發(fā)布時間：2019-03-20 10:59

【摘要】：背景:干細胞源多巴胺能神經(jīng)元作為帕金森病替代療法的細胞來源,其體外分化方案被不斷的優(yōu)化和改良,后續(xù)的鑒定手段和檢測指標也隨之不斷完善。目的:通過觀察人胚胎干細胞分化為多巴胺能神經(jīng)元的形態(tài)發(fā)育過程,檢測其電生理特性,以了解在目前分化方案下人胚胎干細胞能否發(fā)育為形態(tài)成熟、功能成熟的多巴胺能神經(jīng)元。方法:通過單層貼壁法,采用SMAD通道雙抑制劑分化方案,定向誘導人胚胎干細胞分化為多巴胺能神經(jīng)元,通過光鏡、電鏡和細胞免疫熒光等檢測手段進行形態(tài)學和免疫化學鑒定,并應用膜片鉗技術(shù)檢測多巴胺能神經(jīng)元的電生理特性。參照體內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元的電生理標準,對體外分化的多巴胺能神經(jīng)元進行功能評價。結(jié)果與結(jié)論:(1)采用SMAD通道雙抑制劑分化方案,成功誘導人胚胎干細胞定向分化為形態(tài)學上發(fā)育成熟的多巴胺能神經(jīng)元;(2)膜片鉗檢測結(jié)果顯示多巴胺能神經(jīng)元具有成熟的電生理功能,且其電生理特性符合體內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元的評價標準;(3)上述分化方案可以將人胚胎干細胞定向分化為成熟的、有功能的多巴胺能神經(jīng)元。
[Abstract]:Background: stem cell-derived dopaminergic neurons as a cell source of Parkinson's disease replacement therapy, its in vitro differentiation scheme has been continuously optimized and improved, and the subsequent identification methods and detection indexes have been continuously improved. Objective: to observe the morphological development process of human embryonic stem cells differentiated into dopaminergic neurons and detect their electrophysiological characteristics in order to understand whether human embryonic stem cells can develop into morphologically mature cells under the current differentiation scheme. Functional dopaminergic neurons. Methods: human embryonic stem cells were induced to differentiate into dopaminergic neurons by means of monolayer attachment and SMAD channel double inhibitor differentiation. The morphology and immunochemistry of dopaminergic neurons were identified by electron microscopy and cellular immunofluorescence, and the electrophysiological characteristics of dopaminergic neurons were detected by patch clamp technique. According to the electrophysiological standard of dopaminergic neurons in vivo, the function of dopaminergic neurons differentiated in vitro was evaluated. Results & conclusion: (1) Human embryonic stem cells were successfully induced to differentiate into morphologically mature dopaminergic neurons by using SMAD channel double inhibitor differentiation scheme. (2) patch clamp test showed that dopaminergic neurons had mature electrophysiological function, and their electrophysiological characteristics accorded with the evaluation criteria of dopaminergic neurons in vivo. (3) the above differentiation scheme can differentiate human embryonic stem cells into mature, functional dopaminergic neurons.
【作者單位】： 海南醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;海南醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院檢驗科;海南醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院眼科;
【基金】：國家自然科學基金(3126023/C100308) 海南省國際合作項目(KJHZ2015-09);海南省國際合作項目(2012-GH002) 海南省研究生創(chuàng)新科研課題立項(Hys2016-84)~~
【分類號】：R742.5

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 貢志剛,Guido Nikkhah,黃強,蘭青;胎鼠多巴胺能神經(jīng)元前體細胞體外擴增和誘導分化的初步研究[J];江蘇醫(yī)藥;2003年05期

2 盛文利,朱良付,曾進勝,黃如訓;雜種多巴胺能神經(jīng)元細胞系的體外分化和形態(tài)學特征[J];中國神經(jīng)精神疾病雜志;2004年01期

