【摘要】：目的：通過(guò)制備大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞(Middle cerebral artery occlusion, MCAO)線栓模型,探討無(wú)創(chuàng)性肢體遠(yuǎn)隔缺血后適應(yīng)(Remote ischemic postconditioning,RPC)對(duì)大鼠急性期腦缺血損傷是否具有保護(hù)作用。并進(jìn)一步探討RPC對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷后近期及遠(yuǎn)期神經(jīng)功能恢復(fù)影響及TLR4-MyD88信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在RPC中的作用機(jī)制。為腦梗死的特異性治療提供新的思路。 方法：本實(shí)驗(yàn)分三步進(jìn)行,第一部分,建立穩(wěn)定的大鼠MCAO線栓模型,證明無(wú)創(chuàng)性遠(yuǎn)隔缺血后適應(yīng)對(duì)缺血腦組織的保護(hù)作用。90只健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠(250g-300g),隨機(jī)分為5組,每組18只：(1)假手術(shù)組(sham組);(2)缺血2h再灌注組(ischemic reperfusion,I/R組)；(3)缺血原位后適應(yīng)組(ischemic postconditioning,IP組)；(4)缺血即刻后適應(yīng)組(remote ischemic postconditioning at beginning of ischemic, I-RPC組)；(5)再灌注即刻后適應(yīng)組(remote ischemic postconditioning at beginning of reperfusion, R-RPC組)。各組大鼠分別于再灌注后24h進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分,采用TUNEL法測(cè)凋亡細(xì)胞、干濕稱重法測(cè)腦含水量、TTC染色拍照、Image-ProPlus軟件分析,計(jì)算腦梗死體積,IHE染色光鏡觀察形態(tài)學(xué)。第二部分,通過(guò)建立穩(wěn)定的大鼠MCA02h線栓模型,探討反復(fù)遠(yuǎn)隔缺血后適應(yīng)對(duì)大鼠腦缺血15天內(nèi)神經(jīng)功能恢復(fù)情況的影響。將成年健康雄性SD大鼠90只,隨機(jī)分為3組,每組30只,各組大鼠根據(jù)時(shí)間不同(1d、3d、6d、10d、15d)各分為5個(gè)亞組,每亞組6只：(1)假手術(shù)組(sham組)；(2)缺血2h再灌注組(I／R組)；(3)遠(yuǎn)隔缺血后適應(yīng)組(RPC組)。于相應(yīng)天數(shù)時(shí)間點(diǎn)(1d、3d、6d、10d、15d)行無(wú)創(chuàng)性RPC完畢后6h進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分,神經(jīng)功能評(píng)分完畢后處死大鼠,采用TUNEL法對(duì)海馬細(xì)胞進(jìn)行凋亡檢測(cè),免疫組化法檢測(cè)hs-CRP。第三部分,在證實(shí)遠(yuǎn)隔缺血后適應(yīng)腦保護(hù)作用的基礎(chǔ)上,探討其可能機(jī)制。72只健康雄性SD大鼠(體重250g-300g)隨機(jī)分為缺血再灌注組(I/R組,n=24)；遠(yuǎn)隔缺血后適應(yīng)組(RPC組,n=24)；假手術(shù)組(sham組,n=24)。各組分為12h、24h、48h、72h4個(gè)時(shí)間點(diǎn)組(n=6)。HE染色觀察海馬病理學(xué)變化；使用免疫組織化學(xué)染色和免疫印跡法檢測(cè)海馬區(qū)TLR4蛋白的表達(dá),原位雜交法測(cè)定海馬區(qū)TLR4mRNA的表達(dá)。免疫組織化學(xué)染色測(cè)定海馬區(qū)MyD88、NF-κB、hs-CRP、IL-6的表達(dá)。 結(jié)果： (1)與對(duì)照組相比,IP組、I-IPC組、R-RPC組大鼠凋亡細(xì)胞水平、腦水腫程度、腦梗死體積、再灌注24h神經(jīng)系統(tǒng)評(píng)分、病理改變程度均明顯降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)；但I(xiàn)P組、I-IPC組、R-RPC組3組之間兩兩對(duì)比無(wú)顯著性差異(P0.05)。 (2)I/R組與RPC組評(píng)分高于Sham組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05); RPC組各時(shí)間點(diǎn)NSS評(píng)分較工/R組低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)； (3)HE染色Sham組大鼠海馬結(jié)構(gòu)清晰,神經(jīng)元形態(tài)正常,排列整齊、層次分明；I／R組大鼠海馬結(jié)構(gòu)松散,神經(jīng)元缺失明顯,可見(jiàn)較多神經(jīng)元胞體縮小、核固縮深染,也有胞體腫脹、胞漿內(nèi)形成空泡的神經(jīng)元以及小片狀壞死區(qū)域；RPC組神經(jīng)元缺失、細(xì)胞腫脹較I/R組明顯減輕,細(xì)胞形態(tài)趨于改善。 (4) Sham組海馬區(qū)各時(shí)間點(diǎn)TLR4蛋白、TLR4mRNA、MyD88和NF-κB表達(dá)水平均較低。I/R組與RPC組水平較Sham組明顯增高(P0.05)。RPC組TLR4蛋白、TLR4mRNA和MyD88、NF-κ B陽(yáng)性表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)均低于I/R組(P0.05)。 (5) Sham組海馬區(qū)各時(shí)間點(diǎn)hs-CRP和IL-6僅有少量表達(dá),I/R組與RPC組hs-CRP和IL-6表達(dá)較Sham組明顯增高(P0.05), RPC組hs-CRP和IL-6陽(yáng)性表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)均低于I/R組(P0.05)。 結(jié)論：無(wú)創(chuàng)性肢體遠(yuǎn)隔缺血后適應(yīng)同大腦原位缺血后適應(yīng)一樣可以減少大鼠急性缺血腦梗死體積,減輕腦水腫,能夠改善大鼠腦缺血15天內(nèi)神經(jīng)功能缺損程度,對(duì)大鼠急性腦缺血具有神經(jīng)保護(hù)作用,其機(jī)制可能與下調(diào)TLR4-MyD88信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、抑制炎癥細(xì)胞因子釋放有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R743.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2496453