【摘要】：目的通過建立大鼠局灶性缺血模型，檢測肢體遠(yuǎn)端缺血后處理聯(lián)合電針刺激對大鼠腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)功能障礙評分，梗死體積，細(xì)胞凋亡及氧化應(yīng)激等方面的影響；并觀察肢體遠(yuǎn)端缺血后處理的腦保護(hù)效應(yīng)與PI3K/Akt信號(hào)通路的潛在關(guān)系，初步探討遠(yuǎn)端缺血后處理對腦缺血保護(hù)的相關(guān)機(jī)制，為臨床上聯(lián)合運(yùn)用兩種方法提供理論依據(jù)。 方法 第一部分90只雄性大鼠分為5組：假手術(shù)組（S）,缺血/再灌注組（I/R）,遠(yuǎn)端缺血后處理組(RIP),電針刺激組（EA），聯(lián)合治療組（COM）,每組18只。采用線栓法建立局灶性腦缺血再灌注（MCAO）模型，恢復(fù)再灌24h后測定神經(jīng)功能缺陷評分(NDS)，行TTC染色測量腦梗死體積百分比，尼氏染色觀察神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)變化及存活神經(jīng)元密度，免疫組化染色比較各組Bcl-2,Bax的表達(dá)，并測量MDA含量和SOD活性。 第二部分90只雄性大鼠分為5組：假手術(shù)組（S）,缺血/再灌注組（I/R）, Akt抑制劑組(LY)，NCX3抑制組（SI），每組18只。采用線栓法建立局灶性腦缺血再灌注（MCAO）模型，恢復(fù)再灌24h后測定神經(jīng)功能評分(NBS)，行TTC染色測量腦梗死體積百分比，尼氏染色觀察神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)變化及存活神經(jīng)元密度，并測量MDA含量和SOD活性。最后再用western blot方法檢測各組Akt，p-Akt，NCX3蛋白含量的表達(dá)情況。 結(jié)果 第一部分 ①再灌注24h后，與S組比較，各組的NBS均高于S組（P0.05）,梗死體積增大，存活神經(jīng)元密度均降低（P0.05）。 ②與I/R組比較，EA組,RIP組及COM組的梗死體積百分比均低于I/R組（P0.05），而存活神經(jīng)元密度均增加（P0.05）；與EA組及RIP組比較，COM組的梗死體積百分比明顯低于EA組及RIP（P0.05），存活神經(jīng)元密度增加（P0.05）。 ③免疫組化結(jié)果：S組可見少量Bcl-2及Bax陽性細(xì)胞散在分布；I/R組可見大量Bax陽性細(xì)胞，而Bcl-2陽性細(xì)胞不明顯；與之相比，EA組，RIP組及COM組的Bcl-2陽性細(xì)胞明顯增高，Bax陽性細(xì)胞明顯減少（P0.05）；與EA組及RIP組比較，COM組的Bcl-2陽性細(xì)胞增加， Bax陽性細(xì)胞減少（P0.05）。 ④與S組比較，各組SOD活性均降低，MDA含量增加（P0.05）；與I/R組比較，EA組、RIP組及COM組的SOD活性均升高，MDA含量減少（P0.05）；與EA組、RIP組相比，COM組SOD活性進(jìn)一步增加，MDA含量減少（P0.05）。 第二部分 ①再灌注24h后，S組未見神經(jīng)功能損害；與I/R組相比，RIP組NDS評分降低，梗死體積減�。≒0.05）,存活神經(jīng)元密度增加（P0.05）；與RIP組比較，LY組及SI組的NDS評分增加，梗死體積也增加（P0.05）,而神經(jīng)元密度均降低（P0.05）。 ②與S組比較，各組SOD活性均降低，MDA含量增加（P0.05）；與I/R組比較，RIP組的SOD活性升高，MDA含量減少（P0.05）；與RIP組相比，LY組及SI組SOD活性降低，MDA含量增（P0.05）。 ③各組Akt蛋白的表達(dá)無明顯變化，與S組相比，I/R組p-Akt表達(dá)無明顯變化，而RIP組和SI組的p-Akt表達(dá)均增加（P0.05）；與RIP組比較，LY組p-Akt表達(dá)明顯下降（P0.05），而SI組p-Akt表達(dá)無明顯變化；與I/R組相比，RIP組的NCX3的表達(dá)明顯增加（P0.05），，而與RIP組比較，LY組和SI組的NCX3蛋白表達(dá)明顯降低（P0.05）。結(jié)論 ①肢體遠(yuǎn)端缺血后處理和電針刺激均可以通過減少腦梗死體積，增加神經(jīng)元的存活率，同時(shí)降低脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量，增加SOD活性從而減輕腦的缺血再灌注損傷。 ②聯(lián)合運(yùn)用肢體遠(yuǎn)端缺血后處理和電針刺激兩種方法后減輕腦缺血再灌注的效應(yīng)增強(qiáng)。 ③遠(yuǎn)短缺血后處理能夠激活A(yù)kt和NCX3，當(dāng)使用實(shí)驗(yàn)方法使這兩種蛋白表達(dá)分別被抑制后，遠(yuǎn)端缺血后處理對腦缺血再灌注的腦保護(hù)作用下降，表明這兩種蛋白參與了遠(yuǎn)短缺血后處理的腦保護(hù)機(jī)制。 ④Akt被抑制后，NCX3表達(dá)被抑制，而當(dāng)NCX3被抑制后，Akt磷酸化不受影響，表明NCX3是被Akt激活的，NCX3是PI3K/Akt通路下游的一個(gè)靶蛋白。因此遠(yuǎn)端缺血后處理的機(jī)制之一是通過PI3K/AKT通路上調(diào)NCX3的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。
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【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R743

【參考文獻(xiàn)】

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1 何建明;李玉蓉;韋英秀;胡宏波;尹琦;;急性腦梗死患者血管內(nèi)皮生長因子與自由基SOD、MDA的臨床研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年12期

本文編號(hào)：2466746