【摘要】：目的探討經(jīng)過氧化氫(H_2O_2)損傷干預(yù)下Rab30在PC12細(xì)胞中的表達(dá)及可能的促凋亡通路。方法將體外常規(guī)培養(yǎng)的PC12細(xì)胞分為正常組和H_2O_2組。采用MTT檢測(cè)細(xì)胞存活率;Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;Western-blot檢測(cè)Rab30、JNK3、GM130、Caspase-3的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果 H_2O_2損傷干預(yù)可導(dǎo)致PC12細(xì)胞的存活率顯著降低(P0.05),早期凋亡率和總凋亡率均顯著增高(均P0.05);JNK3、Caspase-3蛋白表達(dá)水平在PC12細(xì)胞中顯著增加(P0.05),而Rab30、GM130蛋白表達(dá)顯著下降(P0.05)。結(jié)論 H_2O_2在PC12細(xì)胞中的促凋亡通路可能是H_2O_2激活JNK3的表達(dá)而靶向下調(diào)Rab30,致使高爾基體結(jié)構(gòu)破碎,并激活Caspase-3的活性,從而誘導(dǎo)PC12細(xì)胞的凋亡。
【圖文】：

圖1顯微鏡下正常培養(yǎng)條件下PC12細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)(10×40)。2．2H2O2對(duì)PC12存活率的影響經(jīng)200ΜmH2O2處理5h后的PC12細(xì)胞存活率較正常培養(yǎng)的細(xì)胞明顯減少。H2O2組的吸光度A值(0．1577±0．0100)與正常組(0．2553±0．0084)比較明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。見表1。2．3H2O2對(duì)PC12凋亡率的影響結(jié)果顯示正常組PC12細(xì)胞絕大部分均為雙陰性細(xì)胞(圖1A，左下象限)，正常組細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，無明顯細(xì)胞凋亡或死亡;而經(jīng)H2O2損傷干預(yù)后PC12細(xì)胞的凋亡率明顯增加(圖1B，，右上象限和右下象限)，即H2O2組(32．7500±1．0485;46．1167±1．1501)的早期凋亡率及總凋亡率與正常組(0．5033±0．0216;0．6333±0．0450)的比較顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。見表2和圖2。表1MTT法檢測(cè)兩組PC12細(xì)胞存活率的比較(x±s)實(shí)驗(yàn)分組NA值正常組60．2553±0．0084H2O2組60．1577±0．0100a注:a為與正常組比較，P＜0．05。表2AnnexinV/PI雙染法檢測(cè)兩組PC12細(xì)胞的凋亡比較［%;(x±s)］組別N早期凋亡率總凋亡率正常組60．5033±0．02160．6333±0．0450H2O2組632．7500±1．0485a46．1167±1．1501b注:a為與正常組的早期凋亡率比較，P＜0．05;b為與正常組的總凋亡率比較，P＜0．05。圖2AnnexinV-FITC/PI法檢測(cè)PC12細(xì)胞的凋亡率流式細(xì)胞分析圖。注:A:正常組;B:H2O2組;左下象限:正�；畹腜C12細(xì)胞(雙陰性細(xì)胞);右上象限:晚期凋亡或死亡的PC12細(xì)胞;右下象限:早期凋亡的PC12細(xì)胞;左上象限:細(xì)胞碎片、損傷的PC12細(xì)胞。2．4H2O2對(duì)PC12細(xì)胞Ｒab30、JNK3、GM130、Caspase-3蛋白表達(dá)的影響H2O2損傷干預(yù)后，Ｒab30、GM130在PC12細(xì)胞的表

6333±0．0450)的比較顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。見表2和圖2。表1MTT法檢測(cè)兩組PC12細(xì)胞存活率的比較(x±s)實(shí)驗(yàn)分組NA值正常組60．2553±0．0084H2O2組60．1577±0．0100a注:a為與正常組比較，P＜0．05。表2AnnexinV/PI雙染法檢測(cè)兩組PC12細(xì)胞的凋亡比較［%;(x±s)］組別N早期凋亡率總凋亡率正常組60．5033±0．02160．6333±0．0450H2O2組632．7500±1．0485a46．1167±1．1501b注:a為與正常組的早期凋亡率比較，P＜0．05;b為與正常組的總凋亡率比較，P＜0．05。圖2AnnexinV-FITC/PI法檢測(cè)PC12細(xì)胞的凋亡率流式細(xì)胞分析圖。注:A:正常組;B:H2O2組;左下象限:正常活的PC12細(xì)胞(雙陰性細(xì)胞);右上象限:晚期凋亡或死亡的PC12細(xì)胞;右下象限:早期凋亡的PC12細(xì)胞;左上象限:細(xì)胞碎片、損傷的PC12細(xì)胞。2．4H2O2對(duì)PC12細(xì)胞Ｒab30、JNK3、GM130、Caspase-3蛋白表達(dá)的影響H2O2損傷干預(yù)后，Ｒab30、GM130在PC12細(xì)胞的表達(dá)明顯下降，而JNK3、Caspase-3在PC12細(xì)胞中表達(dá)明顯增加。即，H2O2組中的Ｒab30(0．0570±0．0014)的蛋白表達(dá)與正常組(0．2272±0．0020)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);H2O2組中的JNK3(0．6904±0．0211)蛋白表達(dá)與正常組(0．1167±0．0024)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);H2O2組中的GM130(0．0821±0．0038)的蛋白表達(dá)與正常組(0．2704±0．0053)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);H2O2組中的Caspase-3(0．8620±0．0198)的蛋白表達(dá)與正常組(0．3232±0．0006)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。見表3。·518·JournalofInternationalNeurologyandNeurosurgery2016，43(6)
【作者單位】： 湖南省人民醫(yī)院馬王堆院區(qū)卒中中心;湘潭市第一人民醫(yī)院老年醫(yī)學(xué)科;湖南省人民醫(yī)院/湖南省老年醫(yī)學(xué)研究所;
【基金】：湖南省自然科學(xué)基金(14JJ2143) 湖南省衛(wèi)計(jì)委科研項(xiàng)目(B2013-065;B2012-121)
【分類號(hào)】：R741

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本文編號(hào)：2521502