發(fā)布時間：2019-03-20 10:59

【摘要】：背景:干細(xì)胞源多巴胺能神經(jīng)元作為帕金森病替代療法的細(xì)胞來源,其體外分化方案被不斷的優(yōu)化和改良,后續(xù)的鑒定手段和檢測指標(biāo)也隨之不斷完善。目的:通過觀察人胚胎干細(xì)胞分化為多巴胺能神經(jīng)元的形態(tài)發(fā)育過程,檢測其電生理特性,以了解在目前分化方案下人胚胎干細(xì)胞能否發(fā)育為形態(tài)成熟、功能成熟的多巴胺能神經(jīng)元。方法:通過單層貼壁法,采用SMAD通道雙抑制劑分化方案,定向誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞分化為多巴胺能神經(jīng)元,通過光鏡、電鏡和細(xì)胞免疫熒光等檢測手段進(jìn)行形態(tài)學(xué)和免疫化學(xué)鑒定,并應(yīng)用膜片鉗技術(shù)檢測多巴胺能神經(jīng)元的電生理特性。參照體內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元的電生理標(biāo)準(zhǔn),對體外分化的多巴胺能神經(jīng)元進(jìn)行功能評價。結(jié)果與結(jié)論:(1)采用SMAD通道雙抑制劑分化方案,成功誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞定向分化為形態(tài)學(xué)上發(fā)育成熟的多巴胺能神經(jīng)元;(2)膜片鉗檢測結(jié)果顯示多巴胺能神經(jīng)元具有成熟的電生理功能,且其電生理特性符合體內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元的評價標(biāo)準(zhǔn);(3)上述分化方案可以將人胚胎干細(xì)胞定向分化為成熟的、有功能的多巴胺能神經(jīng)元。
[Abstract]:Background: stem cell-derived dopaminergic neurons as a cell source of Parkinson's disease replacement therapy, its in vitro differentiation scheme has been continuously optimized and improved, and the subsequent identification methods and detection indexes have been continuously improved. Objective: to observe the morphological development process of human embryonic stem cells differentiated into dopaminergic neurons and detect their electrophysiological characteristics in order to understand whether human embryonic stem cells can develop into morphologically mature cells under the current differentiation scheme. Functional dopaminergic neurons. Methods: human embryonic stem cells were induced to differentiate into dopaminergic neurons by means of monolayer attachment and SMAD channel double inhibitor differentiation. The morphology and immunochemistry of dopaminergic neurons were identified by electron microscopy and cellular immunofluorescence, and the electrophysiological characteristics of dopaminergic neurons were detected by patch clamp technique. According to the electrophysiological standard of dopaminergic neurons in vivo, the function of dopaminergic neurons differentiated in vitro was evaluated. Results & conclusion: (1) Human embryonic stem cells were successfully induced to differentiate into morphologically mature dopaminergic neurons by using SMAD channel double inhibitor differentiation scheme. (2) patch clamp test showed that dopaminergic neurons had mature electrophysiological function, and their electrophysiological characteristics accorded with the evaluation criteria of dopaminergic neurons in vivo. (3) the above differentiation scheme can differentiate human embryonic stem cells into mature, functional dopaminergic neurons.
【作者單位】： 海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗科;海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院眼科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(3126023/C100308) 海南省國際合作項目(KJHZ2015-09);海南省國際合作項目(2012-GH002) 海南省研究生創(chuàng)新科研課題立項(Hys2016-84)~~
【分類號】：R742.5

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本文編號：2444151