【摘要】：目的選擇一種將外源基因瞬時轉入膠質瘤細胞的高效轉染方法。方法以去內毒素真核表達載體DsRed2為外源基因,分別采用脂質體Lipofectamine2000轉染法、脂質體Viafect轉染法以及電轉染法,將不同濃度的DsRed2質粒(0.25、0.5、1.0μg)轉染入膠質瘤U251細胞(以下稱膠質瘤細胞,細胞數量均為1.0×105個)。熒光顯微鏡下采用可見光、紅色熒光濾鏡觀察細胞形態(tài)及紅色熒光蛋白表達,紫外光濾鏡下觀察細胞核Hocest33342染色情況,計算轉染效率。結果三種方法均能將質粒轉染至膠質瘤細胞中,紅色熒光蛋白表達效果均良好。轉染后的細胞形態(tài)基本正常,但表達紅色熒光蛋白與未表達紅色熒光蛋白的細胞形態(tài)差異較大。相同質粒濃度下,電轉染法轉染后表達紅色熒光蛋白的細胞數量多于脂質體Lipofectamine2000轉染法、脂質體Viafect轉染法。隨著質粒濃度的升高,脂質體Viafect轉染法和電轉染法對膠質瘤細胞的轉染效率逐漸升高。相同質粒濃度下,電轉染法對膠質瘤細胞的轉染效率均高于脂質體Lipofectamine2000轉染法和脂質體Viafect轉染法(P均0.01)。結論電轉染法對外源基因瞬時轉染膠質瘤細胞的轉染效率較高,并呈質粒濃度依賴性。
[Abstract]:Objective to select an efficient method for transient transfer of foreign genes into glioma cells. Methods Eukaryotic expression vector DsRed2 was used as foreign gene to transfer different concentrations of DsRed2 plasmid (0.25 渭 g, 0.5 渭 g, 1.0 渭 g) into glioma U251 cells (hereinafter referred to as glioma cells, the number of cells was 1.0 脳 10 5) by liposomes Lipofectamine2000, Viafect and electroporation, respectively. The morphology of cells and the expression of red fluorescent protein were observed by visible light and red fluorescence filter under fluorescence microscope, and the staining of nuclear Hocest33342 was observed under ultraviolet light filter, and the transfer efficiency was calculated. Results all the three methods could transfer the plasmid into glioma cells, and the expression of red fluorescent protein was good. The morphology of the cells after transfection was basically normal, but the morphology of the cells expressing red fluorescent protein was different from that of non-expressing red fluorescent protein. At the same plasmid concentration, the number of cells expressing red fluorescent protein after electrostaining was more than that of liposomes Lipofectamine2000 and Viafect. With the increase of plasmid concentration, the efficiency of liposomes Viafect and electroporation on glioma cells increased gradually. At the same plasmid concentration, the efficiency of electroporation on glioma cells was higher than that of liposomes Lipofectamine2000 and Viafect. Conclusion the efficiency of transient transfer of foreign genes into glioma cells is high in a concentration-dependent manner.
【作者單位】： 內蒙古醫(yī)科大學附屬醫(yī)院;
【基金】：內蒙古醫(yī)科大學科技百萬工程(YKD2015KJBW010);內蒙古醫(yī)科大學青年創(chuàng)新基金資助項目(YKD2012QNX009)
【分類號】：R739.41

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 徐俊杰;于洪泉;國巍;趙偉;金宏;溫娜;齊玲;;西蘭花多肽對大鼠C6膠質瘤細胞生長的影響[J];中風與神經疾病雜志;2012年11期

2 徐俊杰;于洪泉;趙偉;金宏;溫娜;齊玲;劉興吉;;西蘭花多肽對C6膠質瘤細胞的誘導凋亡作用[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2013年01期

3 李嗍,王楓,繆珊,駱文靜;過量鋅對鼠膠質瘤細胞體外生長的影響[J];解放軍預防醫(yī)學雜志;2001年04期

4 黃強,董軍;膠質瘤的分子外科治療[J];中國微侵襲神經外科雜志;2001年04期

5 葉明,周岱,周幽心,王瑋,傅建新,黃煜倫;血管內皮生長因子在膠質瘤中的表達[J];腫瘤;2002年06期

6 王成偉 ,劉福生 ,曲元明 ,李桂林;血管內皮生長因子抗體抑制膠質瘤生長的實驗研究[J];中華神經外科雜志;2003年01期

7 李方成,郭希高,陶宗玉,林吉惠,鐘志光,譚平國;微管功能變化對C6膠質瘤細胞葡萄糖攝取的影響[J];中華實驗外科雜志;2003年03期

8 顧宇翔,陳銜城,徐宏志,王宇倩;親細胞非均質分子脂質對鼠腦膠質瘤局部治療的研究[J];中國臨床神經科學;2003年04期

9 陳yN招,徐如祥,楊志林,徐宗俊,杜謀選,姜曉丹,蔡穎謙;膠質瘤對血腦屏障內皮細胞間連接的影響[J];解剖學雜志;2003年05期

10 黃強;;膠質瘤研究中的若干問題[J];中國神經腫瘤雜志;2003年01期

相關會議論文 前10條

1 李飛;李梅;盧佳友;朱剛;林江凱;孟輝;吳南;陳志;馮華;;脂質微區(qū)干擾劑甲基-β-環(huán)糊精影響C6膠質瘤細胞侵襲和遷移的體外實驗研究[A];中國醫(yī)師協會神經外科醫(yī)師分會第四屆全國代表大會論文匯編[C];2009年

