【摘要】：背景和目的:蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage, SAH)是指腦表面血管破裂血液進(jìn)入蛛網(wǎng)膜下腔的一種常見的出血性腦卒中,發(fā)病率占出血性卒中的10%。有30%SAH病人在入院之前已經(jīng)死亡,而未死亡的患者致殘率有50%,而且通常伴有認(rèn)知障礙、心理障礙、記憶障礙、日常自主行為能力下降和生活質(zhì)量降低。對(duì)SAH繼發(fā)腦損傷已有數(shù)十年研究,但其機(jī)制仍未完全闡明,以往的研究主要集中在腦血管痙攣的保護(hù)上,但是近期一項(xiàng)多中心、隨機(jī)、雙盲、安慰劑對(duì)照的臨床試驗(yàn)表明,選擇性內(nèi)皮素受體拮抗劑Clazosentan能夠改善血管痙攣,但并不能減少SAH死亡率以及神經(jīng)功能損傷,促使研究方向發(fā)生轉(zhuǎn)變。有證據(jù)表明提出在SAH發(fā)生同時(shí)神經(jīng)功能損傷已經(jīng)開始,SAH數(shù)分鐘內(nèi)神經(jīng)元凋亡,壞死,過度興奮已經(jīng)有發(fā)生,John H. Zhang提出將SAH72小時(shí)內(nèi)的損傷定義為“早期腦損傷”,對(duì)早期腦損傷的干預(yù)是減少SAH死亡率提高神經(jīng)功能的重要手段。然而,由于近年來單純神經(jīng)保護(hù)劑的臨床試驗(yàn)均宣告失敗,促使我們思考保護(hù)神經(jīng)元之外的其他細(xì)胞的損傷,包括星形膠質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞(pericyte )、小膠質(zhì)細(xì)胞,這些細(xì)胞作為一個(gè)整體共同構(gòu)成了神經(jīng)血管網(wǎng)絡(luò)(neurovascular network)。其中由內(nèi)皮細(xì)胞及其之間的緊密連接、周細(xì)胞、基膜和星形膠質(zhì)細(xì)胞組成的血腦屏障(blood brain barrier, BBB)是神經(jīng)血管網(wǎng)絡(luò)的一個(gè)重要的單元,臨床及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均表明血腦屏障受損會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)功能的缺損,修復(fù)血腦屏障能促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù),而且周細(xì)胞在其中起重要調(diào)控作用,所以血腦屏障損傷是SAH后早期腦損傷的重要靶點(diǎn)。本研究基于前期工作基礎(chǔ),通過干預(yù)血管神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)中周細(xì)胞以及血腦屏障,觀察血腦屏障在SAH中的作用,為轉(zhuǎn)化研究提供實(shí)驗(yàn)證據(jù),為臨床治療提供新的思路。材料與方法:1.采用頸內(nèi)動(dòng)脈血管穿刺法建立小鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型2.在蛛網(wǎng)膜下腔出血前48小時(shí)側(cè)腦室注射CD147SiRNA,在蛛網(wǎng)膜下腔出血后3小時(shí)注射CypA重組蛋白,評(píng)價(jià)SAH出血量,神經(jīng)功能損傷,腦水含量,依文思藍(lán)通透性,活體熒光依文思藍(lán)熒光強(qiáng)度,免疫熒光及Western Blot,進(jìn)一步評(píng)價(jià)周細(xì)胞CypA及其受體CD147在SAH后的表達(dá)變化以及調(diào)控血腦屏障的機(jī)制。在離體培養(yǎng)周細(xì)胞中加入氧合血紅蛋白,構(gòu)建離體SAH后周細(xì)胞損傷模型,加入CypA重組蛋白,及CD147 SiRNA,用ELISA及Western評(píng)價(jià)胞內(nèi)及分泌CypA和CD147隨時(shí)間的表達(dá)變化,用ELISA評(píng)價(jià)加入氧合血紅蛋白后MMP9隨時(shí)間的表達(dá)變化以及加入CypA和CD147 SiRNA后的表達(dá)變化。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CypA不同內(nèi)吞抑制劑對(duì)周細(xì)胞攝取CypA的作用。使用ELISA檢測(cè)內(nèi)吞抑制劑對(duì)周細(xì)胞分泌MMP9的影響。3.在蛛網(wǎng)膜下腔出血后使用三種劑量環(huán)孢素干預(yù),觀察神經(jīng)功能和腦水含量改變選出最優(yōu)劑量。使用最優(yōu)劑量干預(yù),觀察蛛網(wǎng)膜西腔出血后四型膠原完整性、依文思藍(lán)滲出、NF-κB入核以及MMP9的分泌,進(jìn)一步評(píng)價(jià)環(huán)孢素保護(hù)血腦屏障的機(jī)制。4.使用周細(xì)胞敲除小鼠制作SAH模型,觀察SAH出血量,神經(jīng)功能損傷,依文思藍(lán)滲出,進(jìn)一步評(píng)價(jià)周細(xì)胞在血腦屏障損傷中的機(jī)制。結(jié)果:1.