發(fā)布時(shí)間：2019-09-26 23:38

【摘要】：重癥肌無(wú)力(myasthenia gravis, MG)是累及神經(jīng)肌肉接頭處的某些成分而導(dǎo)致突觸后膜信號(hào)傳導(dǎo)障礙的一種自身免疫病,以反復(fù)出現(xiàn)的肌肉收縮無(wú)力,用力時(shí)惡化,休息后緩解為特征。在80%～85%的MG患者中,其主要的靶抗原是肌肉的乙酰膽堿受體(muscle acetylcholine receptor, AChR)。單鏈抗體(single-chain fragment variable, scFv)是由免疫球蛋白的重鏈可變區(qū)(variable region of heavy chain, VH)和輕鏈可變區(qū)(variable region of light chain, VL)經(jīng)一條柔軟可彎曲的肽鏈連接而成。scFv完整的保留了抗原結(jié)合的能力,由于它沒有抗體的Fc段,因此不能激活補(bǔ)體。然而,scFv小分子的生理特點(diǎn)決定了它可以從體內(nèi)經(jīng)腎臟快速清除。scFv637是MG抗原特異性scFv,由人AChR a亞單位上67～76位氨基酸(即主要免疫原區(qū),main immunogenic region, MIR)組成。它可以結(jié)合MG患者血清中的抗MIR的自身抗體,從而保護(hù)人AChR,這使它有可能成為一種MG特異性免疫抑制治療劑。與scFv一樣,scFv637具有快速?gòu)难褐星宄娜秉c(diǎn)。因此,在本項(xiàng)研究中,我們將scFv637基因與半壽期較長(zhǎng)的人血漿白蛋白(human serum albumin, HSA)基因連接,以延長(zhǎng)scFv637的半壽期,增加其在血中的穩(wěn)定性。這使得scFv有可能成為MG的一種特異性免疫抑制劑。 目的：制備單鏈抗體融合人血清白蛋白,以延長(zhǎng)單鏈抗體的半壽期并增加其在血中的穩(wěn)定性,為重癥肌無(wú)力的免疫治療奠定基礎(chǔ)。 方法：將scFv637與HSA基因連接后轉(zhuǎn)入畢赤酵母菌(Pichia pastoris)中表達(dá)出融合蛋白scFv637-HSA。經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳和蛋白質(zhì)印跡試驗(yàn)確定其分子量；通過(guò)免疫熒光試驗(yàn)檢測(cè)融合蛋白scFv637-HSA與人肋間肌AChR的結(jié)合情況；經(jīng)競(jìng)爭(zhēng)性ELISA檢測(cè)融合蛋白抑制MG患者血清中的自身抗體與AChR的結(jié)合能力,以及融合蛋白在健康血清中的穩(wěn)定性。 結(jié)果：融合蛋白在畢赤酵母菌中成功表達(dá),其分子量約為89kD；免疫熒光試驗(yàn)結(jié)果顯示,融合蛋白可以與人肋間肌神經(jīng)肌肉接頭處的AChR結(jié)合；經(jīng)12例MG患者血清檢測(cè)發(fā)現(xiàn),融合蛋白對(duì)AChR的抑制率為2%～77.4%；融合蛋白在靜態(tài)健康血清中可以維持大約3天。 結(jié)論：成功制備出scFv-HSA融合蛋白,并且其保留了保護(hù)AChR的能力。這使得scFv-HSA融合蛋白有望成為一種特異性免疫抑制治療MG的手段。
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R746.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李保華,徐沙貝,徐金枝,張?zhí)K明;血清陰性重癥肌無(wú)力發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)分冊(cè);2000年01期

2 黃建平;重癥肌無(wú)力誤診32例分析[J];河南實(shí)用神經(jīng)疾病雜志;2000年04期

3 郭丹,范宇,于明堅(jiān);血漿置換療法治療重癥肌無(wú)力1例報(bào)告[J];錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年01期

4 王煒,南振鴻,凌振芬,管紅兵,呂傳真;干擾素-γ對(duì)重癥肌無(wú)力患者自身抗體的調(diào)節(jié)作用及相關(guān)性分析[J];中國(guó)神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志;2000年04期

5 陳向軍,呂傳真;干擾素-α及其在重癥肌無(wú)力治療中的應(yīng)用(綜述)[J];中國(guó)神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志;2000年04期

6 何國(guó)勝,徐金枝,唐冰杉,楊明山;攣生子重癥肌無(wú)力[J];卒中與神經(jīng)疾病;2000年04期

7 王鐵栓,張清勇,張斌,劉全喜,曾漣乾;重癥肌無(wú)力的外科治療(附56例報(bào)道)[J];河南外科學(xué)雜志;2000年02期

8 王磊,陳景寒;重癥肌無(wú)力的診斷與外科治療[J];山東醫(yī)藥;2001年02期

9 舒志榮;重癥肌無(wú)力[J];山東醫(yī)藥;2001年11期

10 殷憲岑;中西醫(yī)結(jié)合治療重癥肌無(wú)力28例[J];山東中醫(yī)雜志;2001年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 楊明山;;重癥肌無(wú)力的治療進(jìn)展[A];第三屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合神經(jīng)系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2000年

2 王桂平;李柱一;劉睿;王者晉;;實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力被動(dòng)免疫模型的建立與評(píng)測(cè)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

3 李海峰;;重癥肌無(wú)力患者維生素D受體多態(tài)性的初步研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

