【摘要】：一、目的意義膠質(zhì)瘤作為一類(lèi)常見(jiàn)的、多發(fā)的、對(duì)人類(lèi)危害極大的惡性腦腫瘤,雖目前在手術(shù)、放療、化療等技術(shù)上已日漸完善,但病員仍具較高的傷殘率和病死率。這主要是由于膠質(zhì)瘤分化不全,呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng),深入神經(jīng)組織深處,導(dǎo)致手術(shù)難以全部將其切除,且膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)放化療有較強(qiáng)的耐受能力所致。目前臨床上使用的常規(guī)放化療手段在殺滅患者體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的同時(shí),也嚴(yán)重?fù)p害了患者心、肝、肺、腎等重要臟器功能,且局部放療和全身化療對(duì)身體局部和整體免疫系統(tǒng)都有嚴(yán)重的破壞,大大影響了患者的生存質(zhì)量。因此,在手術(shù)結(jié)合放化療控制腦腫瘤生長(zhǎng)及復(fù)發(fā)的同時(shí),亟須探尋新的有效治療方案。20世紀(jì)50年代,學(xué)術(shù)界開(kāi)始提出了腫瘤干細(xì)胞(tumor stem cells,TSC)的概念,該學(xué)說(shuō)認(rèn)為,腫瘤之所以能夠呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)、并且能耐受高劑量的放化療而容易復(fù)發(fā),是因?yàn)槟[瘤組織中存在著極少量充當(dāng)干細(xì)胞角色的腫瘤細(xì)胞,這類(lèi)細(xì)胞具有自我更新能力和多向分化潛能,它們?cè)谀[瘤的形成和發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用,因而很可能就是腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的根源,這一少部分細(xì)胞即被稱(chēng)為腫瘤干細(xì)胞。1997年,Bonnet和Dick從白血病患者的腫瘤細(xì)胞中分離出少量具有致瘤性且能分化為其他腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞,因其具有干細(xì)胞特征,從而證實(shí)了TSC的存在。之后,黑色素瘤等多種實(shí)體腫瘤中的干細(xì)胞樣腫瘤細(xì)胞亦在其他多個(gè)領(lǐng)域的相關(guān)研究中得到相繼證明。2004年,Singh等從膠質(zhì)瘤中也分離出具有干細(xì)胞樣特征的細(xì)胞,從而證明了膠質(zhì)瘤中TSC的存在,并將其命名為“膠質(zhì)瘤干細(xì)胞(glioma stem cells,GSC),其為腦腫瘤干細(xì)胞(brain tumor stem cells, BTSC)中的典型代表,位于膠質(zhì)瘤細(xì)胞等級(jí)的最高點(diǎn),是腦腫瘤發(fā)生發(fā)展的根源。因此,尋找靶向殺傷BTSC或GSC的方法途徑、從而消除腦腫瘤并有效防止其復(fù)發(fā),可為臨床防治腦腫瘤提供有意義的借鑒依據(jù)。2015年的最新進(jìn)展表明,腫瘤干細(xì)胞將成為腫瘤治療最新策略的關(guān)注點(diǎn)。在各類(lèi)研究熱點(diǎn)中(包括對(duì)腫瘤干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化、微波治療、靶向其信號(hào)通路及微環(huán)境等),針對(duì)腫瘤干細(xì)胞的免疫治療策略以其“安全性好、能在病員體內(nèi)建立針對(duì)腫瘤干細(xì)胞的免疫監(jiān)視和免疫記憶、達(dá)到對(duì)患者長(zhǎng)期保護(hù)”的優(yōu)勢(shì)而備受關(guān)注。但目前為止,針對(duì)腫瘤干細(xì)胞的免疫治療大多集中在對(duì)皮膚、肝臟、胃腸、肺惡性腫瘤治療方面的研究,針對(duì)GSC靶向免疫治療膠質(zhì)瘤方面的工作尚需完善。一般說(shuō)來(lái),針對(duì)腫瘤的免疫治療方法主要包括以下三種,即被動(dòng)免疫治療、過(guò)繼免疫療法和特異性主動(dòng)免疫治療。