【摘要】：研究背景：急性缺血性腦卒中是全世界致死率、致殘率最高的疾病之一,目前臨床上缺乏有效的治療方法。腦缺血可引起從能量剝奪到細(xì)胞死亡的級(jí)聯(lián)反應(yīng),早期事件主要包括興奮性毒性和氧化應(yīng)激,晚期事件則以炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡為主。目前,大量的基礎(chǔ)和臨床研究致力于干預(yù)腦卒中病理相關(guān)的信號(hào)分子,以開拓有效的神經(jīng)保護(hù)治療。興奮性毒性作為腦卒中病理的起始環(huán)節(jié),是卒中治療的首要靶點(diǎn)。腦缺血后,興奮性谷氨酸過度釋放并可持續(xù)作用于N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate, NMDA)受體,從而啟動(dòng)一系列下游有害信號(hào)通路,例如細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載、自由基的產(chǎn)生等,最終導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞死亡。最新研究顯示,突觸后致密區(qū)(postsynaptic density, PSD)的PSD-95蛋白可使NMDA受體與細(xì)胞內(nèi)的多種毒性信號(hào)分子橋聯(lián)。抑制PSD-95使NMDA受體與PSD-95蛋白解離,既可減輕興奮性毒性,又不影響NMDA受體活性和突觸功能。炎癥反應(yīng)貫穿卒中后腦損傷的整個(gè)病理過程,對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞死亡和神經(jīng)重塑具有重要影響。因此,以卒中后炎癥反應(yīng)為靶點(diǎn)的神經(jīng)保護(hù)治療策略引起廣泛關(guān)注。我們的前期研究發(fā)現(xiàn),多聚(腺苷二磷酸-核糖)聚合酶[Poly (ADP-ribose) polymerase, PARP-1]抑制劑在體內(nèi)可減輕雄性大鼠卒中后的炎癥反應(yīng)和神經(jīng)元死亡,并可促進(jìn)神經(jīng)元再生；在體外可抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化和炎癥介質(zhì)表達(dá)。OCT4是調(diào)控干細(xì)胞多潛能性及自我更新的核心基因之一。OCT4B-190是一種新近發(fā)現(xiàn)的OCT4基因產(chǎn)物。前期研究顯示,OCT4B-190可能在熱休克等應(yīng)激狀態(tài)下具有抗細(xì)胞凋亡作用。研究目的：1、探討PSD-95蛋白調(diào)控興奮性神經(jīng)毒性的分子機(jī)制。2、研究PARP-1調(diào)控卒中后腦炎癥反應(yīng)的機(jī)制。3、探索OCT4B-190對(duì)缺血性腦損傷的影響及調(diào)控機(jī)制。研究方法：在體內(nèi),制備小鼠急性大腦中動(dòng)脈阻塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)或全腦缺血(global ischemia, GI)模型；在體外,制備原代神經(jīng)元氧糖剝奪(oxygen glucose deprivation, OGD)模型。通過TTC染色、Fluro-Jade B染色和行為學(xué)評(píng)分評(píng)估小鼠缺血性腦損傷。利用MTT法和Calcein AM染色評(píng)估神經(jīng)元的存活情況。通過腺病毒介導(dǎo)的蛋白過表達(dá)、免疫熒光,Western Blot和免疫共沉淀等探討相關(guān)的分子機(jī)制。研究結(jié)果：1、抑制PSD-95可減輕興奮性毒性所致的DNA損傷和神經(jīng)元細(xì)胞死亡；抑制PSD-95可減少神經(jīng)元過氧化物生成和降低NADPH氧化酶的活性；抑制PSD-95不影響細(xì)胞內(nèi)的Ca2+水平。2、PARP-1抑制劑延遲給藥對(duì)雄／雌性大鼠腦缺血后皮層及海馬CA1區(qū)神經(jīng)元死亡均無影響；PJ34的延遲給藥能抑制雄性大鼠腦缺血后皮層、海馬CA1區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞的活化,但對(duì)雌性大鼠無效;體外小膠質(zhì)細(xì)胞活化與PARP-1激活具有相關(guān)性；PARP-1激活調(diào)控NF-κB轉(zhuǎn)錄活性。3、OCT4B-190過表達(dá)在體外可減輕OGD誘導(dǎo)的原代神經(jīng)元死亡,在體內(nèi)可減輕MCAO小鼠腦梗死體積和神經(jīng)功能缺損；OCT4B-190過表達(dá)可下調(diào)腦缺血誘導(dǎo)的HDAC6表達(dá)和GSK-3β活性,并影響HDAC6和GSK-3P間的相互作用。研究結(jié)論：1、PSD-95可介導(dǎo)NMDA受體誘導(dǎo)的NOX2激活和過氧化物產(chǎn)生,是引起神經(jīng)興奮性毒性的分子機(jī)制。2、PARP-1激活可調(diào)控NF-κB轉(zhuǎn)錄活性,影響小膠質(zhì)細(xì)胞的活化,其對(duì)卒中后腦炎癥反應(yīng)的調(diào)控具有性別差異性。3、OCT4B-190可調(diào)控卒中后的GSK-3P/HDAC6,保護(hù)缺血性腦損傷。
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R743.3

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本文編號(hào)：2517517