【摘要】：目的選擇一種將外源基因瞬時轉(zhuǎn)入膠質(zhì)瘤細胞的高效轉(zhuǎn)染方法。方法以去內(nèi)毒素真核表達載體DsRed2為外源基因,分別采用脂質(zhì)體Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染法、脂質(zhì)體Viafect轉(zhuǎn)染法以及電轉(zhuǎn)染法,將不同濃度的DsRed2質(zhì)粒(0.25、0.5、1.0μg)轉(zhuǎn)染入膠質(zhì)瘤U251細胞(以下稱膠質(zhì)瘤細胞,細胞數(shù)量均為1.0×105個)。熒光顯微鏡下采用可見光、紅色熒光濾鏡觀察細胞形態(tài)及紅色熒光蛋白表達,紫外光濾鏡下觀察細胞核Hocest33342染色情況,計算轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果三種方法均能將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至膠質(zhì)瘤細胞中,紅色熒光蛋白表達效果均良好。轉(zhuǎn)染后的細胞形態(tài)基本正常,但表達紅色熒光蛋白與未表達紅色熒光蛋白的細胞形態(tài)差異較大。相同質(zhì)粒濃度下,電轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染后表達紅色熒光蛋白的細胞數(shù)量多于脂質(zhì)體Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染法、脂質(zhì)體Viafect轉(zhuǎn)染法。隨著質(zhì)粒濃度的升高,脂質(zhì)體Viafect轉(zhuǎn)染法和電轉(zhuǎn)染法對膠質(zhì)瘤細胞的轉(zhuǎn)染效率逐漸升高。相同質(zhì)粒濃度下,電轉(zhuǎn)染法對膠質(zhì)瘤細胞的轉(zhuǎn)染效率均高于脂質(zhì)體Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染法和脂質(zhì)體Viafect轉(zhuǎn)染法(P均0.01)。結(jié)論電轉(zhuǎn)染法對外源基因瞬時轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細胞的轉(zhuǎn)染效率較高,并呈質(zhì)粒濃度依賴性。
[Abstract]:Objective to select an efficient method for transient transfer of foreign genes into glioma cells. Methods Eukaryotic expression vector DsRed2 was used as foreign gene to transfer different concentrations of DsRed2 plasmid (0.25 渭 g, 0.5 渭 g, 1.0 渭 g) into glioma U251 cells (hereinafter referred to as glioma cells, the number of cells was 1.0 脳 10 5) by liposomes Lipofectamine2000, Viafect and electroporation, respectively. The morphology of cells and the expression of red fluorescent protein were observed by visible light and red fluorescence filter under fluorescence microscope, and the staining of nuclear Hocest33342 was observed under ultraviolet light filter, and the transfer efficiency was calculated. Results all the three methods could transfer the plasmid into glioma cells, and the expression of red fluorescent protein was good. The morphology of the cells after transfection was basically normal, but the morphology of the cells expressing red fluorescent protein was different from that of non-expressing red fluorescent protein. At the same plasmid concentration, the number of cells expressing red fluorescent protein after electrostaining was more than that of liposomes Lipofectamine2000 and Viafect. With the increase of plasmid concentration, the efficiency of liposomes Viafect and electroporation on glioma cells increased gradually. At the same plasmid concentration, the efficiency of electroporation on glioma cells was higher than that of liposomes Lipofectamine2000 and Viafect. Conclusion the efficiency of transient transfer of foreign genes into glioma cells is high in a concentration-dependent manner.
【作者單位】： 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院;
【基金】：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)科技百萬工程(YKD2015KJBW010);內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)青年創(chuàng)新基金資助項目(YKD2012QNX009)
【分類號】：R739.41

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本文編號：2524067