)胞胞葬作用變化,證實(shí)CHI3L1是通過(guò)抑制MFGE8表達(dá)而抑制巨噬細(xì)胞胞葬作用。四、研究結(jié)論本課題證實(shí)CHI3L1可降低動(dòng)脈粥樣斑塊的穩(wěn)定性。同時(shí)本課題通過(guò)原代巨噬細(xì)胞的體外實(shí)驗(yàn)及構(gòu)建不穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣斑塊模型小鼠,明確CHI3L1通過(guò)下調(diào)胞葬橋接分子MFGE8的表達(dá)抑制巨噬細(xì)胞的胞葬作用,進(jìn)而導(dǎo)致粥樣斑塊壞死核心增大引起斑塊穩(wěn)定性降低。
【圖文】：

圖 1.1 第一行圖片為無(wú)癥狀性染色，圖 1.1 中斑塊標(biāo)本來(lái)自行頸動(dòng)脈內(nèi)膜斑塊切除術(shù)的認(rèn)的研究標(biāo)準(zhǔn)，癥狀性患者的頸動(dòng)脈斑塊的標(biāo)準(zhǔn)為患者最近 180 天內(nèi)發(fā)生過(guò)頸動(dòng)脈狹窄側(cè)的缺血性腦血管癥狀（腦卒中或短暫性腦缺血發(fā)作）[4,36,37]。我們將頸動(dòng)脈內(nèi)膜斑塊切除術(shù)取得的斑塊標(biāo)本包埋后切片，連續(xù)的冰凍切片分別進(jìn)行CD68 及 DAPI 染色。通過(guò)大的壞死核心和較薄的纖維帽，這意味著斑塊較容易破裂進(jìn)而脫落。而將斑塊內(nèi)部壞死核心的邊緣部分放大后，我們可以發(fā)現(xiàn)在不穩(wěn)定斑塊的壞死核心邊緣，達(dá)較多，且其分布區(qū)域與人巨噬細(xì)胞標(biāo)記這表明CHI3L1在癥狀性患者的癥狀性患者斑塊，第二行圖片為癥狀性患者斑塊。由左至右依次為：CHI3L1 染色，CD68 染色及熒光疊加結(jié)果。斑塊標(biāo)本來(lái)自行頸動(dòng)脈內(nèi)膜斑塊切除術(shù)的頸動(dòng)脈狹窄患者。認(rèn)的研究標(biāo)準(zhǔn)，癥狀性患者的頸動(dòng)脈斑塊通常為不穩(wěn)定性斑塊，而癥狀性頸動(dòng)脈狹窄切片分別進(jìn)行 HE 染色及免疫熒光染色，免疫熒光染色內(nèi)容為HE 染色染色我們可以發(fā)現(xiàn)，不穩(wěn)定斑塊較穩(wěn)定性具有較CD68 的分布基本一致（白色箭頭所指處）�；颊叩膭�(dòng)脈粥樣斑塊中高表達(dá)，且可能影響巨噬細(xì)胞的功能。HE頸動(dòng)脈狹窄患者。根據(jù)目前公癥狀性頸動(dòng)脈狹窄熒光染色內(nèi)容為 CHI3L1、CHI3L1 表動(dòng)脈粥樣斑塊中高表達(dá)，且可能影響巨噬細(xì)胞的功能。

圖 1.2 第一行圖片為穩(wěn)定性斑塊，，第二行圖片為不穩(wěn)定性斑塊DAPI、圖1.2中不穩(wěn)定性斑塊切片來(lái)自手術(shù)建立不穩(wěn)定斑塊模型的動(dòng)脈粥樣硬化模式小鼠（LDL-/-C57）頸動(dòng)脈斑塊標(biāo)本，穩(wěn)定性斑塊切片來(lái)自未手術(shù)的普通動(dòng)脈粥樣硬化模式小鼠（LDL-/-C57）頸動(dòng)脈標(biāo)本。手術(shù)造模的主要原理是通過(guò)線圈套扎的方法是小鼠頸動(dòng)脈出現(xiàn)兩處局部性縮窄，導(dǎo)致局部血流動(dòng)力學(xué)的改變，進(jìn)而引起斑塊穩(wěn)定性的下降[43]。通過(guò)對(duì)這些斑塊冰凍切片免疫熒光染色的對(duì)比我們發(fā)現(xiàn)，未手術(shù)組的小鼠頸動(dòng)脈僅在動(dòng)脈壁周圍有少量斑塊附著，手術(shù)造模組的小鼠頸動(dòng)脈管腔內(nèi)有明顯的粥樣斑塊形成，且以巨噬細(xì)胞（紅色）及非細(xì)胞壞死物質(zhì)為主要成分的壞死核心占據(jù)了粥樣斑塊的大部分區(qū)域，提示斑塊處于不穩(wěn)定狀態(tài)，表明手術(shù)造模成功建立定斑塊模型。而 CHI3L1 （綠色）在不穩(wěn)定斑塊中表達(dá)量較高，其分布區(qū)域與鼠巨噬細(xì)胞標(biāo)記 Mac3 的高度重合（如白色箭頭所指
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R743.3

