【摘要】：背景與目的： 引發(fā)缺血性腦血管疾病的病因很多，其中22%是由頸動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄所致，而大腦海馬是頸動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致缺血性損傷的易發(fā)部位。頸動(dòng)脈內(nèi)膜剝脫術(shù)是臨床醫(yī)治頸動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄的經(jīng)典方法之一，但該手術(shù)常引起包括海馬組織在內(nèi)的腦缺血-再灌注損傷，出現(xiàn)腦過(guò)度灌注綜合征。有資料表明oxLDL在缺血性腦血管疾病的發(fā)病過(guò)程中起重要作用，刺激細(xì)胞分泌炎性因子，誘生過(guò)氧化物，造成組織細(xì)胞損傷。而丙丁酚具有調(diào)節(jié)血脂，抗氧化及抗炎等作用。本研究復(fù)制HT22海馬神經(jīng)元缺氧-復(fù)氧損傷模型以觀察oxLDL和丙丁酚對(duì)海馬神經(jīng)元缺氧-復(fù)氧損傷過(guò)程的影響，探討海馬缺血-再灌注損傷的可能機(jī)理以及抗氧化治療的應(yīng)用前景。 方法與結(jié)果： 1.根據(jù)文獻(xiàn)自制密閉缺氧裝置，待HT22海馬神經(jīng)元融合度達(dá)80%后，放入缺氧裝置內(nèi)，通入95%N2+5%CO2混合氣體造成缺氧6h，之后復(fù)氧18h，以復(fù)制HT22海馬神經(jīng)元缺氧-復(fù)氧損傷模型。經(jīng)相關(guān)方法檢測(cè)，對(duì)照組神經(jīng)元胞體折光性強(qiáng)，軸突樹突間連接緊密有序；缺氧24h組胞體折光性，較缺氧6h組明顯減弱，軸突樹突間聯(lián)系稀疏；凋亡形態(tài)的神經(jīng)元較多；MTT活力減弱1.2倍，而LDH活性則升高1.2倍。而缺氧-復(fù)氧組與對(duì)照組相比胞體折光性消失，軸突樹突明顯中斷；強(qiáng)熒光顆粒的凋亡神經(jīng)元明顯增多；MTT活力減弱2倍，LDH活性則升高3.5倍；TLR2蛋白表達(dá)升高1.8倍；較缺氧24h組凋亡神經(jīng)元也明顯增多；MTT活力降低1.3倍，LDH活性則升高1.2倍；TLR2蛋白表達(dá)升高1.1倍。 2.將培養(yǎng)的HT22海馬神經(jīng)元分為3組，對(duì)照組：正常培養(yǎng)24h+適量PBS；模型組：缺氧培養(yǎng)6h+正常培養(yǎng)18h+25l PBS；oxLDL組：缺氧培養(yǎng)6h+正常培養(yǎng)18h+50mg/L oxLDL。處理完成后，經(jīng)相關(guān)方法檢測(cè)，HT22海馬神經(jīng)元缺氧-復(fù)氧損傷過(guò)程中，oxLDL組ROS生成和神經(jīng)元胞漿內(nèi)紅色的脂滴明顯多于模型組；SOD活力較模型組降低1.3倍，HO-1蛋白表達(dá)量減少1.5倍，而MDA含量則升高1.1倍；神經(jīng)元內(nèi)膽固醇酯含量也升高1.5倍。 3.將培養(yǎng)的HT22海馬神經(jīng)元分為4組，其中模型組加入25l PBS；丙丁酚組加入80μmol/L丙丁酚；oxLDL組加入50mg/L oxLDL；丙丁酚+oxLDL組加入80μmol/L丙丁酚和50mg/L oxLDL，缺氧培養(yǎng)6h之后復(fù)氧18h以誘發(fā)缺氧-復(fù)氧損傷，之后分別檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)。經(jīng)相關(guān)方法檢測(cè)，丙丁酚+oxLDL組神經(jīng)元胞體折光性增強(qiáng)，軸突斷裂較少，較oxLDL組明顯好轉(zhuǎn)，凋亡形態(tài)的神經(jīng)元也明顯減少；MTT活力，較oxLDL組提升1.3倍，LDH活性減弱1.4倍；HO-1蛋白表達(dá)量，較oxLDL組顯著增多，而TLR2蛋白表達(dá)量顯著減少；總SOD活力較oxLDL組提升1.5倍，而MDA含量降低1.1倍；神經(jīng)元內(nèi)膽固醇酯含量減少1.2倍；而且神經(jīng)元核內(nèi)疊加后的NF-κB熒光明顯減弱；胞漿內(nèi)紅色的脂滴亦明顯減少。 結(jié)論： 1、HT22海馬神經(jīng)元缺氧-復(fù)氧損傷主要表現(xiàn)：神經(jīng)元折光性消失，軸突-樹突連接中斷；出現(xiàn)大量凋亡形態(tài)的神經(jīng)元；神經(jīng)元活力及功能顯著減弱；TLR2蛋白表達(dá)顯著升高。 2、HT22海馬神經(jīng)元缺氧-復(fù)氧損傷過(guò)程中，oxLDL引起神經(jīng)元ROS生成明顯增多；MDA含量增高，SOD活力降低；HO-1蛋白表達(dá)水平降低；神經(jīng)元內(nèi)脂質(zhì)蓄積，加重了海馬神經(jīng)元缺氧-復(fù)氧損傷。 3、丙丁酚對(duì)HT22海馬神經(jīng)元缺氧-復(fù)氧損傷及oxLDL引起損傷加重具有抑制作用。丙丁酚的保護(hù)作用可能與其提高SOD活力和HO-1蛋白表達(dá)水平，降低MDA含量和ROS的生成，減少TLR2蛋白表達(dá)水平和抑制NF-κB的核轉(zhuǎn)位，降低神經(jīng)元內(nèi)脂質(zhì)水平有關(guān)。
【圖文】：