在SAH后,腦周細(xì)胞CypA和CD147表達(dá)顯著升高,CypA在24小時(shí)達(dá)到高峰并持續(xù)到72小時(shí),CD147在24小時(shí)達(dá)到高峰并在72小時(shí)開始下降。CypA重組蛋白能夠加重神經(jīng)功能損傷,腦水含量以及依文思藍(lán)滲出,這些改變與NF-κB的入核,MMP9 表達(dá)升高,collagen Ⅳ,ZO-1,Occludin,Claudin5 蛋白表達(dá)下調(diào)。CD147 SiRNA能夠逆轉(zhuǎn)CypA的損傷作用,表現(xiàn)出抑制NF-κB的入核及MMP9的表達(dá),上調(diào)collagenⅣ,ZO-1,Occludin, Claudin5蛋白表達(dá)。綜上我們認(rèn)為CypA促進(jìn)了 SAH后血腦屏障的損傷。2.在氧合血紅蛋白處理離體培養(yǎng)的周細(xì)胞,周細(xì)胞內(nèi)CypA和CD147表達(dá)顯著升高,CypA在24小時(shí)達(dá)到高峰并在72小時(shí)開始下降,CD147在24小時(shí)達(dá)到高峰并持續(xù)到72小時(shí),周細(xì)胞分泌的CypA在24小時(shí)達(dá)到高峰在72小時(shí)開始下降。重組CypA促進(jìn)周細(xì)胞分泌MMP9, CD147 SiRNA與重組CypA同時(shí)作用,抑制了 MMP9的分泌。氯丙嗪可以抑制周細(xì)胞內(nèi)吞CypA但是不能減少M(fèi)MP9的分泌,CD147 siRNA不能抑制周細(xì)胞內(nèi)吞CypA。通過以上實(shí)驗(yàn),我們得出CypA是通過直接作用于周細(xì)胞CD147促進(jìn)MMP9的分泌,而不是通過內(nèi)吞CypA來產(chǎn)生作用。3. CypA敲除的小鼠,在SAH后死亡率及出血量與野生型沒有差異,但神經(jīng)功能評(píng)分優(yōu)于野生型,依文思藍(lán)滲出減少,進(jìn)一步說明CypA是SAH后血腦屏障損傷和神經(jīng)功能損傷的重要調(diào)控因素。4. SAH后,通過三種劑量的環(huán)孢素處理,15mg/kg的環(huán)孢素能在24小時(shí)減少神經(jīng)功能損傷,腦水含量,以及依文思藍(lán)滲出,1Omg/kg能在72小時(shí)減少腦水含量,神經(jīng)功能損傷,5mg/kg在72小時(shí)仍不能減少神經(jīng)能損傷,腦水含量,以及依文思藍(lán)滲出。SAH后,腦組織NF-κB的入核及MMP9的表達(dá)增加,collagen Ⅳ,ZO-1,Occludin,Claudin5蛋白表達(dá)減少。使用15mg/kg環(huán)孢素能逆轉(zhuǎn)NF-κB的入核及MMP9的表達(dá),上調(diào)collagen Ⅳ,ZO-1,Occludin, Claudin5蛋白表達(dá)。通過上述研究我們得出環(huán)孢素15mg/kg是一個(gè)優(yōu)化劑量,環(huán)孢素是通過逆轉(zhuǎn)NF-κB的入核及MMP9的表達(dá),上調(diào)collagen Ⅳ,ZO-1, Occludin,Claudin5蛋白表達(dá)來實(shí)現(xiàn)對(duì)血腦屏障的保護(hù)。5.成年周細(xì)胞敲除小鼠的蛛網(wǎng)膜下腔出血后72h死亡率明顯高于野生型,且肺泡塌陷更嚴(yán)重,P/F值降低,肺部SPB、SPC表達(dá)降低,周細(xì)胞敲除小鼠在蛛網(wǎng)膜下腔出血后的急性肺損傷與PDGFB信號(hào)以及SPB和SPC表達(dá)將減少有關(guān)。結(jié)論:1.SAH后周細(xì)胞CypA及CD147表達(dá)上調(diào),外源性CypA能加重血腦屏障損傷及是神經(jīng)功能預(yù)后不良,其機(jī)制可能與周細(xì)胞CD147受體介導(dǎo)的NF-κB的入核及MMP9的表達(dá)損傷基膜以及細(xì)胞之間的緊密連接蛋白有關(guān),CD147 SiRNA可能成為改善SAH血腦屏障損傷提高預(yù)后的新選擇。2. 15mg/kg環(huán)孢素能減少SAH后血腦屏障損傷,可能是通過減少NF-κB的入核及MMP9分泌來實(shí)現(xiàn)的,環(huán)孢素作為臨床常用藥物,可能轉(zhuǎn)化成為早期腦損傷的可靠治療藥物。3.血管神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)尤其是周細(xì)胞在對(duì)腦組織微循環(huán)穩(wěn)態(tài),損傷后修復(fù)的過程中起到重要作用,針對(duì)周細(xì)胞以及血管神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的的治療,可能從早期腦損傷的病理生理過程來減少損傷,改善患者的預(yù)后,基于血管神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)周細(xì)胞的研究可能為SAH的臨床轉(zhuǎn)化及治療提供有效的方法。4.蛛網(wǎng)膜下腔出血后肺損傷對(duì)死亡率有重要影響,PDGFB信號(hào)以及肺泡表面活性物質(zhì)SPB、SPC減少在其中起重要作用,通過減少肺損傷可以減少蛛網(wǎng)膜下腔出血后死亡率使患者受益。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R743.35