3 陳梅玲;沈岳飛;;影響多巴胺能神經(jīng)元體內(nèi)外分化的因素[J];基礎醫(yī)學與臨床;2008年04期

4 范東艷;王蘋;劉然;牛鳳蘭;杜波;;小膠質(zhì)細胞活化刺激骨髓間充質(zhì)干細胞釋放膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子保護多巴胺能神經(jīng)元的實驗[J];中國組織工程研究與臨床康復;2010年06期

5 夏立平;李凌云;費喜峰;梁中琴;;自噬參與6-羥基多巴胺誘導多巴胺能神經(jīng)元死亡的實驗觀察[J];南方醫(yī)科大學學報;2010年12期

6 王大力;趙鵬;劉強;王彥;趙輝;彭延波;杜利清;;脂多糖誘導小膠質(zhì)細胞活化對多巴胺能神經(jīng)元的損傷作用[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2012年08期

7 牛平,呂永利,王耀山,何祥;堿性成纖維細胞生長因子對體外培養(yǎng)多巴胺能神經(jīng)元營養(yǎng)作用[J];中國醫(yī)科大學學報;2001年06期

8 張文華,王曉民,楊揚,薛冰,崔振中,吳承遠,韓濟生;人膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子基因工程細胞保護多巴胺能神經(jīng)元的實驗研究[J];中華醫(yī)學雜志;2001年22期

9 李慶國,林志國,劉恩重,戴欽舜;神經(jīng)干細胞向多巴胺能神經(jīng)元分化的條件[J];中華神經(jīng)外科雜志;2002年02期

10 胡琦;康慧聰;劉曉艷;許峰;朱遂強;;骨髓間充質(zhì)干細胞體外分化為多巴胺能神經(jīng)元的實驗研究[J];神經(jīng)損傷與功能重建;2006年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 張艷新;李軍泉;徐群淵;;炎癥因素與黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元選擇性變性相關(guān)性研究[A];Proceedings of the 8th Biennial Conference of the Chinese Society for Neuroscience[C];2009年

2 劉彬;謝俊霞;;雌激素及白鳳丸對中樞多巴胺能神經(jīng)元的調(diào)節(jié)和保護作用[A];中國生理學會張錫鈞基金會第八屆全國青年優(yōu)秀生理學學術(shù)論文綜合摘要[C];2003年

3 汪錫金;葉民;張宇紅;陳生弟;;白細胞介素-10抑制促炎因子生成保護多巴胺能神經(jīng)元[A];第十一屆全國神經(jīng)病學學術(shù)會議論文匯編[C];2008年

4 周愛霞;楊慧;;野生型α-synuclein過表達對大鼠多巴胺能神經(jīng)元的影響[A];中國神經(jīng)科學學會第六屆學術(shù)會議暨學會成立十周年慶祝大會論文摘要匯編[C];2005年

5 張振濤;曹學兵;孫圣剛;王嵐;喬嫻;劉紅進;;蛋白酶體抑制劑誘導多巴胺能神經(jīng)元重啟細胞周期的作用及機制[A];第九次全國神經(jīng)病學學術(shù)大會論文匯編[C];2006年

6 李寶園;豐玲;王雁春;郭敏芳;馬存根;;睪丸支持細胞誘導大鼠神經(jīng)干細胞向多巴胺能神經(jīng)元分化作用研究[A];2008年神經(jīng)內(nèi)分泌暨神經(jīng)免疫內(nèi)分泌學術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2008年

7 胡琦;康慧聰;劉小艷;許峰;朱隧強;;骨髓間充質(zhì)干細胞分化為多巴胺能神經(jīng)元的實驗研究[A];第九次全國神經(jīng)病學學術(shù)大會論文匯編[C];2006年

8 王國權(quán);趙忠新;趙瑛;;褪黑素對多巴胺能神經(jīng)元的保護作用[A];第三屆全國睡眠學術(shù)會議論文匯編[C];2004年

9 王嵐;孫圣剛;曹學兵;張振濤;徐麗;;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激及其相關(guān)性凋亡在多巴胺能神經(jīng)元選擇性變性死亡中的作用[A];第九次全國神經(jīng)病學學術(shù)大會論文匯編[C];2006年

