【摘要】：目的：本課題擬采用坐骨神經(jīng)結(jié)扎(CCI)法構(gòu)建神經(jīng)病理性疼痛模型,鞘內(nèi)注射組蛋白去乙�；�(HDAC)抑制劑曲古菌素A(TSA),通過觀察大鼠疼痛行為學(xué)的改變,驗證TSA對神經(jīng)病理性疼痛大鼠的鎮(zhèn)痛作用。并選擇性觀察HDAC亞型HDAC口HDAC4蛋白酶在CCI大鼠腰段脊髓的動態(tài)變化,探討可能參與神經(jīng)病理性疼痛表觀遺傳調(diào)控的HDAC亞型。然后通過觀察TSA對HDAC2和HDAC4及疼痛相關(guān)分子GAD65表達的影響,初步探討HDAC亞型參與神經(jīng)病理性疼痛潛在的表觀遺傳調(diào)控通路,為神經(jīng)病理性疼痛的治療研究提供一條新思路。 方法： 1.健康成年雄性SD大鼠,體重220-250g,隨機分為4組：Sham+DMSO組、CCI+DMSO組、CCI+TSA lOμg組和CCI+TSA2μg組。CCI組建立左側(cè)CCI模型,sham組僅暴露左側(cè)坐骨神經(jīng)而不結(jié)扎,各組大鼠術(shù)后第7天疼痛行為學(xué)測定后分別鞘內(nèi)注射溶劑5%DMSO、TSA10μg和2μg(溶于5%DMSO)。術(shù)前1天及術(shù)后3、7、10、14、21天分別測定足底機械痛閾和熱痛閾,觀察鞘內(nèi)注射TSA對疼痛行為學(xué)的改變。 2.取健康成年雄性SD大鼠,體重220-250g,隨機分為Sham組和CCI組,Sham組僅暴露左側(cè)坐骨神經(jīng)而不結(jié)扎,CCI組建立左側(cè)CCI模型。分別于術(shù)前1天及術(shù)后3、7、14、21天測定足底機械痛閾和熱痛閾,并取大鼠術(shù)后3、7、14、21天腰段脊髓(約L4-L6節(jié)段)。采用免疫熒光、Western-blot技術(shù)測定HDAC2和HDAC4蛋白的動態(tài)變化。 3.取1中sham+DMSO組(sham組)、CCI+DMSO組(CCI組)和CCI+TSA10μg組(TSA組)三組大鼠術(shù)后第10天的腰段脊髓組織。Western-blot法檢測大鼠腰段脊髓HDAC2、HDAC4蛋白和GAD65蛋白的表達水平,QPCR法檢測大鼠腰段脊髓HDAC2和HDAC4mRNA的水平。 結(jié)果： 1.CCI術(shù)后大鼠左后肢機械痛閾和熱痛閾值于第7天開始明顯降低,第14天達到最低值,與基礎(chǔ)值及sham組大鼠痛閾均有明顯差異(P0.05)；鞘內(nèi)注射TSA大劑量(10μg組)可同時緩解CCI大鼠的機械痛敏和熱痛敏,且鎮(zhèn)痛作用在術(shù)后10天時(給藥完成1天后)最明顯,可持續(xù)至14天；而小劑量(2μg組)只在術(shù)后10天時減輕了大鼠的機械痛,未緩解大鼠的熱痛敏。 2. HDAC2和HDAC4陽性細胞廣泛分布于大鼠腰段脊髓組織,脊髓灰質(zhì)的陽性表達遠遠高于白質(zhì),且脊髓背角表達致密。HDAC2蛋白主要位于神經(jīng)元細胞核內(nèi),在星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞中幾乎不表達；而HDAC4主要位于神經(jīng)元胞質(zhì)。CCI大鼠腰段脊髓HDAC2和HDAC4蛋白水平較sham組明顯增高(P0.05),且蛋白水平隨疼痛行為的發(fā)展而動態(tài)變化。 3.CCI組與sham組相比,HDAC2和HDAC4蛋白表達量及mRNA相對表達量明顯增高(P0.05)。TSA組與CCI組相比,HDAC2和HDAC4蛋白量降低(P0.05),HDAC2和HDAC4mRNA相對表達量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。CCI組大鼠腰段脊髓GAD65蛋白表達量較sham組明顯降低(P0.05),而TSA組GAD65蛋白量較CCI組增高(P0.05)。 結(jié)論： 1.鞘內(nèi)注射曲古菌素A(TSA)可緩解坐骨神經(jīng)慢性縮窄性損傷(CCI)導(dǎo)致的神經(jīng)病理性疼痛大鼠的機械痛敏和熱痛敏。 2.CCI所致的神經(jīng)病理性疼痛大鼠腰段脊髓中,HDAC2和HDAC4均有大量表達,且主要表達于神經(jīng)元細胞內(nèi),其中HDAC2主要位于胞核而HDAC4主要位于胞質(zhì);HDAC2和HDAC4蛋白表達水平隨疼痛行為的發(fā)展而發(fā)生動態(tài)變化。 3.鞘內(nèi)注射TSA可逆轉(zhuǎn)CCI大鼠腰段脊髓]HDAC2和HDAC4蛋白水平的增高。GAD65蛋白在CCI所致的神經(jīng)病理性疼痛大鼠腰段脊髓中表達下降,而鞘內(nèi)注射TSA可增高GAD65的蛋白水平.
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R741

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 賀民;郭曲練;;曲古抑素A預(yù)處理對大腦中動脈閉塞模型大鼠腦保護作用及其與IL-1β的關(guān)系[J];中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2012年04期

，

本文編號：2429680