其中：(1)被動(dòng)性免疫治療主要即是指以單克隆抗體技術(shù)為基礎(chǔ)的單克隆抗體及單克隆抗體偶聯(lián)物的免疫導(dǎo)向治療,是免疫治療中較為成功的一種手段,自1997年以來(lái)已有多種單抗藥物陸續(xù)獲準(zhǔn)上市；(2)腫瘤的過(guò)繼免疫治療是指將經(jīng)過(guò)處理的自體或異體的免疫細(xì)胞或免疫分子(回)輸給患者,以增強(qiáng)患者免疫功能的方法；(3)腫瘤的特異性主動(dòng)免疫治療又可按其針對(duì)的對(duì)象不同而分為腫瘤細(xì)胞疫苗、腫瘤抗原疫苗、亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)疫苗——exosome,以及以樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cells,DC)為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗治療。眾所周知,DC是人體內(nèi)作用最強(qiáng)的專(zhuān)職抗原提呈細(xì)胞(antigen presenting cell, APC).未成熟DC具有活躍的攝取、處理抗原的能力,而成熟DC則是通過(guò)表達(dá)高水平的組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility complex, MHC)-Ⅰ、Ⅱ類(lèi)抗原和CD80、CD86等共刺激分子,有效地向T細(xì)胞呈遞抗原從而激發(fā)機(jī)體的免疫應(yīng)答反應(yīng)。利用DC的這一重要功能,結(jié)合GSC在腦腫瘤中的根源性地位,提示我們：如若可以靶向殺傷GSC,則腦腫瘤的發(fā)生發(fā)展／復(fù)發(fā)就能夠從根本上得到消除和抑制,而理論上,DC可以從GSC抗原呈遞的角度來(lái)承擔(dān)這種功效。如何以GSC為抗原,最大程度地使DC致敏、以完成對(duì)GSC的最佳靶向殺傷效力,是學(xué)術(shù)界關(guān)注的熱點(diǎn),也是本課題研究的重點(diǎn)問(wèn)題之一。由于膠質(zhì)瘤組織中腫瘤細(xì)胞異質(zhì)性的存在,使得膠質(zhì)瘤特異性抗原的純化分離非常困難,學(xué)術(shù)界至今也尚無(wú)統(tǒng)一界定的GSC特異性抗原,因此,對(duì)宿主抗GSC的T細(xì)胞反應(yīng)的激發(fā)就需要一系列的抗原決定簇,而不僅僅是局限于某一個(gè)或一小部分抗原決定簇。已知腫瘤細(xì)胞全抗原致敏樹(shù)突狀細(xì)胞的方式包括,使DC荷載腫瘤細(xì)胞裂解物、酸洗脫物、蛋白提取物或凋亡的腫瘤細(xì)胞,或是向DC中轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞的全RNA,以及使DC與腫瘤細(xì)胞相融合等。各種方法中,腫瘤細(xì)胞的全RNA抗原致敏DC法具有可從較少的腫瘤(干)細(xì)胞中提取和擴(kuò)增核酸產(chǎn)物的優(yōu)點(diǎn),但RNA性質(zhì)較不穩(wěn)定,容易在轉(zhuǎn)染過(guò)程中降解；而本課題組前期工作已從事的腫瘤(干)細(xì)胞與DC融合疫苗方法提示,雖從理論上講保留了DC呈遞腫瘤抗原的生物學(xué)特性,但實(shí)際卻發(fā)現(xiàn),融合后的細(xì)胞活力略有降低,融合疫苗的吞噬能力亦較融合前略有降低；故提示,在進(jìn)行“以GSC為抗原,最大程度使DC致敏、以完成對(duì)GSC的最佳靶向殺傷效力”的研究中,對(duì)RNA抗原致敏DC法及腫瘤(干)細(xì)胞-DC融合疫苗法的采用與否,應(yīng)持慎重態(tài)度。對(duì)于DC荷載腫瘤細(xì)胞裂解物和凋亡腫瘤疫苗的DC致敏方法,曾有部分研究表明,該兩類(lèi)DC致敏法可以激發(fā)較強(qiáng)的針對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫應(yīng)答,但其在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞-DC疫苗方面的研究和應(yīng)用尚未見(jiàn)報(bào)道,特別是鮮見(jiàn)針對(duì)GSC-DC最佳致敏方法來(lái)從靶向殺傷的角度、與“腦腫瘤細(xì)胞-DC”對(duì)膠質(zhì)瘤殺傷效果的比較研究。