【摘要】：背景:腦出血(ICH)具有病情進(jìn)展快,以及較高的發(fā)病率,致死率和致殘率等特點(diǎn)。許多研究顯示,氧化應(yīng)激在腦出血損傷中起著重要作用。CTRP3是一個(gè)新近發(fā)現(xiàn)的脂肪因子,研究表明CTRP 3在炎癥、新陳代謝、凋亡、血管生成、心臟保護(hù)等方面有著重要的作用。在小鼠心肌缺血模型中,CTRP 3可以通過減少心肌細(xì)胞凋亡和促進(jìn)心臟血管生成使心臟功能得以改善。NADPH酶在氧化應(yīng)激中占主導(dǎo)地位,NADPH亞基NOX 2在氧化應(yīng)激中具有重要意義。但在腦出血模型中,CTRP 3對(duì)腦出血后的氧化應(yīng)激損傷是否具有保護(hù)作用,迄今尚未見相關(guān)研究報(bào)道。目標(biāo):(1)通過體內(nèi)腦出血模型的建立,探討CTRP 3在腦出血中是否具有保護(hù)作用;(2)通過研究CRTP3是否通過PKA/NOX 2通路參與氧化應(yīng)激反應(yīng)的調(diào)控,并闡明其作用的機(jī)制。方法:(1)探究氧化應(yīng)激損傷時(shí)間點(diǎn)的選擇。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為假手術(shù)組(sham)、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h腦出血模型組,觀察氧化應(yīng)激相關(guān)酶NOX 2的表達(dá)情況,并選擇NOX 2表達(dá)量最多的時(shí)間點(diǎn)來進(jìn)行后續(xù)研究。(2)CTRP 3的腦保護(hù)作用。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為假手術(shù)組(sham)、腦出血組、腦出血試劑對(duì)照組、出血藥物組(重組或慢病毒過表達(dá)CTRP 3)。給藥方式為側(cè)腦室注射。觀察CTRP 3的神經(jīng)保護(hù)作用并探討可能機(jī)制:對(duì)各組大鼠腦出血模型給予神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分,測定腦含水量、血腦屏障通透性,Western Blot測定腦組織中CTRP 3、PKA、NOX 2蛋白的表達(dá),QPCR測定腦組織中CTRP 3、NOX 2的m RNA水平,SOD、MDA、GSH試劑盒進(jìn)對(duì)氧化應(yīng)激損傷進(jìn)行評(píng)價(jià),免疫組化測定腦組織切片中NOX 2的表達(dá)情況。(3)CTRP 3通過PKA/NOX 2通路參與氧化應(yīng)激反應(yīng)調(diào)控的機(jī)制研究。分別給予PKA激動(dòng)劑和抑制劑處理腦出血模型,對(duì)各組大鼠腦出血建模后給以神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分,測定腦含水量、血腦屏障通透性,Western Blot測定腦組織中PKA、NOX 2蛋白的表達(dá),SOD、MDA試劑盒進(jìn)對(duì)氧化應(yīng)激損傷進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果:(1)建立腦出血模型后NOX 2的表達(dá)水平增加,在建模24 h后NOX 2的表達(dá)相對(duì)最高。(2)重組或慢病毒過表達(dá)CTRP 3均明顯減輕腦出血后的行為缺失癥狀,腦水腫及血腦屏障的通透性,增加CTRP 3和PKA蛋白的表達(dá),降低NOX 2蛋白和m RNA的表達(dá),同時(shí)下調(diào)MDA,上調(diào)SOD和GSH等氧化應(yīng)激等檢測指標(biāo)的表達(dá),并降低腦組織切片中NOX 2的表達(dá)。(3)給予PKA激動(dòng)劑處理上調(diào)PKA蛋白表達(dá),降低NOX 2的蛋白水平,降低腦水腫及血腦屏障通透性,降低氧化應(yīng)激損傷;給予PKA抑制劑處理后NOX 2的蛋白表達(dá)上調(diào),加重腦組織損傷。結(jié)論:(1)CTRP3在腦出血后氧化應(yīng)激損傷中具有保護(hù)作用;(2)CRTP 3能降低NOX 2的表達(dá),降低氧化應(yīng)激損傷反應(yīng),這種改變是通過上調(diào)PKA的表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。
[Abstract]:Background: intracerebral hemorrhage (ICH) is characterized by rapid progression, high incidence, mortality and disability. Many studies have shown that oxidative stress plays an important role in cerebral hemorrhage injury. CTRP3 is a newly discovered adipose factor, and CTRP3 plays an important role in inflammation, metabolism, apoptosis, angiogenesis, cardiac protection and so on. In the model of myocardial ischemia in mice, CTRP-3 can improve cardiac function by reducing cardiomyocyte apoptosis and promoting cardiac angiogenesis. Nadh-3 enzyme plays a dominant role in oxidative stress, and NADPH subunit NOX-2 plays an important role in oxidative stress. However, the protective effect of CTRP-3 on oxidative stress injury after intracerebral hemorrhage has not been reported up to now. Objective: (1) to investigate whether CTRP-3 plays a protective role in intracerebral hemorrhage (ICH) by establishing a model of intracerebral hemorrhage (ICH) in vivo, and (2) to investigate whether CRTP3 participates in the regulation