【摘要】：背景:腦出血(ICH)具有病情進展快,以及較高的發(fā)病率,致死率和致殘率等特點。許多研究顯示,氧化應激在腦出血損傷中起著重要作用。CTRP3是一個新近發(fā)現(xiàn)的脂肪因子,研究表明CTRP 3在炎癥、新陳代謝、凋亡、血管生成、心臟保護等方面有著重要的作用。在小鼠心肌缺血模型中,CTRP 3可以通過減少心肌細胞凋亡和促進心臟血管生成使心臟功能得以改善。NADPH酶在氧化應激中占主導地位,NADPH亞基NOX 2在氧化應激中具有重要意義。但在腦出血模型中,CTRP 3對腦出血后的氧化應激損傷是否具有保護作用,迄今尚未見相關(guān)研究報道。目標:(1)通過體內(nèi)腦出血模型的建立,探討CTRP 3在腦出血中是否具有保護作用;(2)通過研究CRTP3是否通過PKA/NOX 2通路參與氧化應激反應的調(diào)控,并闡明其作用的機制。方法:(1)探究氧化應激損傷時間點的選擇。將實驗動物隨機分為假手術(shù)組(sham)、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h腦出血模型組,觀察氧化應激相關(guān)酶NOX 2的表達情況,并選擇NOX 2表達量最多的時間點來進行后續(xù)研究。(2)CTRP 3的腦保護作用。將實驗動物隨機分為假手術(shù)組(sham)、腦出血組、腦出血試劑對照組、出血藥物組(重組或慢病毒過表達CTRP 3)。給藥方式為側(cè)腦室注射。觀察CTRP 3的神經(jīng)保護作用并探討可能機制:對各組大鼠腦出血模型給予神經(jīng)功能學評分,測定腦含水量、血腦屏障通透性,Western Blot測定腦組織中CTRP 3、PKA、NOX 2蛋白的表達,QPCR測定腦組織中CTRP 3、NOX 2的m RNA水平,SOD、MDA、GSH試劑盒進對氧化應激損傷進行評價,免疫組化測定腦組織切片中NOX 2的表達情況。(3)CTRP 3通過PKA/NOX 2通路參與氧化應激反應調(diào)控的機制研究。分別給予PKA激動劑和抑制劑處理腦出血模型,對各組大鼠腦出血建模后給以神經(jīng)功能學評分,測定腦含水量、血腦屏障通透性,Western Blot測定腦組織中PKA、NOX 2蛋白的表達,SOD、MDA試劑盒進對氧化應激損傷進行評價。結(jié)果:(1)建立腦出血模型后NOX 2的表達水平增加,在建模24 h后NOX 2的表達相對最高。(2)重組或慢病毒過表達CTRP 3均明顯減輕腦出血后的行為缺失癥狀,腦水腫及血腦屏障的通透性,增加CTRP 3和PKA蛋白的表達,降低NOX 2蛋白和m RNA的表達,同時下調(diào)MDA,上調(diào)SOD和GSH等氧化應激等檢測指標的表達,并降低腦組織切片中NOX 2的表達。(3)給予PKA激動劑處理上調(diào)PKA蛋白表達,降低NOX 2的蛋白水平,降低腦水腫及血腦屏障通透性,降低氧化應激損傷;給予PKA抑制劑處理后NOX 2的蛋白表達上調(diào),加重腦組織損傷。結(jié)論:(1)CTRP3在腦出血后氧化應激損傷中具有保護作用;(2)CRTP 3能降低NOX 2的表達,降低氧化應激損傷反應,這種改變是通過上調(diào)PKA的表達實現(xiàn)的。
[Abstract]:Background: intracerebral hemorrhage (ICH) is characterized by rapid progression, high incidence, mortality and disability. Many studies have shown that oxidative stress plays an important role in cerebral hemorrhage injury. CTRP3 is a newly discovered adipose factor, and CTRP3 plays an important role in inflammation, metabolism, apoptosis, angiogenesis, cardiac protection and so on. In the model of myocardial ischemia in mice, CTRP-3 can improve cardiac function by reducing cardiomyocyte apoptosis and promoting cardiac angiogenesis. Nadh-3 enzyme plays a dominant role in oxidative stress, and NADPH subunit NOX-2 plays an important role in oxidative stress. However, the protective effect of CTRP-3 on oxidative stress injury after intracerebral hemorrhage has not been reported up to now. Objective: (1) to investigate whether CTRP-3 plays a protective role in intracerebral hemorrhage (ICH) by establishing a model of intracerebral hemorrhage (ICH) in vivo, and (2) to investigate whether CRTP3 participates in the regulation of oxidative stress response through PKA/NOX-2 pathway, and to clarify its mechanism. Methods: (1) to explore the time point selection of oxidative stress injury. The experimental animals were randomly divided into sham operation group (sham), 6 h, 12 h, 24 h, 48 h, 72 h cerebral hemorrhage model group. The expression of oxidative stress related enzyme NOX 2 was observed. The most expressed time point of NOX-2 was selected for follow-up study. (2) the protective effect of CTRP-3 on brain. The experimental animals were randomly divided into three groups: sham operation group, (sham), cerebral hemorrhage group, ICH reagent control group and bleeding drug group (recombinant or lentiviral overexpression of CTRP-3). The method of administration was intracerebroventricular injection. To observe the neuroprotective effect of CTRP-3 and explore the possible mechanism: neurologic score, brain water content, blood-brain barrier permeability, Western Blot were used to measure the expression of CTRP-3, PKA, NOX-2 protein in brain tissue of rats with intracerebral hemorrhage (ICH) in each group. The levels of CTRP-3 and NOX-2 in brain tissue were measured by QPCR, and the oxidative stress damage was evaluated by SOD,MDA,GSH kit. Immunohistochemistry was used to detect the expression of NOX-2 in brain tissue sections. (3) the mechanism of CTRP-3 involved in the regulation of oxidative stress response through PKA/NOX-2 pathway was studied. Intracerebral hemorrhage models were treated with PKA agonists and inhibitors respectively. Neurological score, brain water content, blood-brain barrier permeability, Western Blot and SOD, were used to measure brain water content, blood-brain barrier permeability, PKA,NOX-2 protein expression and SOD, after ICH model was established in each group. MDA kit was used to evaluate oxidative stress damage. Results: (1) the expression level of NOX-2 increased after ICH, and the expression of NOX-2 was the highest 24 h after ICH. (2) Recombinant or lentiviral overexpression of CTRP-3 significantly alleviated the symptoms of behavioral loss after ICH. Brain edema and permeability of blood-brain barrier increased the expression of CTRP-3 and PKA protein, decreased the expression of NOX-2 protein and m-RNA, and down-regulated the expression of SOD and GSH by MDA,. (3) treatment with PKA agonist could up-regulate the expression of PKA protein, decrease the protein level of NOX-2, decrease brain edema and permeability of blood-brain barrier, and decrease oxidative stress injury; After treatment with PKA inhibitor, the protein expression of NOX-2 was up-regulated, which aggravated the brain damage. Conclusion: (1) CTRP3 plays a protective role in oxidative stress injury after intracerebral hemorrhage, and (2) CRTP-3 can decrease the expression of NOX-2 and the oxidative stress-induced injury response, which can be achieved by up-regulating the expression of PKA.
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R743.34

