【摘要】：目的 膠質(zhì)瘤是人常見的顱內(nèi)惡性腫瘤，傳統(tǒng)的手術(shù)及放化療效果不顯著。之前在諾帝(Nordy)誘導(dǎo)人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87MG分化的研究中發(fā)現(xiàn)瘤細(xì)胞在誘導(dǎo)分化后增殖活性明顯降低，且PRDX-1蛋白(Peroxiredoxin1，過氧化物氧化還原蛋白1)表達(dá)顯著減少，故推測PRDX-1可能與膠質(zhì)瘤的惡性進(jìn)展密切相關(guān)。本實驗擬通過檢測PRDX-1及其可能影響的分子通路的主要蛋白PTEN，EGFR，PI3K，Nrf2，NF-κB，，TNF-α在人膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)水平并分析其與膠質(zhì)瘤惡性程度的相關(guān)性，同時構(gòu)建過表達(dá)及抑制PRDX-1表達(dá)的慢病毒載體并轉(zhuǎn)染入人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87MG中，觀測其生物學(xué)特征改變，探索PRDX-1在膠質(zhì)瘤演變過程中的作用及可能的分子機(jī)制。 方法 檢索并收集2010-2011年新橋醫(yī)院病理科送檢手術(shù)切除的人膠質(zhì)瘤標(biāo)本，依據(jù)膠質(zhì)瘤WHO2007標(biāo)準(zhǔn)分級，并對其進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色檢測PRDX-1，PTEN，EGFR，PI3K，Nrf2，NF-κB，TNF-α表達(dá)水平，顯微鏡下拍攝電子圖片，IPP6.0軟件定量分析圖片陽性部位平均光密度值(MOD)，分析其表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤惡性程度之間的關(guān)系；構(gòu)建3組針對人PRDX-1基因的shRNA慢病毒表達(dá)載體，將其轉(zhuǎn)染至人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87MG，篩選并建立穩(wěn)定感染細(xì)胞系，Western blot、RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染效率，并選擇抑制效率最高的細(xì)胞株檢測轉(zhuǎn)染前后U87MG細(xì)胞凋亡水平，集落形成能力，繪制生長曲線，免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測PRDX-1，PTEN，EGFR，PI3K，Nrf2，NF-κB，TNF-α在轉(zhuǎn)染前后表達(dá)水平有無顯著變化。構(gòu)建針對人PRDX-1基因的過表達(dá)慢病毒載體，并轉(zhuǎn)染至人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87MG，篩選并建立穩(wěn)定感染細(xì)胞系，Western blot、RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染效率，同時檢測轉(zhuǎn)染前后U87MG細(xì)胞凋亡水平，集落形成能力，繪制生長曲線，免疫細(xì)胞化學(xué)檢測PRDX-1，PTEN，EGFR，PI3K，Nrf2，NF-κB，TNF-α在轉(zhuǎn)染前后表達(dá)水平有無顯著變化。將上述檢測結(jié)果使用SPSS19軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，其中多組均值間比較使用單因素方差分析以及Dennett’s T3檢驗，兩組均值間比較使用T檢驗。 結(jié)果 PRDX-1，EGFR，PI3K，Nrf2，NF-κB，TNF-α在高級別膠質(zhì)細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)水平均顯著高于其在低級別膠質(zhì)細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)水平(P＜0.05)，且隨膠質(zhì)瘤惡性程度的上升而呈顯著上升趨勢，而PTEN則相反(P＜0.05)；成功構(gòu)建了pHBLV-PRDX-1過表達(dá)慢病毒載體及3組pHBLV-PRDX-1-shRNA干擾慢病毒載體，并將其與對應(yīng)的空白對照慢病毒載體轉(zhuǎn)染入U87MG細(xì)胞，通過RT-PCR及Westernblot實驗篩選出抑制效率最高的pHBLV-PRDX-1-shRNA U87MG細(xì)胞株。與轉(zhuǎn)染前U87MG細(xì)胞及空白對照慢病毒載體轉(zhuǎn)染后U87MG細(xì)胞相比，轉(zhuǎn)染pHBLV-PRDX-1-shRNA慢病毒表達(dá)載體的細(xì)胞外形由梭形向長梭形轉(zhuǎn)變，細(xì)胞表面突起變長并增多，核分裂像減少，細(xì)胞內(nèi)PRDX-1的mRNA及蛋白表達(dá)水平均顯著下降，細(xì)胞生長速度降低、凋亡水平上升、集落形成能力減弱，免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示PRDX-1，NF-κB，TNF-α表達(dá)水平較轉(zhuǎn)染前下降，PTEN，PI3K，Nrf2，EGFR表達(dá)水平則未見顯著變化。與轉(zhuǎn)染前U87MG細(xì)胞及空白對照慢病毒載體轉(zhuǎn)染后U87MG細(xì)胞相比，轉(zhuǎn)染pHBLV-PRDX-1過表達(dá)慢病毒載體的細(xì)胞形態(tài)由梭形向短梭形轉(zhuǎn)變，細(xì)胞表面突起減少，PRDX-1的mRNA及蛋白表達(dá)水平均顯著上升，細(xì)胞生長速度加快、凋亡水平下降、集落形成能力增強(qiáng)，免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示PRDX-1，NF-κB，TNF-α表達(dá)水平較轉(zhuǎn)染前顯著上升，PTEN，PI3K，Nrf2，EGFR表達(dá)水平未見顯著變化。 結(jié)論 PRDX-1在人膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)水平與其惡性程度密切相關(guān)，對膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長、凋亡及克隆形成能力也有重要影響。膠質(zhì)瘤細(xì)胞中受Nrf2調(diào)控擴(kuò)增的PRDX-1可通過TNF-α作用于膠質(zhì)瘤細(xì)胞產(chǎn)生大量游離的NF-κB，參與調(diào)控細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子從而抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡，促進(jìn)其向惡性轉(zhuǎn)變；PRDX-1也可能通過與PTEN形成復(fù)合物，影響其對EGFR競爭性抑制及下游PI3K/AKT信號通路的傳導(dǎo)，一定程度參上與了膠質(zhì)瘤惡變，但其機(jī)制尚需進(jìn)一步研究證實。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R739.41

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 康瑞霞;劉震西;劉蕓;李玉花;姜勇;;Prx1對細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程的調(diào)控[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2012年11期

2 許建平;劉宏;卞修武;陳劍鴻;周向東;吳玉章;;諾帝對惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87MG生物學(xué)行為的影響及差異表達(dá)蛋白質(zhì)組分析[J];中華病理學(xué)雜志;2007年09期

3 許建平;卞修武;陳意生;吳玉章;蔣雪峰;;人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞SHG-44經(jīng)諾帝誘導(dǎo)分化后形態(tài)學(xué)改變及差異表達(dá)蛋白的質(zhì)譜分析[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2006年04期

4 ;PTEN encoding product:a marker for tumorigenesis and progression of gastric carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2003年01期

5 翟小明;顧科;王建平;張軍寧;;成人腦惡性膠質(zhì)瘤術(shù)后放療同步替尼泊甙聯(lián)合司莫司汀化療療效分析[J];中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志;2007年02期

本文編號：2527594