發(fā)布時間：2019-04-21 17:34

【摘要】：背景目前,腦梗死(cerebral infarction)是導(dǎo)致人類死亡和殘疾的危害人類健康的主要疾病之一。截至當(dāng)代,腦梗死造成的細(xì)胞損傷和死亡仍無確實有效的治療方法。一旦腦梗死的缺血損傷達到最大限度,就會導(dǎo)致不可逆的神經(jīng)功能損傷,恢復(fù)到發(fā)病前的狀態(tài)是非常困難的。即使是得到及時治療,許多患者仍存在永久性神經(jīng)功能缺失,遺留不同程度的殘疾。近年來,國內(nèi)外的研究人員研究發(fā)現(xiàn)多種治療方案,從溶栓治療到介入微創(chuàng)治療,從應(yīng)用多種藥物或中醫(yī)中藥等治療,都力求恢復(fù)腦梗死部位的血液供應(yīng),保護缺血半暗帶的腦組織。這些方法雖改善了患者的臨床癥狀,但因治療“時間窗”等諸多因素的制約,都沒能從根本上阻斷腦損傷的發(fā)生或者有效地促使受損腦組織再生。因此,受損腦組織的修復(fù)與神經(jīng)功能的恢復(fù)始終是人們追求的一種理想治療結(jié)果。實驗研究發(fā)現(xiàn),細(xì)胞移植通過其潛在的自我修復(fù)功能使受損組織得以新生。有鑒于此,研究人員把關(guān)注的焦點放在如何運用干細(xì)胞移植方法治療腦梗死。干細(xì)胞移植治療腦梗死,就是通過促進局部多種神經(jīng)營養(yǎng)因子的產(chǎn)生;這些因子能通過清除自由基,減低興奮性氨基酸的毒性作用等各種途徑發(fā)揮神經(jīng)保護作用,從而達到減少細(xì)胞凋亡的發(fā)生。通過促進血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、堿性成纖維因子(b FGF)等因子的產(chǎn)生而刺激血管新生,增強局部腦血流量而對抗缺血的損傷。因此,本實驗通過選取具有完整個體分化潛能的胚胎干細(xì)胞移植到腦梗死大鼠模型內(nèi),探討其在體內(nèi)增殖、分化情況及療效。目的探討神經(jīng)干細(xì)胞移植治療腦梗死大鼠神經(jīng)功能損傷的可行性及療效。方法用線栓法將成年雄性大鼠制成大腦中動脈腦梗死模型,模型成功后隨機分為實驗組25只和對照組25只,取孕15d胎鼠的大腦皮層和海馬區(qū)腦組織提取培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞,經(jīng)nestin表達陽性鑒定為神經(jīng)干細(xì)胞,實驗組經(jīng)尾靜脈注射1μL神經(jīng)干細(xì)胞懸液,對照組經(jīng)尾靜脈注射1μL生理鹽水,在移植后1d、3d、7d、14d、28d依據(jù)Garcia的18分評分法對各組大鼠的神經(jīng)功能進行評分,行腦灌注固定取材,通過免疫組織化學(xué)染色方法觀察移植后神經(jīng)干細(xì)胞的分化、遷移和整合情況。結(jié)果1.體外分離培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞在無血清培養(yǎng)液中形成大量的神經(jīng)球。經(jīng)3—5代傳代的細(xì)胞生長穩(wěn)定。經(jīng)nestin染色鑒定大部分為陽性細(xì)胞,神經(jīng)細(xì)胞球經(jīng)胎牛血清培養(yǎng)液貼壁培養(yǎng)后可分化為表達神經(jīng)元特異烯醇化酶(NSE),膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)、半乳糖腦苷脂(GALC)表達陽性的細(xì)胞。2.移植后大鼠神經(jīng)功能評分:缺血移植組大鼠的神經(jīng)功能評分與對照組比較顯著升高(P0.05);缺血移植組大鼠的神經(jīng)功能評分在28d較14d時顯著升高(P0.05)。結(jié)果顯示缺血移植組與對照組比較神經(jīng)功能評分顯著升高,結(jié)果有差異性,結(jié)果差異顯著(P0.05)。3.免疫熒光染色,行免疫組織化學(xué)染色能夠檢測到存活的Brdu陽性細(xì)胞,移植后28d可見移植細(xì)胞向周圍遷移、分化,參與血管形成,并可見梗死區(qū)邊緣血管明顯增生。實驗組大鼠GFAP陽性細(xì)胞計數(shù)較對照組明顯增多,結(jié)果差異顯著(P0.05)。結(jié)論1.從孕15天胎鼠大腦皮質(zhì)和海馬組織分離出的神經(jīng)干細(xì)胞具有自我更新能力和多向分化潛能,在5%的胎牛血清培養(yǎng)液下神經(jīng)干細(xì)胞具有向神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞分化的潛能。2.神經(jīng)干細(xì)胞移植后,在28d可見移植細(xì)胞向周圍遷移、分化,參與血管形成,并可見梗死區(qū)邊緣血管明顯增生。3.在體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞能在腦梗死大鼠腦內(nèi)存活、遷移和分化。4.在體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞移植到腦梗死后大鼠體內(nèi),并且對腦梗死大鼠的神經(jīng)功能修復(fù)起到了積極的作用。
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【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R743.3

【共引文獻】

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本文編號：2462412