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 孫偉;腦出血血腫周圍區(qū)的病理改變[J];中風與神經(jīng)疾病雜志;2001年05期

2 張化彪,張?zhí)K明;腦出血模型[J];國外醫(yī)學腦血管疾病分冊;2002年06期

3 童丹;腦出血的治療進展[J];卒中與神經(jīng)疾病;2002年01期

4 武衡,黎杏群,唐濤,黃菊芳,羅杰坤,梁清華;腦溢安對腦出血大鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子蛋白表達的影響[J];湖南醫(yī)科大學學報;2003年05期

5 胡書超,張祥建;腦出血后的神經(jīng)細胞凋亡機制及治療策略[J];國外醫(yī)學(腦血管疾病分冊);2004年07期

6 趙和榮;;腦出血100例臨床特點與預防分析[J];臨床和實驗醫(yī)學雜志;2007年08期

7 施建生;高志偉;柯開富;;腦出血后內(nèi)源性神經(jīng)干細胞的增殖[J];交通醫(yī)學;2009年04期

8 張飛飛;陳玉英;王占祥;;腦出血干預相關(guān)因子研究進展[J];福建醫(yī)科大學學報;2011年02期

9 陳志穎;殷小平;唐洲平;;內(nèi)源性神經(jīng)干細胞與腦出血[J];神經(jīng)損傷與功能重建;2013年02期

10 王復新;燕飛;畢勝;侯麗淳;王昆祥;張軍武;李培育;和梅;關(guān)雪蓮;楊慧;;大鼠腦出血微創(chuàng)后行神經(jīng)干細胞移植對其神經(jīng)功能的影響[J];中風與神經(jīng)疾病雜志;2013年11期

相關(guān)會議論文 前10條

1 王淑榮;;腦出血基礎(chǔ)與臨床研究的新進展[A];2009年全國微循環(huán)與血液流變學基礎(chǔ)研究及臨床應用學術(shù)研討會專題報告及論文集[C];2009年

2 張在強;潘樹茂;修春明;湯國太;王云波;陳鴻光;邊玉松;李新鋼;;人骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療腦出血的實驗研究[A];中華醫(yī)學會神經(jīng)外科學分會第九次學術(shù)會議論文匯編[C];2010年

3 楊樹旭;錢沖;李曉斌;石磊;宋正飛;王義榮;;腦出血后神經(jīng)細胞再生的研究[A];2006年浙江省神經(jīng)外科學術(shù)會議論文匯編[C];2006年

