【摘要】：膠質(zhì)瘤作為最常見(jiàn)的顱內(nèi)原發(fā)腫瘤,約占成人全身腫瘤的2%。統(tǒng)計(jì)表明其中的一半以上是最高度惡性膠質(zhì)瘤-膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM),其以侵襲性生長(zhǎng),微衛(wèi)星灶,或散在腫瘤細(xì)胞的形式浸潤(rùn)于周圍正常腦實(shí)質(zhì)著稱,是人類難治性腫瘤之一。盡管手術(shù)切除及術(shù)后輔助同步放化療方案應(yīng)用于膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者取得了一定效果,但多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(glioblastoma multiforme, GBM)患者的五年生存率仍然不到10%,對(duì)于老年的患者來(lái)說(shuō)生存率更低[6-10]。 肌動(dòng)蛋白成核促進(jìn)因子之一的皮層肌動(dòng)蛋白被證明不僅僅是肌動(dòng)蛋白骨架動(dòng)力學(xué)的調(diào)節(jié)因子,也是癌癥侵襲過(guò)程中的重要一員。皮層肌動(dòng)蛋白作為一多結(jié)構(gòu)域蛋白,其氨基末端為酸性結(jié)構(gòu)域、接著是六個(gè)半的重復(fù)序列、α螺旋、富含脯氨酸的片段、最后是羧基端的SH3區(qū)域。皮層肌動(dòng)蛋白最開始被認(rèn)為是非受體酪氨酸激酶重要的作用底物。從那時(shí)起,越來(lái)越多的研究表明,皮層肌動(dòng)蛋白在腫瘤的浸潤(rùn)和發(fā)展中起到了重要作用。過(guò)去十年中,眾多關(guān)于皮層肌動(dòng)蛋白的研究著重于其在腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)中所起的作用。皮層肌動(dòng)蛋白作為一多結(jié)構(gòu)域的調(diào)節(jié)蛋白,其可以通過(guò)多種方式調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白的聚合、解聚并可以進(jìn)-步影響細(xì)胞的“運(yùn)動(dòng)器官”-片狀偽足的形成、維持。皮層肌動(dòng)蛋白N末端序列可以直接與Arp2/3復(fù)合體(Arp2/3complex)結(jié)合而調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白絲的聚合、解聚,其還可以通過(guò)其結(jié)構(gòu)域：Src同源結(jié)構(gòu)域3(SH3)與神經(jīng)奧爾德里奇綜合征復(fù)合體(N-WASP)等的結(jié)合而調(diào)節(jié)上述過(guò)程[12]。以往的研究表明,該蛋白在乳腺癌、頭頸部腫瘤、前列腺癌等腫瘤中過(guò)表達(dá)并與預(yù)后不良密切相關(guān)[13-15],而其在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其與膠質(zhì)瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的關(guān)系仍未被證實(shí)。 本課題主要研究皮層肌動(dòng)蛋白在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)和其調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移、侵襲及其可能機(jī)制的研究,分為以下三個(gè)部分： 1.皮層肌動(dòng)蛋白在人膠質(zhì)瘤中的表達(dá)情況。為探討皮層肌動(dòng)蛋白在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)情況,我們收集了40例不同病理級(jí)別的膠質(zhì)瘤標(biāo)本以及8例顳葉癲癇手術(shù)中獲得的非腫瘤腦組織。本課題在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,首先采用免疫組化檢測(cè)不同標(biāo)本中皮層肌動(dòng)蛋白的表達(dá)情況,結(jié)果顯示,皮層肌動(dòng)蛋白在非腫瘤腦組織中表達(dá)呈弱陽(yáng)性,而在膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本中表達(dá)強(qiáng)度明顯增強(qiáng)并且其染色強(qiáng)度隨著腫瘤級(jí)別的增高而增強(qiáng)(F=41.160,P=0.000)。 Western blotting結(jié)果顯示對(duì)照腦組織當(dāng)中皮層肌動(dòng)蛋白表達(dá)量為18.20±2.52%(n=8),WHO Ⅱ級(jí)膠質(zhì)瘤標(biāo)本中表達(dá)量為36.20±3.34%(n=15),WHO Ⅲ級(jí)膠質(zhì)瘤標(biāo)本中表達(dá)量為51.40±4.30%(n=9),WHO Ⅳ級(jí)膠質(zhì)瘤標(biāo)本中表達(dá)量為59.60±4.31%(n=16)。數(shù)據(jù)分析顯示,膠質(zhì)瘤中皮層肌動(dòng)蛋白表達(dá)量高于對(duì)照腦組織(P0.01),并且皮層肌動(dòng)蛋白表達(dá)量與膠質(zhì)瘤的病理級(jí)別呈正相關(guān)(r=0.912,P=0.00)。 2.皮層肌動(dòng)蛋白在膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移和侵襲中的作用。我們選擇人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251、SNB19和LN229進(jìn)行體外研究,分為三組,siRNA-cortactin組(轉(zhuǎn)入特異性干擾RNA)、siRNA-NC組(轉(zhuǎn)入陰性對(duì)照RNA序列)及siRNA-N組(轉(zhuǎn)入空載體)。QRT-PCR及Western blotting檢測(cè)皮層肌動(dòng)蛋白表達(dá)的下調(diào),體外劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移和侵襲能力。結(jié)果：皮層肌動(dòng)蛋白表達(dá)被明顯抑制,抑制后膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移侵襲能力明顯下降(P0.05)。 3.皮層肌動(dòng)蛋白促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移和侵襲的可能機(jī)制。免疫熒光觀察皮層肌動(dòng)蛋白表達(dá)抑制后膠質(zhì)瘤細(xì)胞片狀偽足的變化。免疫熒光法驗(yàn)證皮層肌動(dòng)蛋白與Arp2/3復(fù)合體在膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)的定位。免疫共沉淀(Co-IP)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證兩者在細(xì)胞內(nèi)的結(jié)合。結(jié)果：抑制皮層肌動(dòng)蛋白表達(dá)后,膠質(zhì)瘤細(xì)胞片狀偽足減小且持續(xù)時(shí)間縮短。免疫熒光顯示皮層肌動(dòng)蛋白與Arp2/3復(fù)合體共定位于膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)片狀偽足形成的富含肌動(dòng)蛋白的區(qū)域。免疫共沉淀結(jié)果顯示二者在細(xì)胞內(nèi)存在結(jié)合狀態(tài)。 結(jié)論： 1.皮層肌動(dòng)蛋白在膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)較對(duì)照腦組織明顯升高,并且表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤的病理級(jí)別呈正相關(guān)。 2.特異性干擾RNA抑制皮層肌動(dòng)蛋白表達(dá)后膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移、侵襲能力明顯下降。 3.皮層肌動(dòng)蛋白表達(dá)被抑制后,膠質(zhì)瘤細(xì)胞片狀偽足形成減少,持續(xù)時(shí)間縮短。皮層肌動(dòng)蛋白與Arp2/3復(fù)合體共定位于細(xì)胞內(nèi)富于肌動(dòng)蛋白的區(qū)域。免疫共沉淀顯示兩者在細(xì)胞內(nèi)相結(jié)合。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R739.41

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本文編號(hào)：2407448