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 馮一梅;鄒仲敏;徐輝;;周細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2008年03期

2 陳百華,姜德詠;周細(xì)胞與糖尿病視網(wǎng)膜病變[J];眼科新進(jìn)展;2002年02期

3 錢虹;黃群;肖殷;;纖維調(diào)節(jié)素在人類牙周細(xì)胞損傷愈合中的免疫組織化學(xué)表達(dá)[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2010年02期

4 翟麗麗;楊迷玲;李爭(zhēng)艷;劉楊;王正彩;韓偉;王立峰;;周細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2011年08期

5 張燕;微血管的周細(xì)胞[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊(cè));1999年03期

6 羅靜,姜德詠,唐羅生;選擇性培養(yǎng)牛視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞和周細(xì)胞[J];眼科新進(jìn)展;2004年01期

7 張小娟;方煒;;周細(xì)胞與血管新生及其研究進(jìn)展[J];西部醫(yī)學(xué);2009年08期

8 趙晨陽;王嵐;李硯超;尤琳浩;段相林;常彥忠;;周細(xì)胞的標(biāo)記分子、生理功能和相關(guān)疾病[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2012年03期

9 余穎;喻志源;謝敏杰;王偉;;周細(xì)胞在神經(jīng)血管單元中的作用[J];神經(jīng)損傷與功能重建;2014年01期

10 江時(shí)森;程訓(xùn)民;馬瑞;宮劍濱;張啟高;王立軍;彭永平;;高血壓合并糖尿病對(duì)心肌微血管周細(xì)胞的影響[J];上海醫(yī)學(xué);2007年S1期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 翟麗麗;楊迷玲;李爭(zhēng)艷;劉楊;王正彩;王立峰;;周細(xì)胞的最新研究進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

2 張弘;趙小朋;張志光;;腺病毒-骨形成蛋白7對(duì)人脂肪周細(xì)胞向軟骨分化影響的研究[A];第八屆全國(guó)顳下頜關(guān)節(jié)病學(xué)及（牙合）學(xué)大會(huì)論文匯編[C];2011年

3 ;大鼠腦微血管周細(xì)胞的分離和鑒定[A];中國(guó)微循環(huán)學(xué)會(huì)2011年全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

4 王清良;卞修武;肖華亮;蔣雪峰;;膠質(zhì)瘤周細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

5 劉國(guó)榮;張京芬;;中國(guó)蛛網(wǎng)膜下腔出血流行病學(xué)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

6 林傳成;;警暢老年人蛛網(wǎng)膜下腔出血附140例老年人蛛血特點(diǎn)分析[A];老年學(xué)論文集——福建省首次老齡問題學(xué)術(shù)研討會(huì)論文選[C];1995年

7 王廣;;蛛網(wǎng)膜下腔出血并發(fā)急性梗阻性腦積水的診斷與治療(附二例報(bào)告)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)急診醫(yī)學(xué)學(xué)會(huì)第六次全國(guó)急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];1996年

8 余新民;;老年人蛛網(wǎng)膜下腔出血誤診分析[A];第三屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合神經(jīng)系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2000年

9 李志東;張樹雄;邸曉鹿;;不典型蛛網(wǎng)膜下腔出血31例報(bào)道[A];第三屆全國(guó)少數(shù)民族地區(qū)神經(jīng)病學(xué)會(huì)論文匯編[C];2005年