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 付威;姜英;王婷玉;張赫;董佳琦;萬(wàn)朋;;巨噬細(xì)胞極化與腫瘤的研究進(jìn)展[J];吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào);2019年02期

2 廖成水;毛福超;程相朝;;巨噬細(xì)胞極化在微生物感染中的作用研究進(jìn)展[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2019年03期

3 徐曉偉;魏建超;劉珂;邵東華;李蓓蓓;曹瑞兵;陳溥言;馬志永;胡敬東;邱亞峰;;不同激活狀態(tài)的巨噬細(xì)胞對(duì)流行性乙型腦炎病毒感染的影響[J];中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào);2019年02期

4 邢士剛;;巨噬細(xì)胞在慢性阻塞性肺疾病發(fā)病機(jī)制中的作用研究[J];中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥;2019年12期

5 程相朝;毛福超;;巨噬細(xì)胞極化形成的影響因素研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2019年06期

6 巢汝;黃靚;屈順林;張弛;;巨噬細(xì)胞能量代謝與動(dòng)脈粥樣硬化[J];生命的化學(xué);2018年03期

7 崔凡;穰真;王有為;楊戈;;AIDS患者巨噬細(xì)胞對(duì)白念珠菌的吞噬和滅活功能研究[J];中國(guó)麻風(fēng)皮膚病雜志;2017年04期

8 孟董超;王東;宋娟;盧彥珍;;巨噬細(xì)胞極化在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中的作用研究進(jìn)展[J];長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2017年02期

9 李雪巖;楊玉玉;陳君;;中藥抗巨噬細(xì)胞泡沫化的研究進(jìn)展[J];藥學(xué)與臨床研究;2017年05期

10 袁鋒;尚茹茹;張錦;溫婷;李愛(ài)萍;劉曉紅;;巨噬細(xì)胞極化與動(dòng)脈粥樣硬化[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2015年22期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 楊華;劉海鵬;陳建霞;黃曉辰;鄭瑞娟;劉忠華;戈寶學(xué);;GPR160調(diào)控分枝桿菌入侵宿主巨噬細(xì)胞的機(jī)制研究（英文）[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì)2016年全國(guó)結(jié)核病學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2016年

2 姚芳苡;黃自坤;傅穎媛;;人巨噬細(xì)胞極化相關(guān)長(zhǎng)鏈非編碼RNA表達(dá)譜篩選及研究[A];第十二屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)摘要匯編[C];2017年

3 李枋;霏李杰;;扶正解毒方對(duì)共培養(yǎng)體系下腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞表型變化影響的實(shí)驗(yàn)研究[A];第一屆青年中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學(xué)術(shù)論壇論文集[C];2015年

4 白力;張文蘭;竇晶莉;王永福;;組蛋白修飾與巨噬細(xì)胞極化的關(guān)系[A];第十屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)匯編[C];2015年

5 史玉玲;王又明;豐美福;;巨噬細(xì)胞激活作用的研究[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第五次會(huì)議論文摘要匯編[C];1992年

6 程相朝;毛福超;廖成水;;巨噬細(xì)胞極化形成的影響因素研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物微生態(tài)學(xué)分會(huì)第五屆第十三次全國(guó)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2018年

7 曾嬌;;巨噬細(xì)胞極化對(duì)炎癥性疾病的影響[A];第十三屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)摘要匯編[C];2018年

8 李小鵬;張倫理;;巨噬細(xì)胞極化現(xiàn)象與結(jié)核病的關(guān)系[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)2014全國(guó)微生物學(xué)與免疫學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2014年

9 蔣小麗;姚宇迪;劉卓琦;朱偉鋒;羅達(dá)亞;;乳腺腫瘤細(xì)胞源性外泌體誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化的研究[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)聯(lián)盟2019年學(xué)術(shù)與教學(xué)交流會(huì)摘要集[C];2019年

10 陳羅泉;萬(wàn)曉朋;韓泉;王青青;;白細(xì)胞介素27在巨噬細(xì)胞抗病毒天然免疫應(yīng)答中的作用研究[A];浙江省免疫學(xué)會(huì)第十次學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2016年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 主持人 王建新;巨噬細(xì)胞的多面人生[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2015年

2 通訊員 李靜 記者 胡德榮;惡性腫瘤巨噬細(xì)胞未必皆“惡人”[N];健康報(bào);2014年

3 張化;新技術(shù)有望延長(zhǎng)血小板保存期[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