4 王玉波;吳珊;;睪酮與腦出血后肺損傷的相關(guān)性研究[A];貴州省醫(yī)學會第八屆神經(jīng)病學年會論文集[C];2010年

5 韋紅巧;李倩茗;;大鼠急性腦出血對肝臟和腎臟的影響[A];中國神經(jīng)科學學會第六屆學術(shù)會議暨學會成立十周年慶祝大會論文摘要匯編[C];2005年

6 楊樹旭;錢聰;亓旭晨;葉紅星;方兵;李新偉;牛煥江;孫偉軍;朱先理;王義榮;;促紅細胞生成素治療腦出血的實驗研究[A];2009年浙江省神經(jīng)外科學術(shù)年會論文匯編[C];2009年

7 安立新;彭宇明;王保國;孫梅珍;袁芳;;停通氣缺氧預處理對腦出血大鼠炎性介質(zhì)和氧化物的影響[A];2008年中華醫(yī)學會全國麻醉學術(shù)年會論文匯編[C];2008年

8 周慎;李勇敏;;癱絡通顆粒對腦出血家兔保護作用的影響[A];國家中醫(yī)藥管理局腦病重點研究室建設(shè)研討會暨中風病科研成果推廣交流會論文匯編[C];2010年

9 王淑榮;劉永泉;吳曉圓;;大鼠腦出血后血腫周圍區(qū)神經(jīng)元死亡的影響因素[A];中華醫(yī)學會第十三次全國神經(jīng)病學學術(shù)會議論文匯編[C];2010年

10 張禮均;鄧聰穎;孟輝;林江凱;馮華;;家犬實驗性額葉腦出血模型的建立[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第二屆全國代表大會論文匯編[C];2007年

相關(guān)重要報紙文章 前2條

1 衣曉峰 秦玉文;頭針可治療急性腦出血[N];中國醫(yī)藥報;2001年

2 曾凡新 董志 傅潔民;中性粒細胞彈性蛋白酶——神經(jīng)保護的作用新靶點[N];中國醫(yī)藥報;2006年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 周翔;腦出血后CD47表達及其作用的實驗研究[D];復旦大學;2013年

2 張清華;人臍帶間充質(zhì)干細胞移植對腦出血后細胞凋亡的影響[D];山東大學;2015年

3 蔡萍;重組ADAMTS13對腦出血后腦損傷和腦水腫的作用機制研究[D];復旦大學;2014年

4 解文菁;CD163對腦出血血腫及灶周組織的影響變化及其機制[D];吉林大學;2016年

5 朱軍;靶向AQP4的RNAi對大鼠腦出血周圍細胞凋亡影響[D];青島大學;2016年

6 陽光;鐵調(diào)素對腦出血后鐵代謝及神經(jīng)功能預后影響的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2016年

7 陳敏;骨髓間充質(zhì)干細胞對大鼠腦出血后血腦屏障的保護作用及機制研究[D];南方醫(yī)科大學;2016年

8 周楷;Treg細胞通過IL-10/GSK3β/PTEN信號調(diào)節(jié)小膠質(zhì)/巨噬細胞極化減輕腦出血炎癥損傷[D];第三軍醫(yī)大學;2016年

9 王春喜;沉默信息調(diào)節(jié)因子1在實驗性腦出血后繼發(fā)性腦損傷中的作用研究[D];南京大學;2015年

10 王勇;miR-130a在腦出血后腦水腫及預后預測中的作用研究[D];華中科技大學;2016年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 石鑫;血腫腔內(nèi)注入神經(jīng)生長因子治療大鼠腦出血[D];河北醫(yī)科大學;2015年

2 趙龍;不同吸氧時間高壓氧治療對腦出血大鼠血腫周圍AQP4和SOD表達的影響[D];河北醫(yī)科大學;2015年

3 劉輝;硫化氫減輕腦缺血后tPA導致的腦出血[D];蘇州大學;2015年

4 趙瑞;金屬鐵螯合劑對腦出血后大鼠腦損傷的影響[D];山西醫(yī)科大學;2015年

5 潘文才;磁感應相移譜技術(shù)檢測腦出血的實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

6 張雙;單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂（GM1）對大鼠腦出血后PARP-1/AIF通路影響的實驗研究[D];四川醫(yī)科大學;2015年

7 鄧婷;依達拉奉對大鼠腦出血后神經(jīng)細胞凋亡及Caspase-3、PARP-1表達影響的實驗研究[D];四川醫(yī)科大學;2015年

8 李磊;NFATc4參與腦出血后的神經(jīng)元凋亡[D];南通大學;2014年

9 張海旺;環(huán)孢菌素A通過結(jié)合CypD抑制mPTP開放對大鼠實驗性腦出血的作用及其機制研究[D];四川醫(yī)科大學;2015年

10 陳周青;膜聯(lián)蛋白Annexin1對大鼠腦出血后血腦屏障損傷保護作用機制的實驗研究[D];蘇州大學;2016年

，

本文編號：2439686