10 麥衛(wèi)國(guó);謝穎;黃天云;;對(duì)特殊類型蛛網(wǎng)膜下腔出血影像的再認(rèn)識(shí)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三屆全國(guó)放射學(xué)大會(huì)論文匯編（下冊(cè)）[C];2006年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 黃遠(yuǎn)桃;老人蛛網(wǎng)膜下腔出血易誤診[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2004年

2 霍濱;蛛網(wǎng)膜下腔出血可呈現(xiàn)癲癇發(fā)作[N];健康報(bào);2006年

3 白軼南;蛛網(wǎng)膜下腔出血后易復(fù)發(fā)[N];健康時(shí)報(bào);2007年

4 禾豐;頭痛與蛛網(wǎng)膜下腔出血[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2007年

5 指導(dǎo)專家 第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院腦血管病醫(yī)院第三科主任 蔣曉江 記者 李艷 通訊員 朱廣平;蛛網(wǎng)膜下腔出血 保守治療風(fēng)險(xiǎn)高[N];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2006年

6 王惠英 臧海玉;精神異常者要警惕蛛網(wǎng)膜下腔出血[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2004年

7 衣曉峰　王慧穎 記者 韓雪;蛛網(wǎng)膜下腔出血研究獲突破[N];黑龍江日?qǐng)?bào);2011年

8 霍濱;蛛網(wǎng)膜下腔出血也可表現(xiàn)為癲癇發(fā)作[N];家庭醫(yī)生報(bào);2005年

9 趙強(qiáng) 楊聲瑞;蛛網(wǎng)膜下腔出血治療技術(shù)創(chuàng)新[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

10 ;蛛網(wǎng)膜下腔出血急救方法[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 潘鵬宇;周細(xì)胞在蛛網(wǎng)膜下腔出血后血腦屏障損傷的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2017年

2 馬戰(zhàn)軍;負(fù)壓創(chuàng)面治療促進(jìn)創(chuàng)面血管成熟的實(shí)驗(yàn)研究[D];武漢大學(xué);2016年

3 王應(yīng)利;視網(wǎng)膜周細(xì)胞對(duì)微血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)和緊密連接形成影響的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

4 鹿文葆;褪黑素對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)的大鼠腦微血管周細(xì)胞損傷的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

5 王清良;CD248在人腦膠質(zhì)瘤微血管周細(xì)胞中的表達(dá)規(guī)律及其介導(dǎo)周細(xì)胞促血管生成作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

6 王濤;1.半胱胺對(duì)大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷的保護(hù)作用 2.鴉膽子苦素A與酮康唑?qū)?xì)胞色素P450(CYP)3A4的潛在抑制作用對(duì)比研究[D];山東大學(xué);2015年

7 孫青;高遷移率族蛋白1在蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷中的作用研究[D];南京大學(xué);2014年

8 莊宗;氫氣在兔蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期的腦保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];南京大學(xué);2014年

9 崔永華;硫化氫對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷的影響及其機(jī)制的研究[D];蘇州大學(xué);2016年

10 黨寶齊;Cyclophilin A/CD147信號(hào)通路在蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷中的作用及其分子機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王麗;Hedgehog信號(hào)通路介導(dǎo)血管周細(xì)胞參與腎間質(zhì)纖維化的機(jī)制研究[D];四川醫(yī)科大學(xué);2015年

2 王文玲;腎癌中PDGF-B的表達(dá)抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

3 李依依;高糖經(jīng)p38 MAPK途徑調(diào)節(jié)視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞P2X7受體表達(dá)及炎癥介質(zhì)釋放[D];天津醫(yī)科大學(xué);2016年

4 鄧翼遙;腎間質(zhì)纖維化中周細(xì)胞核心巖藻糖基化修飾特征[D];大連醫(yī)科大學(xué);2016年

5 蘆山;顱內(nèi)血管外周細(xì)胞瘤的臨床特點(diǎn)與治療[D];山東大學(xué);2017年

6 胡杰;腎肌周細(xì)胞瘤1例并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2017年

7 夏艷;小鼠、大鼠和人睪丸管周細(xì)胞體視學(xué)研究[D];暨南大學(xué);2011年

8 黃力;UUO幼鼠腎間質(zhì)纖維化中周細(xì)胞轉(zhuǎn)分化趨勢(shì)[D];山西醫(yī)科大學(xué);2014年

9 陳蘭悅;AGE對(duì)DR周細(xì)胞的影響機(jī)制及銀杏葉對(duì)DR的保護(hù)作用[D];吉林大學(xué);2004年

10 陳兵;周細(xì)胞凋亡在肝肺綜合征肺微血管擴(kuò)張中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2014年

，

本文編號(hào)：2385272