【摘要】：目的:構(gòu)建Pygo2 RNAi慢病毒載體干擾Pygo2表達(dá),研究其對人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U251增殖與凋亡的影響及機制,初步探索Pygo2 si RNA對U251起源的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞瘤球大小與數(shù)目的影響。方法:構(gòu)建Pygo2基因sh RNA的慢病毒表達(dá)載體,感染人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U251,熒光顯微鏡檢測轉(zhuǎn)染效率。采用RT-PCR檢測Pygo2、CD133、Nestin、Sox2、C-myc基因m RNA表達(dá),Western blot檢測Pygo2、H3K4me2、H3K4me3蛋白表達(dá),MTS、流式細(xì)胞儀分別檢測U251增殖和凋亡,懸浮培養(yǎng)法培養(yǎng)及檢測瘤球的大小與數(shù)目。結(jié)果:熒光顯微鏡顯示慢病毒轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞,其效率高達(dá)80%以上,RT-PCR、Western blot結(jié)果提示Pygo2基因及蛋白表達(dá)均下降,H3K4me3蛋白的表達(dá)隨著Pygo2的下調(diào)而降低。同陰性對照組相比,Pygo2 si RNA干擾組細(xì)胞增殖速率減慢,凋亡比率增加。RT-PCR結(jié)果顯示腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物如CD133、Nestin、Sox2,Wnt信號通路下游靶基因C-myc的表達(dá)在干擾組中比陰性對照組低。懸浮培養(yǎng)法培養(yǎng)膠質(zhì)瘤腫瘤干細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)其Pygo2的m RNA表達(dá)水平高于貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)的細(xì)胞。在Pygo2 si RNA干擾組中,形成的瘤球大小和數(shù)目較對照組明顯減小、減少。結(jié)論:1、以慢病毒為載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染細(xì)胞,其轉(zhuǎn)染效率與干擾效率均較高。2、Pygo2 si RNA通過降低H3K4三甲基化從而抑制U251細(xì)胞增殖、促進(jìn)U251細(xì)胞凋亡。3、Pygo2可影響U251起源的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的增殖,其機制有待進(jìn)一步探究。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.4

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