2 吳安華;王運杰;Ohlfest JR;Wei Chen;Low WC;;膠質瘤的生物治療-從實驗室到臨床[A];中華醫(yī)學會神經外科學分會第九次學術會議論文匯編[C];2010年

3 徐宏;韓楊云;孫中書;李新軍;;與膠質瘤代謝通路相關的候選基因篩選[A];中華醫(yī)學會神經外科學分會第九次學術會議論文匯編[C];2010年

4 潘冬生;;多基因修飾膠質瘤細胞疫苗的抗腫瘤免疫反應[A];中國醫(yī)師協會神經外科醫(yī)師分會第六屆全國代表大會論文匯編[C];2011年

5 張震;徐克;;低強度超聲誘導C6膠質瘤細胞凋亡的體外實驗研究[A];中華醫(yī)學會第十三次全國超聲醫(yī)學學術會議論文匯編[C];2013年

6 蔣偉峰;高方友;尹浩;;白細胞介素-17及其受體在膠質瘤中的表達及臨床意義[A];2013年貴州省神經外科年會論文集[C];2013年

7 徐慶生;張小兵;周永慶;;膠質瘤干細胞及其放療敏感性[A];2011年浙江省神經外科學學術年會論文匯編[C];2011年

8 楊孔賓;趙世光;劉炳學;陳曉豐;戴欽舜;;K~+通道阻斷劑四乙胺對大鼠膠質瘤細胞的增殖和凋亡影響[A];中國醫(yī)師協會神經外科醫(yī)師分會第四屆全國代表大會論文匯編[C];2009年

9 潘冬生;;聯合基因誘導體內抗膠質瘤免疫反應的實驗研究[A];2011中華醫(yī)學會神經外科學學術會議論文匯編[C];2011年

10 朱永堅;張建民;劉偉國;沈宏;;甲氧胺聯合β-欖香烯抑制膠質瘤細胞增殖的實驗研究[A];中華醫(yī)學會神經外科學分會第九次學術會議論文匯編[C];2010年

相關重要報紙文章 前2條

1 記者 匡遠深;讓膠質瘤干細胞不再“繁殖”[N];健康報;2011年

2 張獻懷　張文;瘤區(qū)埋雷 持續(xù)殺傷[N];健康報;2007年

相關博士學位論文 前10條

1 董軍;CUL4B在神經膠質細胞瘤中的作用研究[D];山東大學;2015年

2 張睿;循環(huán)miR-221/222在膠質瘤診斷與預后中的價值與基于CED的中樞神經系統給藥新方法的研究[D];山東大學;2015年

3 許森林;ALDH1A1在膠質瘤侵襲和結直腸癌轉移中的作用和機制[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

4 王嘯;靶向嵌段共聚物膠束在膠質瘤磁共振成像、藥物輸送及治療的應用[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

5 廖紅展;鋅指轉錄因子SNAI2在miR-203的影響下通過上皮間質轉化參與膠質瘤耐藥機制的調節(jié)[D];南方醫(yī)科大學;2015年

6 潘俊;IRG1促進膠質瘤增殖的作用機制及臨床意義[D];南方醫(yī)科大學;2015年

7 鄭傳宜;膠質瘤中GLUT3基因異常表達的意義及其相關調控機制[D];南方醫(yī)科大學;2015年

8 徐紅超;氬氦冷凍消融聯合GM-CSF治療膠質瘤小鼠的療效及其對小鼠脾臟樹突狀細胞免疫功能影響[D];南方醫(yī)科大學;2015年

9 黃素寧;TNFRSF6B在膠質瘤中的表達及對膠質瘤細胞增殖及凋亡的作用研究[D];南方醫(yī)科大學;2015年

10 熊偉;GBE1在人腦膠質細胞瘤中的表達及干預實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

相關碩士學位論文 前10條

1 張大慶;單核細胞趨化蛋白-1在骨髓間充質干細胞向膠質瘤細胞趨化中的作用研究[D];大連醫(yī)科大學;2012年

2 黃俊龍;ADC值與膠質瘤Ki-67、MGMT的相關性研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

3 李明聰;下調Pygo2對U251及U251起源的膠質瘤干細胞生物學特性的影響[D];福建醫(yī)科大學;2015年

4 徐云峰;膠質瘤干細胞的3D培養(yǎng)及其核酸適體篩選的探索[D];福建醫(yī)科大學;2015年

5 張靜文;T細胞過繼免疫治療小鼠腦膠質瘤原位模型的研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

6 洪宇;膠質瘤瘤周水腫、病理級別、Ki-67表達三者相關性研究[D];石河子大學;2015年

7 姬云翔;磷酸化Cx43蛋白在人膠質瘤細胞中表達及其與腫瘤細胞增殖相關性研究[D];石河子大學;2015年

8 朱峰;OPN的異常表達與膠質瘤的相關性研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

9 劉兵;SENP1表達水平對人腦膠質瘤發(fā)生發(fā)展的作用機制及其相關性[D];河北醫(yī)科大學;2015年

10 李文華;Slit2/Robo1在人腦膠質瘤中的表達及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學;2015年

，

本文編號：2524067