【摘要】：目的：觀察青蒿琥酯（Ast）對實驗性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）的防治作用并探討其作用機制。方法：將50只Wistar雌性大鼠隨機分成5組：正常對照組、EAE對照組及Ast大劑量、中劑量、小劑量組。用新鮮豚鼠脊髓勻漿（GPSCH）與含卡介苗(BCG)的完全福氏佐劑（CFA）建立EAE模型。自造模當日起連續(xù)10天，Ast大、中、小劑量組分別給予Ast20mg/(kg.d)、10mg/(kg.d)、5mg/(kg.d)進行干預(yù)。于EAE大鼠發(fā)病高峰期（大鼠神經(jīng)功能障礙評分連續(xù)三天無增加或大鼠處于瀕死狀態(tài)、對外界刺激無反應(yīng)或死亡）終止實驗，已經(jīng)注入免疫抗原進行EAE造模處理而未發(fā)病大鼠及正常對照組大鼠分別均于觀察1個月后處死。對大鼠進行神經(jīng)功能障礙評分，將中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）切片于蘇木素-伊紅（HE）染色后行病理觀察并根據(jù)Okuda等的標準進行評分，予免疫組織化學(xué)檢測腦組織中前列腺素E2（PGE2）及酪氨酸蛋白激酶A4（EphA4）、多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1（PARP-1）的表達情況，用ImagePro Plus軟件對PGE2、EphA4、PARP-1的表達進行平均光密度值(OD值)測定，予放射免疫法和雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）分別測定腦組織中TNF-及IL-17含量，并采用放射免疫法測定血清中IL-2、IL-4含量，使用spss17.0軟件對所獲得的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果：（1）臨床情況：①正常對照組大鼠未發(fā)病。與EAE對照組相比，Ast各劑量組EAE發(fā)病率均下降（P0.05），但Ast大、中劑量組間發(fā)病率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。②與EAE對照組相比，Ast各劑量組EAE發(fā)病潛伏期均延長(P0.05)，以大劑量組潛伏期延長最明顯。③與EAE對照組相比，，Ast各劑量組EAE疾病進展期均縮短，且隨Ast劑量增加，進展期越短，各組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。④與EAE對照組相比，Ast各劑量組神經(jīng)功能障礙評分均降低，以Ast大劑量組最為明顯，且各組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。（2）HE染色病理學(xué)觀察情況：正常對照組大鼠腦組織內(nèi)未見炎性細胞浸潤。EAE對照組及Ast各劑量組腦組織小血管周圍均可見不同程度炎性細胞浸潤，典型者大量淋巴細胞及單核細胞聚集于血管周圍呈袖套樣改變。按Okuda等的標準進行評分，與EAE對照組相比，Ast各劑量組評分均有下降(P0.05)，且隨Ast劑量增加EAE大鼠腦組織病理學(xué)評分依次降低，各劑量組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。（3）EAE對照組及Ast各劑量組免疫組織化學(xué)結(jié)果：①與正常對照組相比，EAE對照組及Ast各劑量組PGE2含量均明顯升高（P0.05）。與EAE對照組相比，Ast各劑量組PGE2含量均減少（P0.05），且隨Ast劑量的增加PGE2含量依次下降，各劑量組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。②正常對照組未見EphA4的表達，EAE對照組與Ast各劑量組均可見EphA4表達，尤以EAE對照組明顯。與EAE對照組相比，Ast各劑量組EphA4表達均減少，且隨Ast劑量增加EphA4表達呈下降趨勢，各劑量組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。③與正常對照組相比，EAE對照組PARP-1表達減少，而Ast各劑量組PARP-1表達上調(diào)（P0.05）。與EAE對照組相比，Ast各劑量組PARP-1表達均增多（P0.05），以大劑量組增多最明顯，且Ast各劑量組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。