【摘要】：目的:觀察化合物TM對α-突觸核蛋白(α-synuclein,α-syn)降解的影響,并探討其可能的作用機(jī)制。方法:體外培養(yǎng)PC12/α-syn-A53T細(xì)胞株,經(jīng)多西環(huán)素誘導(dǎo)過表達(dá)α-突觸核蛋白建立帕金森病的體外模型,不同濃度的化合物TM及聯(lián)合應(yīng)用溶酶體抑制劑(CQ)和蛋白酶體抑制劑(MG132)處理細(xì)胞24 h,免疫印跡法檢測α-突觸核蛋白、自噬標(biāo)志性蛋白LC3和免疫蛋白酶體亞基β5i(LMP7)的蛋白表達(dá)水平,real-time PCR檢測蛋白酶復(fù)合體亞基基因的表達(dá)水平,熒光法檢測糜蛋白樣蛋白酶經(jīng)TM處理后的活性變化。利用α-syn-A53T轉(zhuǎn)基因小鼠作為帕金森病的體內(nèi)模型,灌胃TM(10mg/kg),每天一次,連續(xù)4 W,末次給藥后通過抓力實(shí)驗(yàn)和滾輪實(shí)驗(yàn)檢測動(dòng)物的行為學(xué)變化,免疫印跡法檢測中腦α-突觸核蛋白的變化。結(jié)果:PC12/α-syn-A53T細(xì)胞株經(jīng)多西環(huán)素誘導(dǎo)后能穩(wěn)定過表達(dá)突變的α-突觸核蛋白,Western blot檢測發(fā)現(xiàn)TM有效的降解α-突觸核蛋白,且具有時(shí)間依賴性和劑量依賴性;TM聯(lián)合溶酶體抑制劑(CQ)組的α-突觸核蛋白水平較單獨(dú)CQ組低。TM上調(diào)免疫蛋白酶體亞基β5i(LMP7)的m RNA和蛋白表達(dá),升高糜蛋白樣蛋白酶的活性,不影響自噬標(biāo)志性蛋白LC3的改變。α-syn-A53T轉(zhuǎn)基因小鼠灌胃TM 4 W后,紋狀體中α-突觸核蛋白的水平較對照組明顯降低。結(jié)論:化合物TM通過蛋白酶體途徑降解α-突觸核蛋白,其作用機(jī)制可能是通過上調(diào)LMP7蛋白的表達(dá),激活蛋白酶體的活性從而降解α-突觸核蛋白。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R742.5

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本文編號：2517755