【摘要】：第一部分BCL-2在Human中的表達(dá)及與高級(jí)別膠質(zhì)瘤預(yù)后的關(guān)系 目的： 檢測BCL-2在膠質(zhì)細(xì)胞瘤內(nèi)的表達(dá)量,揭示BCL-2與腦膠質(zhì)瘤患者病理級(jí)別及預(yù)后的關(guān)系。 方法： 收集腦膠質(zhì)瘤患者腦組織與無瘤腦組織,采用免疫組織化學(xué)法檢測BCL-2在不同病理級(jí)別的膠質(zhì)瘤組織及人腦正常腦組織中的表達(dá)水平,隨訪術(shù)后接受放化療的高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤患者的疾病控制率及6個(gè)月未進(jìn)展生存期,研究BCL-2差異性表達(dá)與惡性腦膠質(zhì)瘤預(yù)后的關(guān)系。 結(jié)果： 正常腦組織中未見BCL-2蛋白表達(dá)。64%(32/50)的腦膠質(zhì)瘤組織中有BCL-2表達(dá),其中高級(jí)別的腦膠質(zhì)瘤患者BCL-2陽性率(73.0%,27/37)高于低級(jí)別者(38.5%,5/13)(P0.05)。完成隨訪的全部36例高級(jí)別膠質(zhì)瘤患者中BCL-2蛋白表達(dá)陽性患者客觀有效率為19.2%(5/26)、疾病控制率為30.6%(8/26),BCL-2蛋白表達(dá)陰性患者客觀有效率為60.0%(6/10)、疾病控制率為70.0%(7/10)(P0.05) 結(jié)論： 膠質(zhì)瘤組織中有BCL-2蛋白表達(dá)且與腫瘤的組織分化程度有關(guān)；BCL-2蛋白表達(dá)陰性的高級(jí)別膠質(zhì)瘤患者較陽性患者更易從膠質(zhì)瘤術(shù)后的放療及TMZ化療中獲益。 第二部分pEGFP-BCL-2質(zhì)粒體及其穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的構(gòu)建及鑒定 目的： 構(gòu)建pEGFP-BCL-2質(zhì)粒體并鑒定其在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251內(nèi)的表達(dá)。 方法： 采取RT-PCR法從U251細(xì)胞中獲得BCL-2目的基因,插入pEGFP-N1載體的多克隆位點(diǎn),構(gòu)建pEGFP-BCL-2質(zhì)粒體,應(yīng)用FUGENE HD轉(zhuǎn)染質(zhì)粒體進(jìn)入U(xiǎn)251,G418篩選,挑出單克隆擴(kuò)增,建立穩(wěn)定細(xì)胞株N1-U251和BCL-2-U251。將實(shí)驗(yàn)分為：空白組(U251細(xì)胞),N1組(N1-U251),BCL-2組(BCL-2-U251),檢測BCL-2基因和蛋白表達(dá)。 結(jié)果： pEGFP-BCL-2質(zhì)粒體構(gòu)建成功,N1-U251,BCL-2-U251穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建成功,空白組、N1組、BCL-2組的BCL-2基因表達(dá)量為：0.32+0.01,0.30±0.01,1.21+0.23,BCL-2蛋白表達(dá)量分別為：0.131±0.002,0.012±0.002,4.813+0.5134。BCL-2組與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論： 成功構(gòu)建人BCL-2質(zhì)粒體并建立高表達(dá)BCL-2的U251細(xì)胞系。 第三部分BCL-2基因與U251細(xì)胞生物學(xué)特性及替莫唑胺耐藥性之間的關(guān)系 目的： 探討高調(diào)或沉默BCL-2基因?qū)251細(xì)胞生物學(xué)特性及替莫唑胺耐藥性的影響 方法： 用pEGFP-BCL-2質(zhì)粒體和BCL-2-shRNA慢病毒分別感染U251細(xì)胞,分為pEGFP-BCL-2-U251組、BCL-2-ShRNA-U251組及U251對(duì)照組。分別采取CC8實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)等方法檢測BCL-2基因的差異性表達(dá)與U251細(xì)胞增殖活力、周期及凋亡、克隆形成力、侵襲性等基本生物學(xué)特性以及其對(duì)替莫唑胺耐藥之間的關(guān)系。 結(jié)果： BCL-2-shRNA-U251組的細(xì)胞增殖速度低于正常的U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞,而pEGFP-BCL-2-U251組則增殖速度高于正常U251腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞。BCL-2-shRNA-U251組凋亡率及G2/M期比率高于pEGFP-BCL-2-U251組和空白組(P0.05)。pEGFP-BCL-2-U251組S期比率高于空白組和BCL-2-shRNA-U251組(P0.05),加入50μM替莫唑胺24h后,各組凋亡率較未加藥時(shí)均升高(P0.05),并且pEGFP-BCL-2-U251組、空白組G2/M期比率升高(P0.05),而BCL-2-shRNA-U251組G2/M期比率下降(P0.05);pEGFP-BCL-2-U251組、U251對(duì)照組、BCL-2-shRNA-U251組對(duì)替莫唑胺的IC50分別是148.0μM、84.31μM和51.6μM;單細(xì)胞克隆形成率分別為67.7%4-2.5%65.0%±3.0%和26.6%±2.1%(P0.05),而其20h的Transwell侵襲結(jié)果分別為61.3±3.2、42.0±3.1和25.6±3.7(P0.05)。 結(jié)論： BCL-2基因與U251細(xì)胞的惡性生物學(xué)特性相關(guān),并可導(dǎo)致其對(duì)替莫唑胺耐藥
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R739.41

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2332907