【摘要】：背景和目的膠質母細胞瘤(膠質母細胞瘤)是顱內常見的惡性腫瘤,世界衛(wèi)生組織在2007年針對膠質瘤依據惡性程度等生物學特性進行了分級,其中膠質母細胞瘤是第Ⅳ級,占所有惡性神經系統腫瘤的25%。在歐洲和北美平均每10萬人有2-3人患病,但是約50%的患者積極治療情況下仍在1年內死亡�；谀承┻z傳和臨床特征分為原發(fā)性膠質母細胞瘤和繼發(fā)性膠質母細胞瘤,原發(fā)性膠質母細胞瘤沒有任何低度腫瘤病變史,多見于50歲以上的成年人,大多數膠質母細胞瘤是原發(fā)性腫瘤;而繼發(fā)性膠質母細胞瘤一般從較低級別膠質細胞瘤逐漸發(fā)展而來,通常需要5-10年的時間,多見于小于45歲的成年人,發(fā)病年齡較原發(fā)性膠質母細胞瘤相對較輕;近幾年隨著研究的更加深入,人們根據膠質母細胞瘤的基因表型的不同,將膠質母細胞瘤分為4種類型,即我們常說的Classical、Mesenchymal、Proneural和Neural四種亞型,科學家進行該種分類的初衷在于:通過基因型的不同分類希望尋找治療膠質母細胞瘤的有效的可靠的方法。Micro RNAs(miRNAs)即微小RNA,是非編碼RNA家族的重要成員;結構上由大約22個核苷酸組成的,進化時高度一致的單鏈RNA。miRNAs主要通過引起目標m RNA的翻譯抑制或降解,進而調控目標m RNA的表達。miRNAs的異常表達在人類腫瘤形成過程起著不可替代作用。近年來,許多研究發(fā)現,在細胞形成過程中,miRNAs與細胞的增殖,侵襲及遷移等相關行為密切相關。目前miR-506(miR-506)在其他腫瘤中的研究的相關報道已經很多,比如胃癌、肝瘤、乳腺癌、骨肉癌及膀胱癌等,但是目前研究認為:在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中,miR-506既可能發(fā)揮癌基因的作用也可能發(fā)揮抑癌基因的作用,但目前miR-506在膠質瘤中的作用特性尚未可知,為探究miR-506在膠質母細胞瘤中的生物學特性,我們選擇引入miR-506模擬物來促進其在膠質母細胞瘤細胞中的表達;隨后我們利用生物信息學及分子生物學的方法,對其靶基因進行了初步鑒定。本課題并進一步分析了miR-506以及靶基因IGF2BP1對膠質母細胞瘤細胞的分化和增殖的調節(jié)特性。第一部分miR-506在膠質母細胞瘤中的表達臨床意義及生物學功能目的:研究miR-506在膠質母細胞瘤組織中的表達及和臨床特征及預后的關系。探討miR-506在膠質母細胞瘤增殖、侵襲及轉移中的調節(jié)作用特性及其分子機制。方法:1.應用RT-PCR方法檢測miR-506在人膠質母細胞瘤細胞株(U87,U251,LN229和A172)中的表達和在正常腦組織中的表達情況。2.細胞轉染miR-506 mimics后利用MTT法檢測miR-506過表達后對膠質母細胞瘤細胞的增殖能力的影響;流式細胞術檢測細胞轉染miR-506模擬物對細胞周期的影響。3.采用劃痕修復實驗和基質膠侵襲transwell實驗,分別檢測miR-506過表達后膠質母細胞瘤細胞的侵襲能力,進一步分析了影響侵襲的分子機制。4.采用克隆形成實驗分析miR-506對膠質母細胞瘤細胞的增殖能力的影響。結果:1.miR-506在4個膠質母細胞瘤細胞株細胞系(U87,U251,LN229和A172)中的表達較在正常腦組織中的表達顯著減低,差異具有統計學意義(P0.05)。2.CCK8實驗顯示miR-506誘導的U87細胞系較scramble組增殖能力顯著降低,差異具有統計學意義(P0.05),細胞周期實驗也顯示U87細胞系轉染miR-506mimic后,細胞周期在G0/G1期有明顯的停滯。3.應用Transwell侵襲實驗檢測miR-506對細胞侵襲性方面的影響,采用miR-506 mimic轉染后U87細胞系的侵襲能力較scramble組明顯降低;劃痕實驗結果顯示miR-506 mimic轉染后U87細胞系的遷移能力較scramble組明顯降低,差異具有統計學意義(P0.05);Westernblot檢測結果顯示:轉染miR-506 mimic后MMP1、MMP2、MMP9蛋白表達水平顯著下調,差異具有統計學意義(P0.05),MMP11蛋白水平無明顯變化。結論:miR-506的表達情況與膠質母細胞瘤的臨床進展密切相關,miR-506過表達能顯著的抑制膠質母細胞瘤的增殖與侵襲。miR-506對膠質母細胞瘤細胞侵襲影響的機制可能是通過調節(jié)MMP1、MMP2、MMP9的蛋白表達實現的,本研究的結果顯示miR-506在膠質母細胞瘤的進展過程中可能起到抑癌基因的作用。