【摘要】：背景腦動脈粥樣硬化(Cerebral atherosclerosis,CAS)臨床多以缺血性腦血管病為主要表現(xiàn),若不及時防治在腦組織缺血、缺氧基礎(chǔ)上必然引起腦組織的損害,產(chǎn)生以記憶、認知功能缺損為主要表現(xiàn)的血管性認知功能障礙。然而,由腦動脈粥樣硬化引起的彌漫性小血管病變導致的缺血性腦血管疾病和血管性癡呆,目前尚無有效的治療方法。構(gòu)建的具有專利技術(shù)的攜帶人HGF基因的腺病毒載體(Adenovirus vector encoding HGF gene,Ad-HGF)在治療心肌缺血和周圍動脈疾病方面目前已進入臨床Ⅱ期階段,并獲得良好評價而居國際領(lǐng)先地位。前期實驗證實,將Ad-HGF注入CAS模型鼠蛛網(wǎng)膜下腔后,可有效在腦組織內(nèi)表達。目的觀察外源性Ad-HGF注入老齡CAS大鼠蛛網(wǎng)膜下腔后,對模型鼠記憶、認知行為學方面和局部腦血流量的影響及其促腦血管新生作用。為Ad-HGF治療腦動脈粥樣硬化導致的缺血性腦血管病的安全性和有效性提供實驗數(shù)據(jù)。方法1.造模:腎性高血壓合并高脂喂養(yǎng)復制老齡腦動脈粥樣硬化模型。2.行為學評價實驗:動物分為正常對照組、模型組、Ad-HGF干預組,2w后應用水迷宮進行定位航行實驗與空間探索實驗,水迷宮實驗結(jié)束后取腦組織,行免疫組織化學法檢測海馬區(qū)Bcl-2、Bax蛋白表達情況。3.腦血管新生實驗::動物分為正常對照組、模型組、Ad-HGF10d/20d/30d干預組,應用激光多普勒血流儀(Laser Doppler Flowmetry,LDF)監(jiān)測局部腦血流量;然后取腦組織,Quantitative Real-time PCR(qRT-PCR)和免疫熒光法檢測CD31和血管內(nèi)皮細胞生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA的含量及蛋白的表達量。結(jié)果1.造模組大鼠血壓和血脂水平明顯高于實驗前,頸內(nèi)動脈末端血管HE染色可見斑塊形成。2.定位航行與空間探索實驗:與正常對照組相比,模型組的逃避潛伏期明顯延長,平均穿臺次數(shù)和目標象限停留時間減少,差異具有顯著性(P0.01);與模型組相比,Ad-HGF組干預組的逃避潛伏期縮短,平均穿臺次數(shù)和目標象限停留時間提高,差異具有顯著性(P0.01)。3.免疫組織化學法檢測大腦海馬區(qū)Bcl-2、Bax蛋白表達結(jié)果:與模型組比較,Ad-HGF干預組Bcl-2和Bax蛋白表達差異具有顯著性(P0.01),Bcl-2蛋白表達增多,Bax表達減少,Bcl-2/Bax比值增加,差異具有顯著性(P0.01)。4.腦血流量變化:各組間血流值變化比較,模型組低于正常對照組,Ad-HGF干預組高于模型組,差異具有顯著性(P0.01);Ad-HGF干預組內(nèi)比較,隨時間的延長,血流值逐漸增加,20d和30d與10d相比顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。但30d與20d相比,無統(tǒng)計學差異。5.qRT-PCR結(jié)果:Ad-HGF能上調(diào)CD31和VEGF mRNA的表達量,且隨著時間的延長,表達量逐漸升高,以20d組的mRNA表達量最高,與模型組相比具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。6.免疫熒光結(jié)果:組間比較,Ad-HGF組CD31和VEGF蛋白標記的微血管密度(MVD)比模型組和正常組均顯著增高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),Ad-HGF組內(nèi)比較,以20d的MVD最為明顯,與10d相比差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論1.外源性Ad-HGF通過調(diào)節(jié)海馬區(qū)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax的表達,能顯著改善CAS模型鼠學習、記憶能力,為應用Ad-HGF治療腦血管疾病的安全性評估提供基礎(chǔ)實驗依據(jù)。2.外源性Ad-HGF可能通過上調(diào)血管新生因子CD31和VEGF的表達量,增加CAS模型鼠局部腦血量的供應,促進腦血管新生。
【圖文】：

對照組 20 99.6±4.6 103.8±4.2 -2.171 0.309模型組 20 102.1±4.1 148.8±7.1 -24.758 0.000t 值 -0.692 -27.976P 值 0.492 0.000表 2 兩組大鼠高脂喂養(yǎng)前后血脂水平變化( x ±s，mmol/L)組別 n 高脂喂養(yǎng) TC TG LDL-C HDL-對照組 20 前 1.53±0.13 0.54±0.13 0.27±0.07 1.78±0后 1.52±0.21 0.57±0.10 0.24±0.06 1.79±0模型組 20 前 1.54±0.16 0.55±0.12 0.25±0.06 1.76±0后 9.37±0.71 1.14±0.34 4.34±0.56 0.58±0ta-115.726 -9.886 -48.495 19.58Pa0.000 0.000 0.000 0.000tｂ-62.939 -5.431 -25.575 18.64Pｂ0.000 0.000 0.000 0.000注: ta、Pa代表造模組高脂喂養(yǎng)前后比較的 t 值與 P 值；tb、Pb代表正常組和模型組喂養(yǎng)后比較的 t 值和 P 值。

表 3 各組大鼠水迷宮實驗（ x ±s，，）組別 鼠數(shù)（n）平均逃避潛伏期(s) 穿越平臺次數(shù) 目標象限停留時間（s）正常組 630.10±3.73 5.99±0.87 44.99±5.90模型組 651.62±4.47a3.22±1.17a20.26±4.95aAd-HGF 組 640.17±3.24b5.21±0.83b37.89±7.74bF 值 36.871 7.875 147.28P 值 0.00 0.00 0.00注：模型組與正常組比較，aP＜0.01；Ad-HGF 組與模型組比較，bP＜0.01
【學位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R743

【參考文獻】

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1 金曉露;沈梅紅;;針灸治療急性缺血性中風數(shù)據(jù)挖掘及規(guī)律探析[J];遼寧中醫(yī)雜志;2017年01期

2 鄧海英;賴為國;;柿葉黃酮對腎性高血壓大鼠血管緊張素、醛固酮、降鈣素基因相關(guān)肽的影響[J];中成藥;2016年03期

3 丁紀超;劉e

本文編號：2537330