發(fā)布時間：2019-06-20 15:35

【摘要】：目的：探討利用含川芎嗪的玻璃化凍存液凍存的大鼠異體神經(jīng)與神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）聯(lián)合移植治療大鼠坐骨神經(jīng)長節(jié)段缺損的作用和機(jī)制。方法：（1）分離、培養(yǎng)、純化并AD-GFP轉(zhuǎn)染來自新生SD大鼠大腦皮層的NSCs。（2）將24只成年Wistar大鼠的雙側(cè)坐骨神經(jīng)截取1.5cm長節(jié)段，共得48條神經(jīng)段，隨機(jī)分為兩組凍存，即含川芎嗪的玻璃化凍存液-196℃凍存3周（供C組用），和不含川芎嗪的玻璃化凍存液-196℃凍存3周（供B組用）。（3）將72只成年SD大鼠（雌雄不限）統(tǒng)一制作為右側(cè)1.5cm坐骨神經(jīng)缺損模型，然后隨機(jī)分為A、B、C三組，每組24只：C組（實(shí)驗(yàn)組）：將含川芎嗪玻璃化凍存液凍存后的大鼠異體坐骨神經(jīng)端端縫合到大鼠一側(cè)坐骨神經(jīng)1.5厘米缺損模型上，并通過微量注射器行神經(jīng)外膜下注射濃縮的基因修飾NSCs。A組（對照組）：將切下的坐骨神經(jīng)倒轉(zhuǎn)后原位端端縫合，于神經(jīng)外膜下注射相同體積生理鹽水。B組（對照組）：將單純普通凍存液凍存后的大鼠異體坐骨神經(jīng)端端縫合到大鼠缺損坐骨神經(jīng)上，于神經(jīng)外膜下注射相同體積神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)液。（4）術(shù)后2、4、8、12周觀察大鼠的坐骨神經(jīng)功能恢復(fù)指數(shù)（SFI）、坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度（NCV）、小腿三頭肌濕重比（患側(cè)/健測）、移植神經(jīng)橫斷面髓鞘面積比例、移植神經(jīng)段組織學(xué)觀察。（5）數(shù)據(jù)采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)分析，圖片采用IPP圖像分析軟件分析，各組間比較采用方差分析及LSD法，結(jié)果以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，P0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：（1）NSCs生長分化良好，可傳代至10代以上，行AD-GFP轉(zhuǎn)染后轉(zhuǎn)染率高達(dá)95%以上；（2）術(shù)后12周SFI：A組為-64.89±4.76，B組為-73.22±3.21，C組為-69.31±2.13，A、B、C三組間比較F=9.36，p=0.0020.05，A組C組B組；術(shù)后12周NCV：A組為19.72±1.61，B組為16.91±0.48，C組為18.27±0.78，A、B、C三組間比較F=10.36，p=0.0010.05，A組C組B組。小腿三頭肌濕重比（患側(cè)/健測）：A組為0.68±0.08，B組為0.57±0.05，C組為0.65±0.05，A、B、C三組間比較0.65±0.05，A組、C組B組，A組、C組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。移植神經(jīng)橫斷面髓鞘面積比例：A組為45.66±1.28，B組為36.47±1.33，，C組為41.85±1.39，A、B、C三組間比較F=71.58，p=0.000.05，A組C組B組。C組（實(shí)驗(yàn)組）移植神經(jīng)段熒光顯微鏡觀察可見Ad-GFP轉(zhuǎn)染的神經(jīng)干細(xì)胞存活并分化為神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，A、B組移植神經(jīng)段熒光顯微鏡下未見熒光。移植神經(jīng)段大體觀察A組及C組橋接神經(jīng)直徑較B組更接近原坐骨神經(jīng)，且神經(jīng)外膜血管生長跨過橋接神經(jīng)吻合口，2、4、8周組相較無顯著性差異。結(jié)論：1、新生SD大鼠大腦皮層組織能提取、培養(yǎng)與傳代大量神經(jīng)干細(xì)胞，并能在EGF、bFGF、B27緩慢消耗的情況下分化為多種功能細(xì)胞。經(jīng)AD-GFP病毒轉(zhuǎn)染后，神經(jīng)干細(xì)胞傳代及分化未受影響；2、神經(jīng)干細(xì)胞可與含川芎嗪的玻璃化凍存液凍存的異體坐骨神經(jīng)在受體大鼠體內(nèi)共存并分化成神經(jīng)元細(xì)胞及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)，減輕肌萎縮；3、含川芎嗪的玻璃化凍存液凍存的異體神經(jīng)與NSCs聯(lián)合移植可促進(jìn)大鼠坐骨神經(jīng)缺損的修復(fù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R745

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2503337