【摘要】：第一部分血流動力學改變對micro RNA-143表達的影響研究目的:本文旨在通過建立不同的血流動力學模型,初步探討血流動力學改變對micro RNA-143表達的影響,為探索顱內(nèi)動脈瘤發(fā)病機制、尋找潛在的藥物治療方法提供線索。研究方法:SD大鼠90只(180-200g),隨機分為實驗組A(n=24)、實驗組B(n=24)、實驗組C(n=24)及對照組(n=18)。通過顯微外科技術(shù)建立三種不同的血流動力學模型:A組:結(jié)扎SD大鼠左側(cè)頸外動脈起始部及枕動脈、左側(cè)翼顎動脈、右側(cè)頸總動脈末端;B組:結(jié)扎SD大鼠左側(cè)頸外動脈起始部及枕動脈、右側(cè)頸總動脈末端;C組:結(jié)扎SD大鼠右側(cè)頸總動脈末端。對照組不做任何干預。通過彩色多普勒超聲儀測定各組大鼠在術(shù)前、術(shù)后1天、術(shù)后1月、術(shù)后3月左側(cè)頸總動脈末端血流流速。獲取實驗組(A、B、C組)及對照組(n=18)在術(shù)后1天(A:n=6,B:n=6,C:n=6)、術(shù)后1月(A:n=6,B:n=6,C:n=6)、術(shù)后3月(A:n=6,B:n=6,C:n=6)大鼠左側(cè)頸總動脈血管標本,標本取出后立即放入RNALater中以避免RNA的降解。通過Realtime-PCR技術(shù)測定上述不同時間點大鼠左側(cè)頸總動脈mi R-143的表達。研究結(jié)果:A組:左側(cè)頸總動脈流速在術(shù)后1天明顯低于術(shù)前(p0.001),術(shù)后1月較1天升高(p=0.027),術(shù)后3月較1月無明顯差異。左側(cè)頸總動脈mi R-143在術(shù)后1天較對照組降低(p=0.005),術(shù)后1月較1天升高(p=0.04),術(shù)后3月較1月降低(p=0.003)。B組:左側(cè)頸總動脈流速在術(shù)后1天較術(shù)前降低(p0.001),術(shù)后1月較1天升高(p=0.009),術(shù)后3月較1月無明顯差異。左側(cè)頸總動脈mi R-143在術(shù)后1天較對照組降低(p=0.001),術(shù)后1月較1天升高(p=0.02),術(shù)后3月較1月降低(p=0.01)。C組:左側(cè)頸總動脈流速在術(shù)后1天與術(shù)前相比無明顯差異,術(shù)后1月較1天升高(p=0.009),術(shù)后3月較1月無明顯差異。左側(cè)頸總動脈mi R-143在術(shù)后1天與對照組無明顯差異,術(shù)后1月較1天升高(p=0.01),術(shù)后3月較1月降低(p=0.001)。術(shù)后1天、1月、3月,A、B、C三組在術(shù)后同一時間點,大鼠左側(cè)頸總動脈末端血流流速均互不相同(p0.05)。Realtime-PCR結(jié)果顯示:術(shù)后1天:A、B、C三組大鼠左側(cè)頸總動脈mi R-143表達兩兩比較顯示A組B組C組(p0.05)。術(shù)后1月:A、B、C三組大鼠左側(cè)頸總動脈mi R-143表達兩兩比較顯示A組B組C組(p0.05)。術(shù)后3月:A、B、C三組大鼠左側(cè)頸總動脈mi R-143表達兩兩比較顯示A組B組C組(p0.05)。研究結(jié)論:結(jié)扎大鼠頸部血管,僅僅保留左側(cè)頸內(nèi)動脈向顱內(nèi)供血,可使左側(cè)頸總動脈血流流速降低最為顯著。在血流流速降低早期,血管壁mi R-143表達也降低。大鼠頸總動脈的血流動力學環(huán)境發(fā)生變化后,血管壁發(fā)生自適應(yīng)改變,其管壁mi R-143表達也發(fā)生相應(yīng)的變化。第二部分:Micro RNA-143對顱內(nèi)動脈瘤生成的影響研究目的:本文旨在研究單純血流動力學誘導的大鼠顱內(nèi)動脈瘤模型,其成瘤部位血管在不同時間點,mi R-143及平滑肌細胞表型的表達改變。以連續(xù)灌胃給藥辛伐他汀,研究其對成瘤部位血管mi R-143表達、平滑肌細胞表型及動脈瘤成瘤率的影響。