【摘要】：背景腦動(dòng)脈粥樣硬化(Cerebral atherosclerosis,CAS)臨床多以缺血性腦血管病為主要表現(xiàn),若不及時(shí)防治在腦組織缺血、缺氧基礎(chǔ)上必然引起腦組織的損害,產(chǎn)生以記憶、認(rèn)知功能缺損為主要表現(xiàn)的血管性認(rèn)知功能障礙。然而,由腦動(dòng)脈粥樣硬化引起的彌漫性小血管病變導(dǎo)致的缺血性腦血管疾病和血管性癡呆,目前尚無(wú)有效的治療方法。構(gòu)建的具有專利技術(shù)的攜帶人HGF基因的腺病毒載體(Adenovirus vector encoding HGF gene,Ad-HGF)在治療心肌缺血和周圍動(dòng)脈疾病方面目前已進(jìn)入臨床Ⅱ期階段,并獲得良好評(píng)價(jià)而居國(guó)際領(lǐng)先地位。前期實(shí)驗(yàn)證實(shí),將Ad-HGF注入CAS模型鼠蛛網(wǎng)膜下腔后,可有效在腦組織內(nèi)表達(dá)。目的觀察外源性Ad-HGF注入老齡CAS大鼠蛛網(wǎng)膜下腔后,對(duì)模型鼠記憶、認(rèn)知行為學(xué)方面和局部腦血流量的影響及其促腦血管新生作用。為Ad-HGF治療腦動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致的缺血性腦血管病的安全性和有效性提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。方法1.造模:腎性高血壓合并高脂喂養(yǎng)復(fù)制老齡腦動(dòng)脈粥樣硬化模型。2.行為學(xué)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn):動(dòng)物分為正常對(duì)照組、模型組、Ad-HGF干預(yù)組,2w后應(yīng)用水迷宮進(jìn)行定位航行實(shí)驗(yàn)與空間探索實(shí)驗(yàn),水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取腦組織,行免疫組織化學(xué)法檢測(cè)海馬區(qū)Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)情況。3.腦血管新生實(shí)驗(yàn)::動(dòng)物分為正常對(duì)照組、模型組、Ad-HGF10d/20d/30d干預(yù)組,應(yīng)用激光多普勒血流儀(Laser Doppler Flowmetry,LDF)監(jiān)測(cè)局部腦血流量;然后取腦組織,Quantitative Real-time PCR(qRT-PCR)和免疫熒光法檢測(cè)CD31和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA的含量及蛋白的表達(dá)量。結(jié)果1.造模組大鼠血壓和血脂水平明顯高于實(shí)驗(yàn)前,頸內(nèi)動(dòng)脈末端血管HE染色可見(jiàn)斑塊形成。2.定位航行與空間探索實(shí)驗(yàn):與正常對(duì)照組相比,模型組的逃避潛伏期明顯延長(zhǎng),平均穿臺(tái)次數(shù)和目標(biāo)象限停留時(shí)間減少,差異具有顯著性(P0.01);與模型組相比,Ad-HGF組干預(yù)組的逃避潛伏期縮短,平均穿臺(tái)次數(shù)和目標(biāo)象限停留時(shí)間提高,差異具有顯著性(P0.01)。3.免疫組織化學(xué)法檢測(cè)大腦海馬區(qū)Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)結(jié)果:與模型組比較,Ad-HGF干預(yù)組Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)差異具有顯著性(P0.01),Bcl-2蛋白表達(dá)增多,Bax表達(dá)減少,Bcl-2/Bax比值增加,差異具有顯著性(P0.01)。4.腦血流量變化:各組間血流值變化比較,模型組低于正常對(duì)照組,Ad-HGF干預(yù)組高于模型組,差異具有顯著性(P0.01);Ad-HGF干預(yù)組內(nèi)比較,隨時(shí)間的延長(zhǎng),血流值逐漸增加,20d和30d與10d相比顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。但30d與20d相比,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。5.qRT-PCR結(jié)果:Ad-HGF能上調(diào)CD31和VEGF mRNA的表達(dá)量,且隨著時(shí)間的延長(zhǎng),表達(dá)量逐漸升高,以20d組的mRNA表達(dá)量最高,與模型組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6.免疫熒光結(jié)果:組間比較,Ad-HGF組CD31和VEGF蛋白標(biāo)記的微血管密度(MVD)比模型組和正常組均顯著增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),Ad-HGF組內(nèi)比較,以20d的MVD最為明顯,與10d相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1.外源性Ad-HGF通過(guò)調(diào)節(jié)海馬區(qū)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax的表達(dá),能顯著改善CAS模型鼠學(xué)習(xí)、記憶能力,為應(yīng)用Ad-HGF治療腦血管疾病的安全性評(píng)估提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。2.外源性Ad-HGF可能通過(guò)上調(diào)血管新生因子CD31和VEGF的表達(dá)量,增加CAS模型鼠局部腦血量的供應(yīng),促進(jìn)腦血管新生。
【圖文】：

對(duì)照組 20 99.6±4.6 103.8±4.2 -2.171 0.309模型組 20 102.1±4.1 148.8±7.1 -24.758 0.000t 值 -0.692 -27.976P 值 0.492 0.000表 2 兩組大鼠高脂喂養(yǎng)前后血脂水平變化( x ±s，mmol/L)組別 n 高脂喂養(yǎng) TC TG LDL-C HDL-對(duì)照組 20 前 1.53±0.13 0.54±0.13 0.27±0.07 1.78±0后 1.52±0.21 0.57±0.10 0.24±0.06 1.79±0模型組 20 前 1.54±0.16 0.55±0.12 0.25±0.06 1.76±0后 9.37±0.71 1.14±0.34 4.34±0.56 0.58±0ta-115.726 -9.886 -48.495 19.58Pa0.000 0.000 0.000 0.000tｂ-62.939 -5.431 -25.575 18.64Pｂ0.000 0.000 0.000 0.000注: ta、Pa代表造模組高脂喂養(yǎng)前后比較的 t 值與 P 值；tb、Pb代表正常組和模型組喂養(yǎng)后比較的 t 值和 P 值。

表 3 各組大鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)（ x ±s，，）組別 鼠數(shù)（n）平均逃避潛伏期(s) 穿越平臺(tái)次數(shù) 目標(biāo)象限停留時(shí)間（s）正常組 630.10±3.73 5.99±0.87 44.99±5.90模型組 651.62±4.47a3.22±1.17a20.26±4.95aAd-HGF 組 640.17±3.24b5.21±0.83b37.89±7.74bF 值 36.871 7.875 147.28P 值 0.00 0.00 0.00注：模型組與正常組比較，aP＜0.01；Ad-HGF 組與模型組比較，bP＜0.01
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R743

【參考文獻(xiàn)】

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1 金曉露;沈梅紅;;針灸治療急性缺血性中風(fēng)數(shù)據(jù)挖掘及規(guī)律探析[J];遼寧中醫(yī)雜志;2017年01期

2 鄧海英;賴為國(guó);;柿葉黃酮對(duì)腎性高血壓大鼠血管緊張素、醛固酮、降鈣素基因相關(guān)肽的影響[J];中成藥;2016年03期

3 丁紀(jì)超;劉e

本文編號(hào)：2537330