【摘要】：目的建立蛛網(wǎng)膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage, SAH)Sprague-Dawley(SD)大鼠模型,采用避暗試驗(yàn)方法測試SAH模型大鼠學(xué)習(xí)記憶功能,檢測突觸素(Synaptophysin, P38)在SAH模型大鼠海馬中表達(dá),探討P38與學(xué)習(xí)記憶之間的關(guān)系。方法1. SAH SD大鼠模型建立與學(xué)習(xí)記憶性研究健康雄性SD大鼠120只,隨機(jī)分為空白對(duì)照組,SAH模型假手術(shù)組,SAH模型組,SAH模型組分1d組,7d組,30d組等3個(gè)亞組,模型組手術(shù)注入取自自身尾動(dòng)脈血液,假手術(shù)組進(jìn)行同樣手術(shù),注入生理鹽水代替血液,3組大鼠同環(huán)境飼養(yǎng)。觀察大鼠行為學(xué)改變,采用避暗試驗(yàn)方法記錄每只大鼠實(shí)驗(yàn)潛伏期(latentperiod, LT)以及來回穿梭次數(shù)(EN),研究學(xué)習(xí)記憶能力。2.研究各個(gè)實(shí)驗(yàn)組海馬組織中P38的表達(dá)并探討與學(xué)習(xí)記憶的關(guān)系各實(shí)驗(yàn)組大鼠均采用單籠飼養(yǎng),飼養(yǎng)環(huán)境相同,避暗試驗(yàn)檢測后,無痛處死。SAH模型組每亞組于1d,7d,30 d時(shí)行避暗實(shí)驗(yàn)后無痛處死大鼠,模型組每亞組取大鼠n=24只,假手術(shù)組及空白對(duì)照組取n=24只；檢測P38mRNA及蛋白表達(dá)。模型實(shí)驗(yàn)組大鼠2/3用乙醚麻醉斷頭,無RNA酶試驗(yàn)臺(tái)內(nèi)快速取出海馬,并液氮冷藏后迅速移至-80℃冰箱備用,另1/3經(jīng)吸入乙醚后用4%多聚甲醛灌注、蔗糖梯度脫水后,應(yīng)用OTC(Sakura,USA)包埋固定,-80℃冰箱保存以備組織切片用。應(yīng)用免疫組化、RT-PCR和Western blot等技術(shù)方法研究SAH模型大鼠海馬P38mRNA及相關(guān)蛋白的表達(dá)并探討與學(xué)習(xí)記憶的關(guān)系。結(jié)果1.SAH模型大鼠制作成功后大鼠有認(rèn)知改變表現(xiàn)模型制作成功率為97.3%�？瞻捉M大鼠避暗試驗(yàn)結(jié)果LT為(53.00±3.74s)、EN為(3.55±1.51次)；假手術(shù)組避暗試驗(yàn)結(jié)果LT為(53.14±3.11s)、EN為(3.55±1.51次)；模型組：模型成功后1d組避暗試驗(yàn)結(jié)果的LT為(37.86±3.57s)、EN為(5.71±0.49次)；SAH模型7d組避暗試驗(yàn)結(jié)果為LT(44.51±1.28s)、EN為(4.35±1.19次)；SAH模型30d組避暗試驗(yàn)結(jié)果(51.73±3.62s)、EN為(3.89±1.07次)；SAH模型組大鼠與對(duì)照組比學(xué)習(xí)記憶能力明顯下降(P0.05或P0.01),組間對(duì)比,模型組大鼠1d、7d、30d組認(rèn)知功能逐漸增強(qiáng),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05或P0.01),但均較正常組差,比值均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P0.01)。2.分子生物學(xué)檢測顯示(1)免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果：假手術(shù)組P38免疫陽性細(xì)胞數(shù)與空白對(duì)照組之間無顯著差異；SAH模型組P38免疫陽性細(xì)胞數(shù)與空白對(duì)照組、假手術(shù)組均有明顯差異性(P0.01)；且SAH模型1d組P38免疫陽性細(xì)胞數(shù)明顯低于SAH模型30d組(P0.01)。(2)RT-PCR結(jié)果：紫光燈下,Marker的目的條帶清晰可見,通過測定各條帶P38的相對(duì)光密度值與內(nèi)參的比值的比較,假手術(shù)組P38mRNA表達(dá)與空白對(duì)照組之間無顯著差異；與假手術(shù)組相比,SAH模型組P38mRNA表達(dá)顯著降低(P0.01);且SAHld組、SAH7d組和SAH30d組P38mRNA表達(dá)呈遞增趨勢,三組之間差異有顯著性(P0.01)。(3) Western blot結(jié)果：各組大鼠海馬組織中均有P38蛋白表達(dá),在標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子參照物Marker的對(duì)照下,通過測定各目的條帶的光密度值,與管家基因蛋白比值比較,假手術(shù)組P38蛋白表達(dá)與空白對(duì)照組之間無顯著差異；SAH模型組P38蛋白表達(dá)與假手術(shù)組相比顯著降低(P0.05或P0.01)；且SAH1d組、SAH7d組和SAH30d組P38蛋白表達(dá)呈遞增趨勢,三組之間差異有顯著性(P0.05或P0.01)結(jié)論1.蛛網(wǎng)膜下腔出血可使大鼠學(xué)習(xí)記憶認(rèn)知功能受損。2.蛛網(wǎng)膜下腔出血大鼠海馬組織中P38表達(dá)的變化可能是其學(xué)習(xí)記憶受損的分子機(jī)制之一。
文內(nèi)圖片：
圖片說明： 邐新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院碩±學(xué)位論文邐逡逑２結(jié)果逡逑２．１免疫組織化學(xué)結(jié)果與分析；Ｐ３８蛋白為胞質(zhì)蛋白著色為棟黃色。假手術(shù)組Ｐ３８免逡逑疫陽性細(xì)胞數(shù)與空白對(duì)照組之間無顯著差異；ＳＡＨ模型組Ｐ３８免疫陽性細(xì)胞數(shù)與空逡逑白對(duì)照組、假手術(shù)組均有明顯差異性（尸＜０．０１）；且ＳＡＨ模型Ｉｄ組Ｐ３８免疫陽性細(xì)逡逑胞數(shù)明顯低于ＳＡＨ模型３０ｄ組（b6＜０．０１），，見圖２、圖３。逡逑護(hù)’斯，可丫
文內(nèi)圖片：
圖片說明： 邐新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院碩±學(xué)位論文邐逡逑２結(jié)果逡逑２．１免疫組織化學(xué)結(jié)果與分析；Ｐ３８蛋白為胞質(zhì)蛋白著色為棟黃色。假手術(shù)組Ｐ３８免逡逑疫陽性細(xì)胞數(shù)與空白對(duì)照組之間無顯著差異；ＳＡＨ模型組Ｐ３８免疫陽性細(xì)胞數(shù)與空逡逑白對(duì)照組、假手術(shù)組均有明顯差異性（尸＜０．０１）；且ＳＡＨ模型Ｉｄ組Ｐ３８免疫陽性細(xì)逡逑胞數(shù)明顯低于ＳＡＨ模型３０ｄ組（b6＜０．０１），見圖２、圖３。逡逑護(hù)’斯，可丫
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R743.35


本文編號(hào)：2515548