第二部分miR-506調控膠質母細胞瘤增殖浸潤的機制研究目的:利用生物信息技術對miR-506的靶基因進行篩選和鑒定,研究miR-506及其靶基因參與膠質母細胞瘤疾病進展的分子機制。方法:1.利用micro RNA在線數據庫(miRanda、Targert Scan、Pictar)預測miR-506的靶基因。2.利用熒光素酶和westernblot技術檢測miR-506是否可以靶向調控IGF2BP1基因。3.細胞轉染IGF2BP1過表達質粒后利用MTT法檢測IGF2BP1過表達對膠質母細胞瘤細胞的增殖能力的影響;流式細胞術檢測IGF2BP1過表達對細胞周期的影響。4.應用免疫組織化學方法及組織芯片技術檢測IGF2BP1蛋白在膠質母細胞瘤組織中的表達情況,以及IGF2BP1蛋白表達強度與患者臨床特征及預后之間的關系。結果:1.應用Target Scan軟件,我們發(fā)現IGF2BP1的3’UTR有固定的結合位點,在U87細胞系中過度表達的miR-506抑制p GL3-WT-IGF2BP1-3’UTR質粒的活性,在免疫熒光素酶活性分析中p GL3-MUT-IGF2BP1-3’UTR質粒活性無改變,而且,在膠質母細胞瘤細胞系中miR-506抑制IGF2BP1的m RNA和蛋白水平的表達。2.IGF2BP1沉默后,膠質母細胞瘤的增殖能力顯著下降,G0/G1周期的細胞周期停滯增加。3.IGF2BP1過表達后,膠質母細胞瘤的增殖能力顯著增加,G0/G1周期的細胞周期停滯減少。4.IGF2BP1表達水平與膠質母細胞瘤臨床病理參數的分析結果表明:膠質母細胞瘤患者預后與IGF2BP1表達水平(P=0.001)明顯相關;Kaplan-Meier分析結果顯示IGF2BP1低表達的膠質母細胞瘤患者的生存時間明顯高于IGF2BP1高表達的患者,提示IGF2BP1的表達水平和膠質母細胞瘤患者的臨床預后密切相關。結論:1.miR-506在膠質母細胞瘤中能靶向調控IGF2BP1的表達;沉默IGF2BP1表達后,膠質母細胞瘤細胞的增殖能力顯著下降,細胞周期明顯停滯;過表達IGF2BP1后膠質母細胞瘤細胞的增殖能力得到部分恢復,細胞周期停滯明顯減少。2.IGF2BP1高表達患者的生存時間明顯短于IGF2BP1低表達的患者。3.miR-506通過負性調節(jié)其靶基因IGF2BP1的蛋白表達,從而抑制膠質母細胞瘤的進展,可能成為臨床膠質母細胞瘤治療的新靶點。全文結論1.miR-506在膠質母細胞瘤組織和細胞中的表達較在正常組織和細胞中的表達均明顯降低。2.體內外研究結果顯示:miR-506過表達后,膠質母細胞瘤的增殖、遷移和侵襲能力以及成瘤能力明顯下降,且細胞周期停滯,提示miR-506在膠質母細胞瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中起到抑癌基因作用。3.miR-506在膠質母細胞瘤中能夠靶向調控IGF2BP1的表達;沉默IGF2BP1表達后,膠質母細胞瘤的增殖能力顯著下降,細胞周期明顯停滯;過表達IGF2BP1后膠質母細胞瘤的增殖能力得到部分恢復,細胞周期停滯的細胞明顯減少。4.IGF2BP1高表達患者的生存時間明顯短于IGF2BP1低表達的患者。5.miR-506通過負性調節(jié)其靶基因IGF2BP1的蛋白表達,從而抑制膠質母細胞瘤的進展,miR-506/IGF2BP1調節(jié)軸在膠質母細胞瘤的發(fā)生發(fā)展中起到了重要作用,有可能成為臨床上膠質母細胞瘤治療的新靶點。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.4

【相似文獻】

相關期刊論文 前1條

1 童錦祿;徐錫濤;朱明明;陳翔;聶芳;冉志華;蕭樹東;;miR-506在人結腸癌羥基喜樹堿多藥耐藥中的功能研究[J];胃腸病學和肝病學雜志;2010年07期

相關博士學位論文 前2條

1 李健;miR-506通過SPHK1/Akt/NF-κB信號通路抑制胰腺癌進展和化療抵抗的機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2017年

2 姚杰;過表達miR-506通過靶向星形細胞上調基因（AEG-1）抑制骨肉瘤的增殖并促進其凋亡[D];鄭州大學;2017年

相關碩士學位論文 前2條

1 王瑩;miR-506抑制胃癌轉移的機制研究[D];昆明醫(yī)科大學;2013年

2 董小瑛;MiR-506調控EZH2-β-catenin信號通路對漿液性卵巢癌藥物敏感性的影響[D];天津醫(yī)科大學;2017年

，

本文編號：2339360