4 閆彬彬;楊碩;徐欣;王曙辰;王丹丹;金連弘;李呼倫;;早期重癥肌無(wú)力發(fā)病機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究[A];中國(guó)神經(jīng)科學(xué)學(xué)會(huì)第六屆學(xué)術(shù)會(huì)議暨學(xué)會(huì)成立十周年慶祝大會(huì)論文摘要匯編[C];2005年

5 尹厚民;馮蔚;;重癥肌無(wú)力的針電極肌電圖研究[A];2006年浙江省神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

6 劉衛(wèi)彬;門麗娜;何雪桃;夏強(qiáng);黃如訓(xùn);;我國(guó)南方1520例重癥肌無(wú)力患者的臨床特點(diǎn)[A];第九次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2006年

7 劉衛(wèi)彬;門麗娜;何雪桃;夏強(qiáng);黃如訓(xùn);;重癥肌無(wú)力患者免疫指標(biāo)檢測(cè)及其臨床評(píng)價(jià)[A];第九次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2006年

8 侯麗珍;徐文;韓德民;張麗;景筠;;重癥肌無(wú)力的咽喉部臨床表現(xiàn)特點(diǎn)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（上）[C];2007年

9 王炳旭;叢志強(qiáng);;重癥肌無(wú)力患者血清可溶性白細(xì)胞介素-2受體的研究[A];職工醫(yī)院醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐[C];1998年

10 張茂文;張西蒙;張?zhí)旌?;對(duì)重癥肌無(wú)力的認(rèn)識(shí)和治療[A];2011中國(guó)針灸學(xué)會(huì)年會(huì)論文集（摘要）[C];2011年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 浙江省中醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科副主任中醫(yī)師 張麗萍;從虛論治重癥肌無(wú)力[N];健康報(bào);2013年

2 張哲浩;我國(guó)獨(dú)創(chuàng)“三孔”式手術(shù)成功救治重癥肌無(wú)力患者[N];光明日?qǐng)?bào);2014年

3 何錢 貴州省江口縣人民醫(yī)院;一味洋蟲治愈重癥肌無(wú)力[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2014年

4 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科博士 李海峰;重癥肌無(wú)力治療時(shí)請(qǐng)注意[N];健康報(bào);2001年

5 楊平;重癥肌無(wú)力研究取得重大進(jìn)展[N];科技日?qǐng)?bào);2004年

6 吉仁;治療重癥肌無(wú)力再獲成功[N];中國(guó)勞動(dòng)保障報(bào);2004年

7 本報(bào)記者　 周麗;重癥肌無(wú)力沒那么可怕[N];河北日?qǐng)?bào);2006年

8 王振嶺 楊叁平 李宗海;雙向免疫有效調(diào)節(jié)治療重癥肌無(wú)力[N];健康報(bào);2006年

9 主任醫(yī)師 王小衡;重癥肌無(wú)力是怎么回事[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2007年

10 王振嶺 楊叁平 李宗海;中藥治療重癥肌無(wú)力機(jī)制被揭示[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉愛東;補(bǔ)體變化和重癥肌無(wú)力病情的關(guān)系[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

2 楊燕;重癥肌無(wú)力的多基因多位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性分析[D];天津醫(yī)科大學(xué);2010年

3 楊麗;全血灌流免疫吸附治療重癥肌無(wú)力的實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2002年

4 李衍濱;益筋方治療重癥肌無(wú)力的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2006年

5 朱麗君;重癥肌無(wú)力動(dòng)物模型的建立及中藥治療重癥肌無(wú)力的機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2011年

6 于靚霞;間充質(zhì)干細(xì)胞輸注治療重癥肌無(wú)力的實(shí)驗(yàn)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

7 張星虎;重癥肌無(wú)力患者外周血單個(gè)核細(xì)胞糖皮質(zhì)激素受體的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

8 饒媛;基于數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)的重癥肌無(wú)力疾病五臟相關(guān)性研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2010年

9 李翔;重癥肌無(wú)力患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及相關(guān)可溶性因子在其發(fā)病機(jī)制中的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

10 胡任飛;重癥肌無(wú)力病例回顧分析及健脾祛濕方對(duì)肌細(xì)胞損傷作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 吳軍城;重癥肌無(wú)力中西結(jié)合內(nèi)科治療方案優(yōu)化[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2012年

2 許勝杰;補(bǔ)益脾腎治療ⅡB型重癥肌無(wú)力的療效觀察[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2010年

3 王良光;升降散加減治療重癥肌無(wú)力的臨床療效觀察[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2010年

4 汪雙雙;中藥紫河車提取制劑輔助治療重癥肌無(wú)力的療效觀察[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2011年

5 高展;胸腺切除與重癥肌無(wú)力遠(yuǎn)期預(yù)后多因素分析及相關(guān)機(jī)制探討[D];浙江大學(xué);2002年

6 王曉輝;胸腺五肽對(duì)重癥肌無(wú)力的藥效研究[D];天津大學(xué);2006年

7 呂秋實(shí);重癥肌無(wú)力中醫(yī)證候的回顧性調(diào)查、分析[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2008年

8 王其進(jìn);中醫(yī)重癥肌無(wú)力患者報(bào)告結(jié)局量表反應(yīng)度考核[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2008年

9 幸波;電視胸腔鏡手術(shù)治療重癥肌無(wú)力患者的臨床療效評(píng)價(jià)[D];汕頭大學(xué);2011年

10 顧曉宇;張靜生教授治療Ⅰ、Ⅱ型重癥肌無(wú)力的臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2012年

，

本文編號(hào)：2542369