【摘要】：背景： 星形膠質(zhì)細(xì)胞的凋亡起在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷,如腦缺血、阿爾茨海默氏癥和帕金森氏癥，起著至關(guān)重要的作用。小分子蛋白Sulfiredoxin-1(Srxn1),屬于保守的內(nèi)源性Sulfiredoxin抗氧化家族的成員，具有神經(jīng)保護(hù)作用，，可能與抗氧化和抗凋亡有關(guān)。然而, Srxn1在腦缺血損傷中的抗凋亡機(jī)制還沒有得到充分深入的研究。 目的： 探討Sulfiredoxin-1對OGD/H2O2誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞氧化損傷后細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。 方法： （1）應(yīng)用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)將短發(fā)卡Srxn1（sh-Srxn1）基因干擾載體及陰性載體瞬時轉(zhuǎn)染至星膠細(xì)胞中，OGD作用于轉(zhuǎn)染細(xì)胞6h或100μM H2O2作用于轉(zhuǎn)染細(xì)胞6h以模擬氧化應(yīng)激損傷模型。 （2）運用MTS和LDH測定細(xì)胞活性和細(xì)胞損傷程度。 （3）用免疫細(xì)胞化學(xué)Hoechst33342和流式細(xì)胞術(shù)AV/PI雙染檢測細(xì)胞凋亡率。 （4）激光共聚焦JC-1探針和Fluo-3,AM探針分別檢測線粒體膜電位（Δψm）及細(xì)胞內(nèi)游離Ga2+變化。 （5）Western blot檢測Srxn1、cyt.c、caspase-9、caspase-3、PARP、bax、bcl-2、caspase-12的蛋白水平，QPCR檢測Srxn1的mRNA水平。 結(jié)果： （1）MTS和LDH顯示，干擾Srxn1后，細(xì)胞活性明顯下降，細(xì)胞損傷明顯加重（p0.05，p0.01）。 （2）Hoechst33342及流式AV/PI檢測顯示，干擾Srxn1后，細(xì)胞凋亡顯著增加（p0.01）。 （3）JC-1探針顯示，干擾Srxn1后，線粒體膜電位（Δψm）明顯下降（p0.01）。 （4）Western blot檢測結(jié)果提示，干擾Srxn1后，細(xì)胞的Cyt.C、caspase-9、caspase-3、PARP、bax蛋白水平表達(dá)明顯升高，bcl-2的表達(dá)顯著降低（p0.05，p0.01），而細(xì)胞內(nèi)caspase-12的表達(dá)無明顯改變（p0.05）。 （5）Fluo-3,AM探針顯示，干擾Srxn1后，細(xì)胞內(nèi)游離Ga2+無明顯改變（p0.05）。 結(jié)論： Srxn1能通過抗凋亡的途徑來保護(hù)大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞抵御OGD以及H2O2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷，且此保護(hù)作用與線粒體凋亡通路相關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R743

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本文編號：2488867