因此,本課題首先選取了幾種不同的致敏DC方法(凍融裂解法,凋亡細(xì)胞法,全RNA提取法),以比較負(fù)載各種不同形式獲取的GSC抗原后,DC成熟程度和功能(包括DC增殖、表面共刺激分子表達(dá)和免疫活性細(xì)胞因子分泌功能)的相應(yīng)狀態(tài)；之后,再篩選出最佳的DC致敏方式,用于后續(xù)靶向殺傷膠質(zhì)瘤細(xì)胞,尤其是殺傷GSC的免疫治療實(shí)驗(yàn)研究,期待能為免疫靶向殺傷GSC、提高膠質(zhì)瘤治療效果提供可借鑒實(shí)驗(yàn)依據(jù)。二、研究?jī)?nèi)容第一部分GSC的分離純化及各種GC全抗原獲取目的：有效獲得分離純化的GSC及提取各種GC全抗原,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究奠基。方法：1、GSC的分離純化：參考美國(guó)模式培養(yǎng)物集存庫(kù)(American type culture collection,ATCC)的培養(yǎng)方法培養(yǎng)小鼠GL261膠質(zhì)瘤細(xì)胞,接種于含10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基中,25cm2塑料培養(yǎng)瓶中,置于37℃,5%CO2、飽和濕度恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每1-2天傳代一次。參照singh等人的無(wú)血清懸浮培養(yǎng)法培養(yǎng)小鼠GL261膠質(zhì)瘤干細(xì)胞,于不含血清的DMEM/F12培養(yǎng)基中加入DMEM/F12、bFGF20ng/ml、EGF20ng/ml及1：50B27添加劑。將細(xì)胞接種于25cm2培養(yǎng)瓶中,置37℃,5%C02飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每3～4天加入含上述細(xì)胞因子的新鮮培養(yǎng)基,7～9天傳代一次。傳6代左右時(shí)以流式細(xì)胞術(shù)分選出CD133(腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志分子)表達(dá)陽(yáng)性的細(xì)胞,并繼續(xù)無(wú)血清培養(yǎng)擴(kuò)增細(xì)胞。GL261膠質(zhì)瘤細(xì)胞及GL261腫瘤球細(xì)胞經(jīng)免疫熒光細(xì)胞化學(xué)和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)表面GFAP、CD133的表達(dá),并進(jìn)行GL261腫瘤干細(xì)胞球的分化試驗(yàn),鑒定為膠質(zhì)瘤細(xì)胞(GC)和膠質(zhì)瘤干細(xì)胞(GSC)。2、GC全抗原的獲�。悍謩e以凍融裂解法、凋亡細(xì)胞法和全RNA提取法提取GC的全抗原,備以后續(xù)提呈給未成熟DC用。(1)凍融裂解法：收集在含血清培養(yǎng)基中呈貼壁生長(zhǎng)的GL261細(xì)胞,1000轉(zhuǎn)/分,離心5min,棄上清即去除原培養(yǎng)基,用不含酚紅的RPMI1640培養(yǎng)基重懸、調(diào)整細(xì)胞密度至2×107/ml,40℃水浴30min,后置于-80℃冰箱中30min,再次37℃水浴30min以融解,如此反復(fù),經(jīng)過(guò)5個(gè)凍融周期后,2500rmp離心20min,取上清液,經(jīng)0.22um針筒式濾器過(guò)濾,得到全細(xì)胞抗原懸液,以BCA法測(cè)得其蛋白濃度后將凍融抗原懸液置于-80℃保存?zhèn)溆谩?2)凋亡細(xì)胞法：收集在含血清培養(yǎng)基中呈貼壁生長(zhǎng)的GL261細(xì)胞,1000轉(zhuǎn)/分,離心5min,棄上清即去除原培養(yǎng)基,加入用RPMI1640完全培養(yǎng)基(含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基)稀釋為2mg/ml的替莫唑胺溶液,置于37℃,5%CO2、飽和濕度恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16h后