二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1．HT22 海馬神經(jīng)元的缺氧-復(fù)氧損傷形態(tài)改變用倒置顯微鏡觀察其形態(tài)學(xué)變化，結(jié)果顯示：對(duì)照組神經(jīng)元胞體立體飽滿，軸突、樹突間連接緊密有序，折光性強(qiáng)；缺氧 6 h 組與對(duì)照組相比，神經(jīng)元胞體立體感減弱，折光性降低，但軸突樹突間尚有連接。缺氧 24 h 組又較缺氧 6 h組神經(jīng)元折光性明顯減弱，軸突樹突間聯(lián)系稀疏。而缺氧-復(fù)氧組與缺氧 24 h 組相比，神經(jīng)元立體感及折光性消失，可看到明顯的軸突-樹突中斷。（圖 1）

21圖 2 HT22 海馬神經(jīng)元缺氧-復(fù)氧損傷的凋亡（×100）a：對(duì)照組，b：缺氧 6 h 組，c：缺氧 24 h 組，d：缺氧-復(fù)氧組HT22 海馬神經(jīng)元的缺氧-復(fù)氧損傷活力和代謝功能改變分別采用 MTT 及 LDH 檢測(cè)試劑盒比色法檢測(cè)四種培養(yǎng)方式對(duì)神經(jīng)元活力及代謝功能的改變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：缺氧 24 h 組 MTT 活力 0.44 ± 0.02，顯著于缺氧 6 h 組 0.54 ± 0.02（P<0.05），而 LDH 活性 680.60 ± 23.96 U/L，，顯著高缺氧 6 h 組 564.00 ± 22.88 U/L（P<0.05）；缺氧-復(fù)氧組 MTT 活力 0.33 ± 0.01，對(duì)照組 0.68 ± 0.04 顯著減低（P<0.01）；較缺氧 24 h 組亦顯著減低（P<0.05）， LDH 活性 803.00 ± 19.57 U/L，較對(duì)照組 231.00 ± 41.05 U/L 顯著升高
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R743

【參考文獻(xiàn)】

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1 姚志彬;海馬——研究神經(jīng)科學(xué)的理想模型[J];廣東解剖學(xué)通報(bào);1989年01期

2 張運(yùn)克,佟帥;補(bǔ)陽(yáng)還五湯抗腦缺血及再灌注損傷作用機(jī)理研究進(jìn)展[J];河南中醫(yī);2002年04期

3 葉延平;莫中成;龍治峰;尹小波;李霞;張青海;李媛彬;易光輝;;丙丁酚對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化小鼠抗氧化作用的比較[J];中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志;2008年07期

4 張勤奕;張茁;展紅霞;;頸動(dòng)脈粥樣硬化與頸動(dòng)脈內(nèi)膜剝脫術(shù)[J];中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志;2010年09期

5 毛倫林;管陽(yáng)太;毛曉薇;張秀天;顧楨茂;;急性高血糖對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的影響[J];中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志;2012年08期

6 曹莉,王擁軍,尹鴻操;氧化型低密度脂蛋白致PC12細(xì)胞的毒性作用及抗氧化劑的細(xì)胞保護(hù)作用[J];中華老年心腦血管病雜志;2004年04期

7 方向華;中國(guó)卒中的流行現(xiàn)狀及其影響因素[J];中國(guó)腦血管病雜志;2004年05期

8 文媛;曾高峰;;丙丁酚的作用及臨床應(yīng)用[J];社區(qū)醫(yī)學(xué)雜志;2008年20期

9 管維平,蒲傳強(qiáng),匡培根,目時(shí)弘文;急性腦梗死患者低密度脂蛋白的氧化敏感性[J];中國(guó)臨床康復(fù);2005年13期

10 王衛(wèi)東,陳正堂,段玉忠,趙志強(qiáng),錢桂生;一種用于定量研究細(xì)胞缺氧的簡(jiǎn)易模型[J];中國(guó)病理生理雜志;2003年08期

本文編號(hào)：2558757