of oxidative stress response through PKA/NOX-2 pathway, and to clarify its mechanism. Methods: (1) to explore the time point selection of oxidative stress injury. The experimental animals were randomly divided into sham operation group (sham), 6 h, 12 h, 24 h, 48 h, 72 h cerebral hemorrhage model group. The expression of oxidative stress related enzyme NOX 2 was observed. The most expressed time point of NOX-2 was selected for follow-up study. (2) the protective effect of CTRP-3 on brain. The experimental animals were randomly divided into three groups: sham operation group, (sham), cerebral hemorrhage group, ICH reagent control group and bleeding drug group (recombinant or lentiviral overexpression of CTRP-3). The method of administration was intracerebroventricular injection. To observe the neuroprotective effect of CTRP-3 and explore the possible mechanism: neurologic score, brain water content, blood-brain barrier permeability, Western Blot were used to measure the expression of CTRP-3, PKA, NOX-2 protein in brain tissue of rats with intracerebral hemorrhage (ICH) in each group. The levels of CTRP-3 and NOX-2 in brain tissue were measured by QPCR, and the oxidative stress damage was evaluated by SOD,MDA,GSH kit. Immunohistochemistry was used to detect the expression of NOX-2 in brain tissue sections. (3) the mechanism of CTRP-3 involved in the regulation of oxidative stress response through PKA/NOX-2 pathway was studied. Intracerebral hemorrhage models were treated with PKA agonists and inhibitors respectively. Neurological score, brain water content, blood-brain barrier permeability, Western Blot and SOD, were used to measure brain water content, blood-brain barrier permeability, PKA,NOX-2 protein expression and SOD, after ICH model was established in each group. MDA kit was used to evaluate oxidative stress damage. Results: (1) the expression level of NOX-2 increased after ICH, and the expression of NOX-2 was the highest 24 h after ICH. (2) Recombinant or lentiviral overexpression of CTRP-3 significantly alleviated the symptoms of behavioral loss after ICH. Brain edema and permeability of blood-brain barrier increased the expression of CTRP-3 and PKA protein, decreased the expression of NOX-2 protein and m-RNA, and down-regulated the expression of SOD and GSH by MDA,. (3) treatment with PKA agonist could up-regulate the expression of PKA protein, decrease the protein level of NOX-2, decrease brain edema and permeability of blood-brain barrier, and decrease oxidative stress injury; After treatment with PKA inhibitor, the protein expression of NOX-2 was up-regulated, which aggravated the brain damage. Conclusion: (1) CTRP3 plays a protective role in oxidative stress injury after intracerebral hemorrhage, and (2) CRTP-3 can decrease the expression of NOX-2 and the oxidative stress-induced injury response, which can be achieved by up-regulating the expression of PKA.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R743.34

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本文編號(hào)：2439686