,使用凱基生物的Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒對(duì)細(xì)胞行Annexin-FITCPI雙染法染色,行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)FITC和PI的熒光信號(hào),并用流式細(xì)胞術(shù)分選FITC高表達(dá)的細(xì)胞,測(cè)得分選后的凋亡細(xì)胞純度并置于RPMI1640完全培養(yǎng)基中4℃保存?zhèn)溆谩?3)全RNA提取法：取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期中的在含血清培養(yǎng)基中呈貼壁生長(zhǎng)的GL261細(xì)胞,用RNA抽提試劑盒提取總RNA,并收集RNA溶液,經(jīng)紫外分光光度計(jì)檢測(cè)OD260/OD280,算得總RNA含量和純度,于-80℃凍存?zhèn)溆谩＝Y(jié)果：實(shí)驗(yàn)中所用腫瘤細(xì)胞經(jīng)anti-GFAP免疫熒光鑒定為小鼠GL261膠質(zhì)瘤細(xì)胞系。通過(guò)無(wú)血清培養(yǎng)法結(jié)合流式細(xì)胞分選術(shù),從小鼠的GL261膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中得到了較高純度(CD133表達(dá)率80.5±5.2%)的GSC。通過(guò)對(duì)GC進(jìn)行凍融裂解、誘導(dǎo)凋亡、提取全RNA等處理,得到了純度、性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定的凍融裂解抗原(蛋白濃度1.9～2.1 mg/ml)、凋亡細(xì)胞抗原(純度93.1±2.5%)和全RNA抗原(OD260/280:1.97～2.0)。結(jié)論：實(shí)驗(yàn)中所用腫瘤細(xì)胞經(jīng)鑒定為小鼠GL261膠質(zhì)瘤細(xì)胞系。通過(guò)無(wú)血清培養(yǎng)法結(jié)合流式分選,可從小鼠的GL261膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中得到較高純度的GSC。通過(guò)對(duì)GC進(jìn)行凍融裂解、誘導(dǎo)凋亡、提取全RNA等處理,可得到純度、性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定的凍融裂解抗原、凋亡細(xì)胞抗原和全RNA抗原。第二部分 DC的誘導(dǎo)、培養(yǎng)、鑒定及最佳DC瘤苗的選擇及制備目的：有效獲得DC及“GC和/GSC抗原+DC”瘤苗,并選出最優(yōu)致敏DC方式,用于后續(xù)免疫靶向GSC或GC治療實(shí)驗(yàn)研究。方法：1、DC的誘導(dǎo)培養(yǎng)及鑒定：1%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉C57小鼠后,將小鼠俯臥位固定于手術(shù)臺(tái)。消毒后剪開(kāi)皮膚,顯露、分離并剔除小鼠雙下肢肌肉組織,于髖關(guān)節(jié)和踝關(guān)節(jié)處剪斷小鼠的股骨和脛腓骨并將其取出,保持無(wú)菌狀態(tài)。用5mL滅菌注射器抽取5mL不含血清的RPMI-1640培養(yǎng)基。將針頭分別從兩端插入骨髓腔,反復(fù)沖洗,得到小鼠骨髓組織。收集沖洗液離心后先后加入紅細(xì)胞裂解液對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行充分裂解,繼而用含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基重懸于25cm2培養(yǎng)瓶,添加40ng/ml GM-CSF和40ng/mL IL-4,置于37℃C,5%CO2的飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。第3天換全液,去除懸浮細(xì)胞,繼續(xù)培養(yǎng)至第5天時(shí)收集未成熟DC,經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ表達(dá)率,鑒定為未成熟DC。