10 田有勇;孫圣剛;王家寧;湯翠菊;馮媛;王嵐;陳小武;喬嫻;;腺病毒介導的血管內(nèi)皮生長因子基因轉(zhuǎn)移保護帕金森病大鼠多巴胺能神經(jīng)元[A];第九次全國神經(jīng)病學學術(shù)大會論文匯編[C];2006年

相關(guān)重要報紙文章 前1條

1 張中橋;培補肝腎藥可保護多巴胺能神經(jīng)元[N];中國醫(yī)藥報;2005年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 方偉;多巴胺能神經(jīng)元軸突變性在MPTP誘導的帕金森病模型中的作用研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

2 姜明春;淫羊藿苷及淫羊藿素通過GPER和IGF-1R抑制小膠質(zhì)細胞炎癥反應保護多巴胺能神經(jīng)元的實驗研究[D];青島大學;2017年

3 王晶;人類胚胎干細胞誘導分化為多巴胺能神經(jīng)元的實驗研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2008年

4 趙鵬;外源多巴胺對α-Synuclein過表達多巴胺能神經(jīng)元的影響[D];天津醫(yī)科大學;2009年

5 盛超;小鼠體細胞向多能性神經(jīng)前體細胞和成熟多巴胺能神經(jīng)元的直接轉(zhuǎn)分化[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2012年

6 姚謙明;鼠骨髓源神經(jīng)干細胞向多巴胺能神經(jīng)元定向誘導分化[D];第一軍醫(yī)大學;2006年

7 何秀全;羅格列酮通過抑制小膠質(zhì)細胞活化而保護多巴胺能神經(jīng)元的研究[D];山東大學;2012年

8 鐘善傳;α-SYN和EN1在小鼠的發(fā)育學表達及其在PD模型中作用的實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學;2010年

9 賈曉晶;帕金森氏病體外細胞模型的建立及胞二磷膽堿對多巴胺能神經(jīng)元保護作用的研究[D];吉林大學;2004年

10 王海珍;TAT介導EGFP在小鼠體內(nèi)的分布及介導BDNF治療PD模型鼠的實驗研究[D];鄭州大學;2007年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 相恒偉;Ndfip1對多巴胺能神經(jīng)元的保護作用[D];青島大學;2015年

2 徐瑞;MiR-133b對帕金森病多巴胺能神經(jīng)元模型軸突變性的影響[D];青島大學;2016年

3 王月華;植酸對多巴胺能神經(jīng)元保護作用機制的研究[D];青島大學;2016年

4 卓毅;低氧微環(huán)境促進OM-MSCs增殖及向多巴胺能神經(jīng)元分化的研究[D];湖南師范大學;2016年

5 王菊花;siRNA-PGC-1α對多巴胺能神經(jīng)元線粒體信號轉(zhuǎn)導的影響[D];福建醫(yī)科大學;2014年

6 陳溪;PGC-1α過表達對PD模型細胞的線粒體和在體多巴胺能神經(jīng)元的影響[D];河北師范大學;2017年

7 呂立;順序性化學誘導促大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞向多巴胺能神經(jīng)元分化治療帕金森的實驗研究[D];南京醫(yī)科大學;2010年

8 高健;神經(jīng)膠質(zhì)源性神經(jīng)營養(yǎng)因子和白細胞介素-1α促進大鼠骨髓基質(zhì)細胞誘導分化為多巴胺能神經(jīng)元的實驗研究[D];第一軍醫(yī)大學;2006年

9 徐曉帆;黃芩莖葉總黃酮對多巴胺能神經(jīng)元的保護作用[D];泰山醫(yī)學院;2014年

10 范瑞芳;骨髓間充質(zhì)干細胞體外定向分化為多巴胺能神經(jīng)元的實驗研究[D];廣西醫(yī)科大學;2009年

，

本文編號：2444151