【摘要】：目的研究PCBP2在大鼠坐骨神經(jīng)損傷過(guò)程中的表達(dá)變化、作用,分析PCBP2與雪旺細(xì)胞增殖之間的關(guān)系,探討PCBP2在周?chē)窠?jīng)損傷和修復(fù)過(guò)程中的作用機(jī)制,也為周?chē)窠?jīng)損傷的治療提供依據(jù)。方法1.選用健康成年雄性SD大鼠(220-275 g左右)54只,構(gòu)建大鼠坐骨神經(jīng)夾傷模型,根據(jù)損傷時(shí)間的不同,將大鼠隨機(jī)分為9組:正常組(假手術(shù)組)、6 h、12 h、1 d、3 d、5 d、1 w、2 w和4w。每組6只,其中3只用于組織切片,3只用于提取神經(jīng)組織蛋白,運(yùn)用Western Blot方法測(cè)定不同損傷時(shí)間點(diǎn)PCBP2的表達(dá)變化,初步確定PCBP2的表達(dá)在周?chē)窠?jīng)損傷后的變化趨勢(shì)。2.通過(guò)免疫組化的方法觀察PCBP2在周?chē)窠?jīng)損傷后相應(yīng)組織中的表達(dá)情況,通過(guò)免疫熒光雙標(biāo)方法分析PCBP2在坐骨神經(jīng)中的分布和細(xì)胞定位。3.篩選PCBP2干擾的雪旺細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株,在穩(wěn)轉(zhuǎn)株中驗(yàn)證干擾PCBP2后是否會(huì)影響FHL3、p21信號(hào)的表達(dá)。運(yùn)用流式細(xì)胞技術(shù)及CCK-8分析干擾PCBP2后對(duì)雪旺細(xì)胞增殖周期的影響。結(jié)果1.Western bolt結(jié)果顯示PCBP2蛋白水平在神經(jīng)損傷后3d開(kāi)始上調(diào),在7d達(dá)到高峰,在損傷后4w恢復(fù)到正常水平。2.免疫組化結(jié)果表明坐骨神經(jīng)夾傷后,神經(jīng)組織中的PCBP2陽(yáng)性率增強(qiáng);免疫熒光雙標(biāo)分析表明在坐骨神經(jīng)夾傷后,PCBP2主要表達(dá)于S100標(biāo)記的雪旺細(xì)胞中,與NF200標(biāo)記的軸突沒(méi)有共定位。此外,PCBP2與雪旺細(xì)胞增殖標(biāo)記物PCNA也有共定位。3.TNF-α誘導(dǎo)的雪旺細(xì)胞增殖模型中,PCBP2的表達(dá)逐漸增加,與細(xì)胞增殖標(biāo)記物PCNA的表達(dá)趨勢(shì)一致,但FHL3及p21的表達(dá)逐漸降低。流式細(xì)胞分析技術(shù)及CCK-8結(jié)果表明:干預(yù)PCBP2的表達(dá)能抑制雪旺細(xì)胞的增殖。4.雪旺細(xì)胞中干預(yù)PCBP2的表達(dá)后,FHL3及p21的表達(dá)增加,同時(shí)干預(yù)FHL3的表達(dá)后,p21的表達(dá)減少,并且免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)表明PCBP2與FHL3及p21有共同的定位。結(jié)論1.PCBP2的表達(dá)在急性損傷后3-5d明顯升高,4w恢復(fù)到正常水平。其表達(dá)主要定位在雪旺細(xì)胞中,在軸突中表達(dá)量較少,且與雪旺細(xì)胞的增殖相關(guān)。2.PCBP2調(diào)節(jié)雪旺細(xì)胞的增殖過(guò)程可能通過(guò)FHL3-p21信號(hào)通路完成。
[Abstract]:Objective to study the expression and effect of PCBP2 during sciatic nerve injury in rats, to analyze the relationship between PCBP2 and Schwann cell proliferation, and to explore the mechanism of PCBP2 in peripheral nerve injury and repair. It also provides the basis for the treatment of peripheral nerve injury. Method 1. 54 healthy adult male SD rats (220? 275g) were used to construct sciatic nerve injury model of rats. According to the different time of injury, the rats were randomly divided into 9 groups: normal group (sham-operated group), 6 h, 12 h, 1 d, 3 d, 6 h, 12 h, 1 d, 3 d, respectively. 5 d, 1 w, 2 w and 4 w. There were 6 rats in each group, of which 3 were used for tissue sections and 3 for extracting nerve tissue proteins. The expression of PCBP2 at different time points after injury was measured by Western Blot method, and the change trend of PCBP2 expression after peripheral nerve injury was preliminarily determined. 2. The expression of PCBP2 in the corresponding tissues after peripheral nerve injury was observed by immunohistochemical method, and the distribution and cellular localization of PCBP2 in sciatic nerve were analyzed by immunofluorescence double labeling method. 3. The stable transformation of Schwann cells with PCBP2 interference was screened and the effect of PCBP2 interference on the expression of FHL3,p21 signal was verified in the stable transformation strain. Flow cytometry and CCK-8 were used to analyze the effect of PCBP2 interference on Schwann cell cycle. Results the results of 1.Western bolt showed that the level of PCBP2 protein was up-regulated at 3 days after nerve injury, reached its peak at 7 days, and returned to normal level at 4 weeks after injury. The results of immunohistochemistry showed that the positive rate of PCBP2 in nerve tissue increased after sciatic nerve injury, and immunofluorescence double labeling analysis showed that PCBP2 was mainly expressed in S100-labeled Schwann cells after sciatic nerve injury and did not co-locate with NF200-labeled axons. 3. In Schwann cell proliferation model induced by TNF-偽, the expression of PCBP2 increased gradually, which was consistent with the expression trend of cell proliferation marker PCNA, but the expression of FHL3 and p21 decreased gradually. In addition, PCBP2 co-located with Schwann cell proliferation marker PCNA. Flow cytometry and CCK-8 showed that intervention of PCBP2 expression could inhibit Schwann cell proliferation. 4. The expression of FHL3 and p21 increased after intervention of PCBP2 in Schwann cells, and the expression of p21 decreased after intervention of FHL3. The double immunofluorescence staining showed that PCBP2 was co-located with FHL3 and p21. Conclusion the expression of 1.PCBP2 increased significantly 3 days after acute injury and returned to normal level at 4 weeks. The expression of PCBP2 in Schwann cells was mainly localized in Schwann cells, and was less expressed in axons, which was related to the proliferation of Schwann cells. 2.PCBP2 regulated the proliferation of Schwann cells through FHL3-p21 signaling pathway.
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R745.4

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本文編號(hào)：2446390