【摘要】：本論文通過層層靜電自組裝及偶合交聯(lián)技術(shù)將神經(jīng)生長因子(nerve growthfactor, NGF)復合到載體材料上，制備一種應用于神經(jīng)損傷修復的緩釋NGF神經(jīng)導管。論文采用聚乳酸(PDLLA)作為基質(zhì)，添加β-磷酸三鈣(β-TCP)制備多孔隙梯度芯材，在芯材表面引入正電荷；利用層層靜電自組裝技術(shù)，通過透明質(zhì)酸(HA)和殼聚糖(CHS)的陰陽離子靜電吸附作用構(gòu)建自組裝多層膜，并將藥物NGF通過EDC交聯(lián)偶合到自組裝層上；得到多孔隙的聚乳酸/β-磷酸三鈣/透明質(zhì)酸/殼聚糖/神經(jīng)生長因子(PDLLA/β-TCP/HA/CHS/NGF)梯度神經(jīng)導管，并對其進行表征及性能評價。 通過探討自組裝層數(shù)、時間、溫度、pH值和組裝溶液濃度比等因素對PDLLA/β-TCP/HA/CHS/NGF緩釋神經(jīng)導管制備的影響以確定最佳制備工藝。結(jié)果表明：最佳制備條件為每層組裝30min，溫度為30℃，組裝溶液的pH值為3.8，HA/CHS的濃度比為3:1。 利用傅立葉變換紅外光譜儀(ATR-FTIR)、X射線衍射(XRD)、掃描電子顯微鏡(SEM)、微機控制電子萬能試驗機、接觸角測定儀對材料的結(jié)構(gòu)、機械性能及親水性能進行表征和測試。結(jié)果表明：這種多孔隙NGF緩釋梯度神經(jīng)導管的設(shè)計滿足組織工程材料的要求，有望更好地促進周圍神經(jīng)修復與再生。 對各組神經(jīng)導管進行體外降解實驗，測定降解過程中降解介質(zhì)pH值的變化，失重率的變化，并觀察降解后導管材料的掃描電鏡顯微結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明：β-磷酸三鈣的加入能夠起到調(diào)節(jié)降解介質(zhì)pH值，，使得介質(zhì)的pH值維持在中性；并且加速神經(jīng)導管的降解，在第12周時，其失重率約為48.3%；且從掃描電鏡圖可以看出β-磷酸三鈣隨著降解時間的增加會逐漸浮現(xiàn)出來，最終造成整個神經(jīng)導管的崩解。 采用酶聯(lián)免疫吸附法測定NGF的含量并對神經(jīng)生長因子的釋放性能進行考察。結(jié)果表明：隨著自組裝層和芯材的逐步降解，NGF被緩慢釋放出來，其釋放周期約為30天，累計釋放率可以達到90%，具有較好的緩釋作用；NGF浸提液對PC12細胞的軸突生長與伸長有一定的促進作用，說明神經(jīng)導管中交聯(lián)的NGF保留活性。 將骨髓間充質(zhì)干細胞(BMMSC)、腎上腺嗜鉻細胞瘤(PC12)和雪旺細胞(RSC96)分別與PDLLA、PDLLA/β-TCP、PDLLA/HA/CHS及PDLLA/β-TCP/HA/CHS/NGF神經(jīng)導管共培養(yǎng)，通過CCK-8(Cell Counting Kit-8)法考察不同組成成分的神經(jīng)導管的生物相容性，細胞免疫熒光染色來觀察材料表面粘附細胞數(shù)目來計算其粘附率，并通過掃描電鏡圖來觀察細胞在材料表面生長的狀態(tài)，結(jié)果表明：PDLLA/β-TCP/HA/CHS/NGF的毒性低、細胞粘附性較好；PC12軸突伸長率表明神經(jīng)導管中釋放的NGF能促使神經(jīng)細胞軸突的伸長，軸突伸長率達到54%，從而證明了神經(jīng)導管的細胞相容性較好。
【學位授予單位】：武漢理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R745

【參考文獻】

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本文編號：2556384