【摘要】：目的：通過(guò)構(gòu)建空腸彎曲菌（Campylobacter jejuni, Cj）活菌口服灌胃，聯(lián)合腹腔注射百日咳毒素（pertussis toxin，PT）致Hartley豚鼠周圍神經(jīng)損傷的模型。探討空腸彎曲菌消化道感染后同時(shí)腹腔給予百日咳毒素對(duì)加重周圍神經(jīng)組織損傷的影響，進(jìn)而為周圍神經(jīng)病——吉蘭-巴雷綜合征（Guillain-Barre syndrome, GBS）動(dòng)物模型的建立提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法： 1空腸彎曲菌的培養(yǎng)、鑒定及菌懸液的制備：選取吉蘭-巴雷綜合征（Guillain-Barre syndrome, GBS）患者糞便中分離并培養(yǎng)出的空腸彎曲菌lulei株，經(jīng)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心鑒定為空腸彎曲菌菌株。用哥倫比亞血培養(yǎng)基于42℃，10%CO2、5%O2、85%N2條件培養(yǎng)空腸彎曲菌。并經(jīng)革蘭染色、馬尿酸水解實(shí)驗(yàn)及過(guò)氧化氫酶實(shí)驗(yàn)進(jìn)行鑒定。純化菌種，制備3×108cfu/ml菌懸液。 2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組：將30只Hartley豚鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組分為：A組：空腸彎曲菌lulei株+百日咳毒素組，B組：空腸彎曲菌lulei株+生理鹽水組；對(duì)照組分為：C組：布氏肉湯+百日咳毒素組，D組：布氏肉湯+生理鹽水組，E組：空白對(duì)照組。 3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物攻毒：口服灌喂Hartley豚鼠，灌喂前禁食12小時(shí)、禁水4小時(shí)。實(shí)驗(yàn)組A組、B組給予濃度為3×108cfu/ml的菌懸液，2ml/只，對(duì)照組C組、D組給予同等量的布氏肉湯進(jìn)行灌胃。灌胃周期為每周連續(xù)3天且連續(xù)4周進(jìn)行。于第1周和第2周的第1次和第3次灌胃后，A組和C組腹腔注射0.5ml含1ug百日咳毒素的生理鹽水，B組、D組給予0.5ml生理鹽水。 4實(shí)驗(yàn)動(dòng)物臨床癥狀、病理觀察及病變統(tǒng)計(jì)：自灌喂當(dāng)日起每日觀察豚鼠的臨床癥狀，定期稱量豚鼠體重，觀察豚鼠的皮毛情況。于末次攻毒后1周取材，分別取雙側(cè)坐骨神經(jīng)進(jìn)行鋨酸染色觀察及透射電鏡觀察，根據(jù)鋨酸染色病變率進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。 結(jié)果： 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物觀察：根據(jù)臨床癥狀評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分，實(shí)驗(yàn)組A組、B組和對(duì)照組C組、D組、E組臨床癥狀均為0級(jí)。實(shí)驗(yàn)組A組有1只豚鼠于第3周開(kāi)始出現(xiàn)腹部皮毛較臟現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)組A組和B組整體體重增長(zhǎng)速度較慢。實(shí)驗(yàn)組A組、B組豚鼠與第3周開(kāi)始有掉毛的現(xiàn)象。 2周圍神經(jīng)病理表現(xiàn)： 2.1鋨酸染色：實(shí)驗(yàn)組A組豚鼠坐骨神經(jīng)部分纖維粗細(xì)不等，髓鞘節(jié)段性皺縮、斷裂，呈“長(zhǎng)城樣”改變，部分神經(jīng)單絲斷裂；實(shí)驗(yàn)組B組豚鼠坐骨神經(jīng)部分纖維呈“鋸齒樣”改變，節(jié)段性皺縮，神經(jīng)纖維粗細(xì)不均勻；對(duì)照組豚鼠坐骨神經(jīng)纖維鋨酸染色未見(jiàn)異常。 2.2透射電鏡觀察：實(shí)驗(yàn)組A組豚鼠坐骨神經(jīng)髓鞘粗細(xì)不等，板層結(jié)構(gòu)消失，并出現(xiàn)斷裂缺如，部分軸索被壓迫消失；實(shí)驗(yàn)組B組豚鼠坐骨經(jīng)髓鞘部分板層結(jié)構(gòu)消失，融合紊亂，微絲微管排列緊密，線粒體嵴模糊。對(duì)照組神經(jīng)髓鞘粗細(xì)均勻，板層結(jié)構(gòu)完整，，微絲微管排列正常。 