（4）EAE對照組及Ast各劑量組腦組織內(nèi)TNF-及IL-17含量變化：①EAE對照組及Ast各劑量組腦組織內(nèi)TNF-含量較正常對照組均增加，但Ast大劑量組與正常對照組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。與EAE對照組相比，Ast各劑量組TNF-含量均減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05），且隨Ast劑量增加，大鼠腦組織TNF-含量減少越明顯（P0.05）。②與正常對照組相比，EAE對照組和Ast各劑量組IL-17含量均明顯升高（P0.05）。與EAE對照組相比，Ast各劑量組IL-17含量均下降，且隨Ast劑量的增加IL-17含量下降越明顯，各組間差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。（5）EAE對照組及Ast各劑量組血清中IL-2、IL-4含量變化：①與正常對照組相比，EAE對照組及Ast各劑量組血清中IL-2含量均升高（P0.05）。與EAE對照組比較，Ast各劑量組IL-2含量均減低（P0.05）。隨Ast劑量的增加Ast各劑量組IL-2含量依次下降，但大、中劑量組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。②Ast各劑量組IL-4含量較正常對照組升高，而EAE對照組IL-4含量較正常對照組下降，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。與EAE對照組比較，Ast各劑量組IL-4含量均升高（P0.05），且隨Ast劑量的增加Ast各劑量組IL-4含量依次上升，各組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。（6）相關(guān)性分析：①EAE對照組及Ast各劑量組發(fā)病潛伏期與大鼠腦組織內(nèi)PGE2、EphA4、TNF-a和IL-17含量及血清中IL-2含量呈負相關(guān)（P0.01或P0.05），與腦組織內(nèi)PARP-1含量和血清中IL-4含量呈正相關(guān)（P0.01或P0.05）。②EAE對照組及Ast各劑量組發(fā)病進展期與大鼠腦組織內(nèi)PGE2、EphA4、TNF-a和IL-17含量及血清中IL-2含量呈正相關(guān)（P0.01或P0.05），與腦組織內(nèi)PARP-1含量和血清中IL-4含量呈負相關(guān)（P0.01或P0.05）。③EAE對照組及Ast各劑量組發(fā)病高峰期大鼠神經(jīng)功能障礙評分與大鼠腦組織內(nèi)PGE2、EphA4、TNF-a和IL-17含量及血清中IL-2含量呈正相關(guān)（P0.01或P0.05），與腦組織內(nèi)PARP-1含量和血清中IL-4含量呈負相關(guān)（P0.01或P0.05）。結(jié)論：1.PGE2及EphA4在EAE大鼠發(fā)病過程中含量均升高，PARP-1含量下降，PGE2、EphA4和PARP-1含量均與發(fā)病潛伏期、進展期以及發(fā)病高峰期大鼠神經(jīng)功能障礙評分密切相關(guān)，提示PGE2、EphA4及PARP-1在EAE疾病發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。2.TNF-a、IL-17及IL-2在EAE大鼠發(fā)病過程中含量均上升，IL-4含量下降，TNF-a、IL-17、IL-2和IL-4含量均與發(fā)病潛伏期、進展期及發(fā)病高峰期大鼠神經(jīng)功能障礙評分密切相關(guān)，提示TNF-a、IL-17、IL-2及IL-4在EAE疾病的病情衍變過程中具有重要作用。3.不同劑量組Ast均可不同程度降低EAE大鼠的發(fā)病率，延長發(fā)病潛伏期，縮短疾病進展期，降低疾病高峰期神經(jīng)功能障礙評分，改善EAE大鼠腦組織病理學(xué)改變，提示Ast對EAE大鼠發(fā)病可能具有防治作用，且防治作用與劑量相關(guān)。4.Ast對EAE大鼠發(fā)病具有防治作用所涉及的機制可能包括抑制PGE2和EphA4的產(chǎn)生，減少TNF-、IL-17和IL-2的分泌以及上調(diào)PARP-1的表達，增加IL-4的合成。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R744.3

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本文編號：2477122