4 張化;半乳糖可延長(zhǎng)血小板保存期[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

5 蘭克;以嘗試用巨噬細(xì)胞治癱瘓[N];科技日?qǐng)?bào);2000年

6 通訊員 張愉悅 記者 程守勤;巨噬細(xì)胞內(nèi)含炎癥“剎車”蛋白[N];健康報(bào);2020年

7 記者 張家偉;巨噬細(xì)胞水平影響血壓高低[N];健康報(bào);2019年

8 ;癌細(xì)胞能通過(guò)“別吃我”信號(hào)逃避巨噬細(xì)胞[N];中國(guó)科學(xué)報(bào);2019年

9 記者 房琳琳;“別吃我”! 癌細(xì)胞還有第二種方式對(duì)巨噬細(xì)胞這樣說(shuō)[N];科技日?qǐng)?bào);2017年

10 本報(bào)記者 張曄 通訊員 蔡心軼 張翰文;肥胖傷肝？原來(lái)是巨噬細(xì)胞在作怪[N];科技日?qǐng)?bào);2016年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 丁玲;Nrf2調(diào)控小鼠代謝穩(wěn)態(tài)和炎癥因子分泌的多重功能及機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2019年

2 張永紅;PD-1/PD-L1信號(hào)通路調(diào)控巨噬細(xì)胞分化和功能在早期妊娠中的作用及機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2019年

3 劉娜;乳酸抑制腫瘤巨噬細(xì)胞ATP6V0d2表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)HIF-2α介導(dǎo)的腫瘤進(jìn)展[D];華中科技大學(xué);2019年

4 王志超;不同亞型巨噬細(xì)胞在伴鼻息肉的慢性鼻-鼻竇炎中的分布及功能[D];華中科技大學(xué);2019年

5 陶然;Fgl2通過(guò)調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞表型促進(jìn)肝纖維化進(jìn)展[D];華中科技大學(xué);2019年

6 張靜怡;羅非魚(yú)膠原蛋白與生物組織相互作用關(guān)系的研究[D];上海海洋大學(xué);2019年

7 何超;β2GPI/抗β2GPI抗體復(fù)合物在巨噬細(xì)胞脂質(zhì)積累和粘著斑激酶活化中的作用與機(jī)制研究[D];江蘇大學(xué);2019年

8 朱艷吉;IL-17A與巨噬細(xì)胞極化對(duì)實(shí)驗(yàn)性眼新生血管形成的影響及機(jī)制研究[D];上海交通大學(xué);2016年

9 孫芳芳;RIOK3調(diào)控巨噬細(xì)胞功能及腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的相關(guān)機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2019年

10 趙西寶;MEF2C調(diào)控巨噬細(xì)胞M1極化及Th1細(xì)胞反應(yīng)的研究[D];浙江大學(xué);2019年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張鋒;酸敏感離子通道（ASIC1a）在M2型巨噬細(xì)胞極化中的作用研究[D];華中科技大學(xué);2019年

2 陳楊夢(mèng)凡;二氧化鈦納米管載銀納米顆粒通過(guò)調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞自噬和活性氧清除促進(jìn)成骨免疫反應(yīng)的研究[D];華中科技大學(xué);2019年

3 顏雯茜;光控釋放非分泌型TNFα的智能型巨噬細(xì)胞聯(lián)合光熱效應(yīng)用于腫瘤靶向治療的研究[D];華中科技大學(xué);2019年

4 高佳序;黃連素對(duì)β-羥丁酸引起的牛巨噬細(xì)胞的氧化應(yīng)激以及炎癥反應(yīng)的影響[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2019年

5 董文竹;甲硝唑?qū)τ诰奘杉?xì)胞胞內(nèi)結(jié)核分枝桿菌抑菌作用研究[D];內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué);2019年

6 曾慶壇;miR-199a-3p對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化單核—巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化及炎癥反應(yīng)的作用及機(jī)制研究[D];上海交通大學(xué);2016年

7 曹玉鳳;20-Hydroxy-3-oxolupan-28-oic acid抗炎活性及其作用機(jī)制研究[D];江蘇大學(xué);2019年

8 朱玉貞;IL-16通過(guò)促進(jìn)M1型巨噬細(xì)胞的極化加重葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)的小鼠炎癥性腸病[D];青島大學(xué);2019年

9 張燕;色素上皮衍生因子抑制氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2019年

10 宋金楊;miR-181a在ox-LDL刺激的人類THP-1源性巨噬細(xì)胞中對(duì)NLRP3炎癥通路調(diào)節(jié)作用的研究[D];青島大學(xué);2019年

本文編號(hào)：2592767