【摘要】：阿片受體(opioid receptors)屬于G蛋白偶聯(lián)受體,參與鎮(zhèn)痛、呼吸抑制、免疫反應(yīng)、心肌保護、抑制腸胃蠕動等多種生理活動。其在體內(nèi)有多種亞型,其中在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi),至少存在μ、κ、δ3種亞型。本實驗用到的DADLE([D-Ala2, D-Leu5]enkephalin)是δ-阿片受體(delta-opioid receptor, DOR)激動劑。近年來的研究結(jié)果表明,DADLE除了具有鎮(zhèn)痛作用外,還能有效地延長移植器官的體外保存時間、縮小心肌梗死灶面積、減輕體外培養(yǎng)的神經(jīng)細胞受到的損傷及腦片缺糖缺氧造成的損傷。大量關(guān)于腦缺血的研究是缺血預(yù)處理的研究,然而在臨床醫(yī)學上缺血后處理更加有意義,但對于缺血后處理的研究比較少。 本實驗室前期研究結(jié)果顯示在大鼠全腦缺血后激活DOR能明顯改善再灌注5～9天后的空間記憶功能。因此本論文主要考察了兩組與學習記憶相關(guān)的蛋白的表達情況,以此來探究腦缺血后激活DOR對認知功能改善的分子機制。此外本論文還觀察了腦缺血后激活DOR對神經(jīng)細胞生存狀態(tài)的影響。 第一章構(gòu)建全腦缺血再灌注大鼠模型 本實驗利用四血管阻斷法來復(fù)制全腦缺血模型：即阻斷雙側(cè)椎動脈和雙側(cè)頸總動脈。由于DADLE不能通過血腦屏障,因此為了在造模成功后進行側(cè)腦室注射藥物,需要在復(fù)制缺血模型之前對大鼠進行側(cè)腦室埋管。 第二章DOR對大鼠全腦缺血再灌注后神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細胞的影響 大鼠全腦缺血再灌注的過程中會引起大腦(特別是缺血易損區(qū)-海馬)的神經(jīng)元凋亡以及星形膠質(zhì)細胞形態(tài)的改變。本實驗室前期的實驗結(jié)果顯示腦缺血后激活DOR能明顯改善再灌注3天后的神經(jīng)細胞的生存狀態(tài),本論文主要是觀察了再灌注7天后神經(jīng)細胞的生存狀態(tài)。結(jié)果顯示缺血后激活DOR能減少再灌注7天后海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的凋亡,并且促進星形膠質(zhì)細胞的活化,減少星形膠質(zhì)細胞的受損。 第三章DOR對大鼠全腦缺血再灌注后突觸蛋白I及其磷酸化形式的影晌 突觸蛋白I是位于突觸前膜的蛋白,它通過磷酸化與去磷酸化來調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)的釋放,影響神經(jīng)元的信號傳遞,從而影響神經(jīng)元與星形膠質(zhì)細胞的生存狀態(tài),進而影響認知功能。本章節(jié)主要是采用Western Blotting的方法檢測DOR對大鼠腦缺血再灌注后突觸蛋白I及其磷酸化形式的影響。結(jié)果顯示：一、大鼠缺血再灌注3天后突觸蛋白I在模型組中的表達量上調(diào),在側(cè)腦室注射DADLE組中表達量也上調(diào),但是上調(diào)量比模型組大。大鼠缺血再灌注7天后突觸蛋白I在模型組中表達量依然比對照組高,而在側(cè)腦室注射DADLE組中突觸蛋白I的表達量已經(jīng)恢復(fù)到對照組水平。此外,側(cè)腦室同時注射DADLE和Naltrindole組的結(jié)果與模型組相似。研究表明突觸蛋白I對于修復(fù)腦缺血再灌注所引起的損傷是必要的,其表達量的降低會加重損傷,所以結(jié)果提示在腦缺血后激活DOR加快了組織的修復(fù)過程。二、磷酸化的突觸蛋白I在大鼠缺血再灌注3天后,在模型組中表達量上調(diào),而在側(cè)腦室注射DADLE組中的表達量明顯下調(diào)。在缺血再灌注7天后,磷酸化的突觸蛋白I在模型組中的表達量下調(diào),而在側(cè)腦室注射DADLE組中的表達量上調(diào)。側(cè)腦室同時注射DADLE和Naltrindole組的結(jié)果與模型組相似。磷酸化的突觸蛋白I可以間接反映神經(jīng)遞質(zhì)的傳遞情況。在腦缺血再灌注3天時,激活DOR明顯下調(diào)磷酸化的突觸蛋白I,從而阻止釋放過量的神經(jīng)遞質(zhì),進而減少過量的興奮性遞質(zhì)造成的興奮性毒性。而在再灌注7天時,可能由于神經(jīng)元要建立新的突觸聯(lián)系,需要重新恢復(fù)神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。 第四章DOR對大鼠全腦缺血再灌注后MARCKS及其磷酸化形式的影響 豆蔻酰化的富含丙氨酸的激酶C底物(myristoylated alanine-rich C kinase substrate,MARCKS)依靠磷酸化和去磷酸化來調(diào)節(jié)樹突棘形態(tài)和數(shù)量的穩(wěn)定性,從而影響神經(jīng)元的突觸可塑性,最終影響認知功能。MARCKS及其磷酸化形式的表達量上調(diào)和下調(diào)都不利于維持樹突棘的穩(wěn)定,其表達量在生理水平是最佳狀態(tài)。本章節(jié)主要是采用Western Blotting的方法檢測DOR對大鼠腦缺血再灌注后MARCKS及其磷酸化形式的影響。結(jié)果顯示在大鼠缺血再灌注3天后模型組MARCKS表達量上調(diào),側(cè)腦室注射DADLE組表達量下調(diào)。大鼠缺血再灌注7天MARCKS在模型組中表達量明顯上調(diào),而側(cè)腦室注射DADLE組中MARCKS的表達量已經(jīng)恢復(fù)到對照組水平。磷酸化的MARCKS在缺血再灌注3天時,在模型組中表達量下調(diào),側(cè)腦室注射DADLE組中表達量明顯下調(diào)。在缺血再灌注7天時,在模型組中表達量上調(diào),側(cè)腦室注射DADLE組中表達量恢復(fù)至對照組水平。側(cè)腦室同時注射DADLE和Naltrindole組的結(jié)果與模型組相似。結(jié)果提示MARCKS及其磷酸化形式在缺血再灌注3天時明顯下調(diào),雖然對于維持樹突棘的穩(wěn)定是不利的,但是這也許是在腦缺血再灌注的病理情況下的一種保護措施,可能是阻止腦缺血引起的凋亡信號放大從而保護神經(jīng)元。而在缺血再灌注7天時側(cè)腦室注射DADLE組恢復(fù)至生理水平,從而有利于建立新的突觸聯(lián)系,減少神經(jīng)元損傷。
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【學位授予單位】：華東師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R742

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 李月玲;楊玉梅;;實驗性腦缺血模型的建立及影響因素[J];包頭醫(yī)學院學報;2009年03期

2 尹靜;李俐濤;楊q，

本文編號：2346569