發(fā)布時(shí)間：2019-08-06 16:39

【摘要】：背景： 直接的缺血缺氧損傷或占位、水腫壓迫等繼發(fā)的缺血缺氧損傷所導(dǎo)致的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，根源上是由于顱內(nèi)腦組織或脊髓相應(yīng)的神經(jīng)細(xì)胞損傷。海馬和皮層的神經(jīng)元是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最重要的功能細(xì)胞，其能量需求及功能維持需要相對(duì)嚴(yán)格的細(xì)胞外環(huán)境，因此也是缺血缺氧性疾病及其他神經(jīng)系統(tǒng)損傷中容易受損的細(xì)胞。如何增加其對(duì)缺氧缺血等氧化應(yīng)激和細(xì)胞毒性損傷的耐受性是目前比較有意義和前景的研究。大量的實(shí)驗(yàn)研究從不同的層次證明HP保護(hù)作用的存在，但是具體的缺氧程度和時(shí)間報(bào)道不一。 目的： 本實(shí)驗(yàn)采用體外培養(yǎng)的海馬和皮層神經(jīng)元研究缺氧預(yù)適應(yīng)對(duì)谷氨酸損傷的保護(hù)作用，同時(shí)探索最佳保護(hù)作用的氧氣濃度、缺氧時(shí)間、缺氧次數(shù)和缺氧次序，，為進(jìn)一步的研究和應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 方法： 分離培養(yǎng)24h內(nèi)的新生Wistar大鼠的大腦皮層和海馬細(xì)胞，用有血清培養(yǎng)液加5-Fu抑制膠質(zhì)細(xì)胞增殖的方法對(duì)神經(jīng)元進(jìn)行原代培養(yǎng)，培養(yǎng)獲得相當(dāng)比例的神經(jīng)元（免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定NSE陽(yáng)性細(xì)胞大于90%）。采用MTT法測(cè)定其生長(zhǎng)曲線；設(shè)立陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組，用MTT法測(cè)定確立谷氨酸損傷模型。對(duì)培養(yǎng)至第7天的細(xì)胞進(jìn)行不同氧濃度和時(shí)間的缺氧預(yù)適應(yīng)及谷氨酸損傷，并設(shè)立常氧對(duì)照組，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞的存活率，用LDH檢測(cè)細(xì)胞的死亡率。應(yīng)用spss.17.0對(duì)不同氧濃度和缺氧時(shí)間下細(xì)胞的存活率和死亡率進(jìn)行t檢驗(yàn)與方差分析。 結(jié)果： 1、采用有血清培養(yǎng)液對(duì)新生大鼠的海馬和皮層的細(xì)胞分別進(jìn)行原代培養(yǎng)，培養(yǎng)液中加5-Fu抑制膠質(zhì)細(xì)胞增殖，經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定，NSE陽(yáng)性細(xì)胞比例可達(dá)90%以上（90±2.24%）；且神經(jīng)元第6~8天生長(zhǎng)穩(wěn)定，但是第9天開始出現(xiàn)生長(zhǎng)衰退趨勢(shì)。2、1%O2和3%O2缺氧1~2h，皮層神經(jīng)元谷氨酸損傷模型與對(duì)照組相比，存活率下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）；3%O2缺氧4h，海馬神經(jīng)元谷氨酸損傷模型實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，存活率提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；5%O2缺氧10h，皮層神經(jīng)元谷氨酸損傷模型實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，存活率提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；8%O2缺氧4~8h，皮層神經(jīng)元谷氨酸損傷模型實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，存活率提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05），其中缺氧4~6h差異顯著（p0.01）；5%O2下反復(fù)缺氧2h1次、2次、3次、4次，皮層神經(jīng)元谷氨酸損傷模型實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，其存活率下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p0.05）。1%O2~8%O2缺氧預(yù)適應(yīng)的其余時(shí)間段及10%O2缺氧4~12h，皮層和海馬神經(jīng)元谷氨酸損傷模型實(shí)驗(yàn)組與相應(yīng)的對(duì)照組相比，存活率的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。3、對(duì)皮層神經(jīng)元8%O2缺氧4~8h后復(fù)氧2h、4h、6h給予谷氨酸損傷，不同復(fù)氧時(shí)間組間存活率的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）。 結(jié)論： 1、有血清培養(yǎng)液加5-Fu抑制膠質(zhì)細(xì)胞增殖可以培養(yǎng)出純度相對(duì)較高的神經(jīng)元，可用于研究神經(jīng)元的相關(guān)特性研究。2、原代體外培養(yǎng)的新生鼠海馬神經(jīng)元對(duì)谷氨酸損傷的反應(yīng)相對(duì)于皮層神經(jīng)元更敏感。3、3%O2缺氧4h，對(duì)谷氨酸損傷模型中的原代體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元表現(xiàn)出保護(hù)作用；5%O2缺氧10h、8%O2缺氧4~8h對(duì)谷氨酸損傷模型中的原代體外培養(yǎng)皮層神經(jīng)元具有保護(hù)作用。4、較低氧濃度（1%O2）缺氧預(yù)適應(yīng)對(duì)海馬和皮層神經(jīng)元谷氨酸損傷模型具有損傷作用；間斷多次短時(shí)間缺氧預(yù)適應(yīng)及損傷后缺氧預(yù)適應(yīng)不能挽救細(xì)胞死亡。5、8%O2缺氧4~8h缺氧預(yù)適應(yīng)對(duì)原代體外培養(yǎng)的新生鼠皮層神經(jīng)元谷氨酸損傷模型產(chǎn)生的神經(jīng)保護(hù)作用至少可持續(xù)6h。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R741

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2523627