2、GC/GSC抗原+DC瘤苗的制備：給上述得到的小鼠骨髓源性未成熟DC分別負(fù)載以GC的凍融裂解抗原、凋亡抗原和全RNA抗原(分別對(duì)應(yīng)第一部分中的三種GC全抗原提取方式),制成GC凍融裂解抗原+DC瘤苗、GC凋亡抗原+DC瘤苗和GC全RNA抗原+DC瘤苗。同時(shí)設(shè)立經(jīng)脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)刺激DC得到的LPS+DC疫苗為陽(yáng)性對(duì)照組和未經(jīng)刺激的DC為陰性對(duì)照組,CCK-8法測(cè)各組DC增殖情況,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組DC表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ表達(dá)率,ELISA測(cè)各組DC的免疫活性細(xì)胞因子TNF-α、IFN-β、IL-6、IL-10分泌量,以從中選出最佳致敏DC的方式,并以此最佳致敏方式制備GSC+DC瘤苗。結(jié)果：通過(guò)從同源的C57小鼠體內(nèi)原代取材,得到了小鼠的骨髓細(xì)胞,以GM-CSF+IL-4誘導(dǎo)成為未成熟的樹(shù)突狀細(xì)胞。用所得的未成熟DC負(fù)載第一步中得到的三種GSC/GC全抗原及LPS,即可得到三種不同致敏方式的瘤苗和LPS+DC瘤苗(陽(yáng)性對(duì)照)。陰性對(duì)照組DC不負(fù)載抗原,稱(chēng)為“對(duì)照組”負(fù)載各種抗原后,LPS組和凋亡組DC增殖顯著高于凍融組及RNA組；凍融組、凋亡組和LPS組CD80、CD86、MHC-Ⅱ表達(dá)率均顯著高于RNA組(P0.05),而凍融組、凋亡組和LPS組三組間無(wú)明顯差異(P0.05)；凋亡組TNF-α分泌量顯著高于凍融組、RNA組和對(duì)照組(P0.05)；凍融組和凋亡組IL-6分泌量顯著高于對(duì)照組和RNA組(P0.05)；各組IFN-γ分泌量無(wú)顯著差異(P0.05)；凋亡組IL-10分泌量顯著低于凍融組、RNA組和LPS組(P0.05)。結(jié)論：最優(yōu)致敏DC方式為凋亡細(xì)胞法。該方式優(yōu)勢(shì)：抗原細(xì)胞量最小(即效率最高),使負(fù)載抗原后的DC高表達(dá)CD80、CD86和MHC-II,并使其所分泌的細(xì)胞因子量變化(免疫活性性因子TNF-α和IL-6升高,免疫抑制性因子IL-10降低)最明顯。第三部分：同源T淋巴細(xì)胞的制備及體外T細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)?zāi)康模罕容^最佳致敏方式下的"GC+DC"瘤苗與"GSC+DC"瘤苗,于靶向殺傷膠質(zhì)瘤細(xì)胞、膠質(zhì)瘤干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的療效。方法：1、各種GC全抗原的獲取同第一部分。2、DC誘導(dǎo)、培養(yǎng)、鑒定及最優(yōu)致敏方式前提下的GSC+DC瘤苗和GC+DC瘤苗的制備同第二部分。3、同源T淋巴細(xì)胞的制備：采用小鼠的外周血淋巴細(xì)胞分離液、分離培養(yǎng)C57小鼠的淋巴細(xì)胞,用添加IL-2的含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基維持培養(yǎng)；經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)其表面CD3分子的表達(dá)率后行磁珠分選,并于分選后再次檢測(cè)其表面CD3分子的表達(dá)率,鑒定所得T淋巴細(xì)胞的純度。4、體外T細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)：(1)以第一部分中培養(yǎng)的普通膠質(zhì)瘤細(xì)胞株(GC)為靶細(xì)胞進(jìn)行體外T淋巴細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn),分為單純DC組、GC凋亡抗原+DC瘤苗組、GSC凋亡抗原+DC瘤苗組共3個(gè)組,效靶比(即經(jīng)各組瘤苗刺激后的T細(xì)胞數(shù)與GC細(xì)胞數(shù)之比)20：1,行T淋巴細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn),并計(jì)算T淋巴細(xì)胞對(duì)普通膠質(zhì)瘤細(xì)胞(GC)的殺傷率。