研究方法:SD大鼠138只(180-200g),隨機分為動脈瘤組(n=48)、干預組(n=48)、空白組(n=42)。動脈瘤組:通過顯微外科技術(shù),結(jié)扎SD大鼠的右側(cè)頸總動脈末端、左側(cè)頸外動脈起始部和枕動脈、左側(cè)翼顎動脈,以此建立單純血流動力學誘導的大鼠顱內(nèi)動脈瘤模型;干預組:術(shù)前一天以20mg/kg辛伐他汀灌胃給藥,手術(shù)建模方式同動脈瘤組,術(shù)后1天至3月繼續(xù)每天以20mg/kg辛伐他汀給藥,每周稱量體重并據(jù)此調(diào)整給藥劑量;空白組:不做任何干預,常規(guī)飼養(yǎng)3個月。在術(shù)后1天、1月、3月分別取各組大鼠6只,將大鼠處死后對其左心室灌注生理鹽水至大鼠眼球、耳朵、嘴唇呈蒼白色,剪斷頸椎并咬除頂骨,顯微鏡下小心取下Willis環(huán)血管并放入RNALater中以避免RNA的降解,通過Realtime-PCR技術(shù)測定上述不同時間點大鼠Willis環(huán)血管mi R-143的表達。同時,術(shù)后1天、1月、3月另取6只大鼠以同樣的方法灌注生理鹽水后繼續(xù)灌注多聚甲醛,對獲取的顱腦組織進行包埋、切片,通過免疫組化染色檢測前交通復合體血管MMP-2、MMP-9、a-SMA表達。由于顱內(nèi)動脈瘤成瘤需要3個月,因此術(shù)后3月取動脈瘤組和干預組各12只,空白組6只,處死并通過左心室灌注Batson’s#17鑄型劑,灌注后的大鼠標本保存于4℃冰箱,24小時后取出顱腦標本,通過20%KOH溶液溶解腐蝕12小時,得到術(shù)后3月各組大鼠腦血管灌注鑄型樹脂標本。通過掃描電鏡技術(shù)觀察各組大鼠腦血管灌注樹脂標本并評估動脈瘤樣改變。動脈瘤的瘤樣改變程度分為四個等級:0級:正常的血管鑄型;1級:血管管徑均勻擴張、迂曲;2級:淺梭樣抬高;3級:囊狀或局部動脈瘤樣擴張。研究結(jié)果:術(shù)后1天:干預組Willis環(huán)mi R-143表達較動脈瘤組無明顯差異,動脈瘤組較空白組升高(p0.001);MMP-2和MMP-9:干預組較動脈瘤組無明顯差異,動脈瘤組較空白組升高(p0.001);α-SMA:干預組較動脈瘤組及空白組均無明顯差異。術(shù)后1月:干預組Willis環(huán)mi R-143表達較動脈瘤組升高(p=0.001),動脈瘤組較空白組降低p=0.002);MMP-2和MMP-9:干預組較動脈瘤組降低(p0.001),動脈瘤組較空白組升高(p0.001);α-SMA:干預組較動脈瘤組升高(p0.001),動脈瘤組較空白組無明顯差異。術(shù)后3月:干預組Willis環(huán)mi R-143表達較動脈瘤組升高(p=0.002),動脈瘤組較空白組降低(p0.001);MMP-2和MMP-9:干預組較動脈瘤組降低(p0.001),動脈瘤組較空白組升高(p0.001);α-SMA:干預組較動脈瘤組升高(p0.001),動脈瘤組較空白組無明顯差異。掃描電鏡結(jié)果分析顯示:干預組動脈瘤樣改變程度較動脈瘤組輕(p=0.045)(0級n=2,1級n=6,2級n=3,3級n=1),但干預組成瘤較空白組依然明顯(p0.001);動脈瘤組較空白組,顱內(nèi)動脈瘤成瘤明顯(p0.001)(0級n=0,1級n=3,2級n=6,3級n=3);空白組未見顱內(nèi)動脈瘤形成。研究結(jié)論:在動脈瘤形成過程中,顱內(nèi)Willis環(huán)mi R-143表達降低,平滑肌細胞分泌型表達增強。辛伐他汀可以上調(diào)顱內(nèi)Willis環(huán)mi R-143表達,提高平滑肌細胞收縮型表達,抑制平滑肌細胞分泌型表達,從而可以抑制血流動力學誘導的顱內(nèi)動脈瘤的生成,但不能完全抑制。
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【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R743
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本文編號：2486037