【摘要】：目的:觀察缺氧缺糖性損傷條件下,血管內(nèi)皮細(xì)胞對氧化型低密度脂蛋白刺激易感性的考察,以及下游氧化應(yīng)激信號通路的調(diào)控機(jī)制。方法:將細(xì)胞分為正常對照組、氧糖剝奪(OGD)組6h、100μg/ml氧化型低密度脂蛋白o(hù)x-LDL處理24h組(ox-LDL組)、OGD 6h+100μg/ml ox-LDL刺激24h組(OGD+ox-LDL組),分別處理分離的大鼠腦血管內(nèi)皮細(xì)胞(RBECs)。Western blot檢測腦血管內(nèi)皮細(xì)胞小凹蛋白1(Cav-1)、凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體(LOX-1)變化,及考察下游氧化應(yīng)激MAPK信號通路和內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)。免疫熒光檢測RBECs中Dil細(xì)胞膜熒光標(biāo)記的ox-LDL(Dil-ox-LDL)熒光強(qiáng)度的變化。比色法和ELISA法檢測炎癥因子即一氧化氮(NO)、白細(xì)胞介素1β(IL-1β)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的表達(dá)。結(jié)果 :oxLDL刺激可對增加LOX-1表達(dá)和RBECs的Dil-ox-LDL熒光強(qiáng)度,并同時降低Cav-1表達(dá)。OGD組LOX-1表達(dá)和Dil-ox-LDL熒光強(qiáng)度相較于正常對照組無明顯增加,然而Cav-1表達(dá)有所降低,然而在OGD+ox-LDL組LOX-1表達(dá)和Dil-ox-LDL熒光強(qiáng)度增加,且相較于ox-LDL組,有顯著性差異。另外,除正常對照組外,各組RBECs均觀察到MAPK信號通路中p38、ERK1/2、JNK氧化應(yīng)激通路激活和NO、IL-1β、TNF-α炎癥因子釋放增加,并且OGD+ox-LDL組相較于OGD組、ox-LDL組均有顯著性差異。結(jié)論:RBECs在OGD和ox-LDL共同刺激條件下,對ox-LDL的刺激具有易感性,可在增加細(xì)胞內(nèi)Dil-ox-LDL熒光強(qiáng)度,并且誘導(dǎo)下游氧化應(yīng)激反應(yīng),機(jī)制可能與Cav-1調(diào)控氧化應(yīng)激反應(yīng)相關(guān),本研究可為以O(shè)GD細(xì)胞模型為代表的缺血性腦卒中等疾病相關(guān)脂質(zhì)代謝研究提供科學(xué)根據(jù)。
[Abstract]:Aim: to investigate the susceptibility of vascular endothelial cells to oxidative low density lipoprotein (LDL) stimulation and the regulation mechanism of downstream oxidative stress signaling pathway in hypoxic-glucose-deficient injury. Methods: the cells were divided into normal control group, oxygen glucose deprivation (OGD) group for 6 h, 100 渭 g / ml oxidized low density lipoprotein ox-LDL for 24 h group (ox-LDL group), OGD for 6 h 100 渭 g / ml ox-LDL for 24 h group (OGD ox-LDL group). (RBECs). Western blot of isolated rat cerebral vascular endothelial cells was used to detect the changes of Cav-1 and LOX-1 in rat cerebral vascular endothelial cells, which were divided into two groups, and the control group was divided into control group and control group, and the control group was divided into control group and control group (P < 0. 05). And investigate the downstream oxidative stress MAPK signaling pathway and endothelial nitric oxide synthase (eNOS). The fluorescence intensity of Dil cell membrane labeled ox-LDL (Dil-ox-LDL) in RBECs was detected by immunofluorescence. The expression of inflammatory factors (nitric oxide, (NO), interleukin 1 尾 (IL-1 尾) and tumor necrosis factor-偽 (TNF- 偽) was detected by colorimetric method and ELISA method. Results: oxLDL stimulation could increase the expression of LOX-1 and Dil-ox-LDL fluorescence intensity of RBECs, and decrease the expression of Cav-1 at the same time. Compared with the normal control group, the expression of LOX-1 and the fluorescence intensity of Dil-ox-LDL in OGD group did not increase significantly. However, the expression of Cav-1 decreased, but the expression of LOX-1 and the fluorescence intensity of Dil-ox-LDL increased in OGD ox-LDL group, and there was significant difference compared with ox-LDL group. In addition, except for the normal control group, p38, ERK _ (1) ~ (2), JNK oxidative stress pathway activation and NO,IL-1 尾, TNF- 偽 inflammatory factor release were observed in all groups of RBECs, and compared with OGD group, OGD ox-LDL group was higher than OGD group. There was significant difference in ox-LDL group. Conclusion: under the condition of co-stimulation of OGD and ox-LDL, RBECs is susceptible to the stimulation of ox-LDL, which can increase the fluorescence intensity of Dil-ox-LDL in cells and induce the downstream oxidative stress response. The mechanism may be related to the regulation of oxidative stress response by Cav-1. This study may provide a scientific basis for the study of lipid metabolism related to ischemic stroke such as ischemic stroke represented by OGD cell model.
【作者單位】： 南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部;南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院心血管科;
【基金】：江西省教育廳科學(xué)技術(shù)研究青年項目(No:GJJ160238) 江西省科技廳青年基金一般項目(No:20171BAB215021)
【分類號】：R743.3

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本文編號：2455614