(2)再以第一部分中分離提純的GSC為靶細(xì)胞進(jìn)行體外T淋巴細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn),同樣分為單純DC組、GC凋亡抗原+DC瘤苗組、GSC凋亡抗原+DC瘤苗組共3個(gè)組,分別與上述分離培養(yǎng)所得的同源T細(xì)胞混合培養(yǎng),刺激激活T淋巴細(xì)胞,相應(yīng)刺激后的3組T淋巴細(xì)胞再與分離提純的同源膠質(zhì)瘤干細(xì)胞(GSC)共培養(yǎng),效靶比(即經(jīng)各組瘤苗刺激后的T細(xì)胞數(shù)與GSC細(xì)胞數(shù)之比)20：1,行T淋巴細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn),并計(jì)算T淋巴細(xì)胞對(duì)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞(GSC)的殺傷率。用LDH法測(cè)定T淋巴細(xì)胞對(duì)GC或GSC的殺傷情況,計(jì)算結(jié)果,進(jìn)行組間比較。在以GC作為T(mén)細(xì)胞殺傷的靶細(xì)胞時(shí),方差分析顯示差異有顯著性意義(P0.05)。5、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：全部數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”(x±SD)表示,常規(guī)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)、正態(tài)性檢驗(yàn)。單變量?jī)山M資料之間的比較采用t檢驗(yàn),多組資料之間的比較采用單因素方差分析,以P0.05為差異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：從同源C57小鼠取材得到的小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞懸液,經(jīng)磁珠分選、可獲得高純度的小鼠T淋巴細(xì)胞(CD3表達(dá)率90.3±1.7%)。各組激活的T淋巴細(xì)胞對(duì)GC的殺傷率確有不同；通過(guò)多重比較(SNK法)可知,經(jīng)GC凋亡抗原+DC瘤苗組、GSC凋亡抗原+DC瘤苗組和LPS+DC瘤苗組刺激后T細(xì)胞對(duì)同源膠質(zhì)瘤細(xì)胞的殺傷率顯著高于單純DC組(P0.01)；而GC凋亡抗原+DC瘤苗組、GSC凋亡抗原+DC瘤苗組之間差異沒(méi)有顯著性意義(P=0.736)。而在以GSC作為T(mén)細(xì)胞殺傷的靶細(xì)胞時(shí),方差分析顯示各組間差異有顯著性意義(P0.05),提示各組激活的T淋巴細(xì)胞對(duì)GSC的殺傷率確有不同；通過(guò)多重比較(SNK法)可得,經(jīng)GC凋亡抗原+DC瘤苗組、GSC凋亡抗原+DC瘤苗組和LPS+DC瘤苗組刺激后T細(xì)胞對(duì)同源膠質(zhì)瘤細(xì)胞的殺傷率顯著高于單純DC組(P0.01),且GSC凋亡抗原+DC瘤苗組刺激后T細(xì)胞對(duì)同源膠質(zhì)瘤細(xì)胞的殺傷率顯著亦高于GC凋亡抗原+DC瘤苗組(P0.01)。結(jié)論：以凋亡細(xì)胞致敏法制備的GC+DC瘤苗和GSC+DC瘤苗,二者在體外T淋巴細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)中,當(dāng)以同源膠質(zhì)瘤細(xì)胞系(GC)為靶時(shí),殺傷效果未見(jiàn)顯著差異；但當(dāng)以純化的GSC為靶時(shí),GSC+DC瘤苗殺傷效果顯著優(yōu)于GC+DC瘤苗。提示GSC+DC瘤苗對(duì)GSC有針對(duì)性殺傷作用。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R739.41

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2583120