3神經(jīng)纖維病變率及統(tǒng)計(jì)分析： 3.1神經(jīng)纖維病變率：實(shí)驗(yàn)組中周圍神經(jīng)存在損傷的Hartley豚鼠占100%，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組Hartley豚鼠周圍神經(jīng)的平均病變率不同，實(shí)驗(yàn)組A組病變率為47.3%，實(shí)驗(yàn)組B組病變率為18.8%，對(duì)照組C組病變率為3.8%，對(duì)照組D組病變率為2.5%，空白對(duì)照組E組病變率為2.8%。 3.2病變率統(tǒng)計(jì)分析：對(duì)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，神經(jīng)纖維平均病變率比較采用χ2檢驗(yàn)，進(jìn)行雙側(cè)性顯著檢測(cè)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05。得出P＜0.05，認(rèn)為各組的發(fā)病率不全相等。進(jìn)一步進(jìn)行組間比較，采用χ2分割法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05，需進(jìn)行A組、B組、C組、D組分別與E組比較，以及A組與B組比較，校正后檢驗(yàn)水準(zhǔn)α′=0.01。A組與E組比較，得出P＜0.01，認(rèn)為A組和E組病變率不同，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且A組病變率高于E組病變率；B組和E組比較，得出P＜0.01，認(rèn)為B組和E組病變率不同，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且B組病變率高于E組病變率；C組和E組比較，得出P＞0.01，認(rèn)為C組和E組病變率相同，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；D組和E組比較，得出P＞0.01，認(rèn)為D組和E組病變率相同，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。A組和B組比較，得出P＜0.01，認(rèn)為A組和B組病變率不同，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且A組病變率高于B組病變率。 結(jié)論： 1消化道感染空腸彎曲菌能夠?qū)е?周齡Hartley豚鼠周圍神經(jīng)損傷，周圍神經(jīng)存在損傷的豚鼠占100%，且周圍神經(jīng)纖維平均病損率為18.8%。 2消化道感染空腸彎曲菌后進(jìn)行腹腔注射百日咳毒素導(dǎo)致3周齡Hartley豚鼠周圍神經(jīng)損傷，周圍神經(jīng)存在損傷的豚鼠占100%，周圍神經(jīng)纖維平均病損率增加到47.3%。 推論： 消化道感染空腸彎曲菌后引起Hartley豚鼠周圍神經(jīng)損傷，百日咳毒素通過(guò)改變豚鼠自身狀況——免疫狀況、血液-神經(jīng)屏障附近血管的通透性等加重周圍神經(jīng)損傷。
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【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R745

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前4條

1 魏文靜;C.jejuni經(jīng)KM雄鼠消化道連續(xù)傳代后形態(tài)、毒力因子致周圍神經(jīng)病能力的變化研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

2 馮晨芳;Cj致Hartley豚鼠周圍神經(jīng)病模型—百日咳毒素劑量范圍及灌喂頻率的探索性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

3 王智;增加Cj的灌胃頻率可使Hartley豚鼠的周圍神經(jīng)損傷加重[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

4 宋爽;GBS相關(guān)C.jejuni感染昆明小鼠消化道研究及老年急性缺血性腦卒中疾病分型[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

本文編號(hào)：2346558